Genovis的SialEXO固定化用于復(fù)雜糖蛋白的去唾液酸化：在設(shè)置反應(yīng)條件時(shí)，需要在所需的反應(yīng)時(shí)間和完成反應(yīng)所需的酶量之間進(jìn)行權(quán)衡。較高的酶量可保證在更短的時(shí)間內(nèi)完成周轉(zhuǎn)，但會(huì)使下游分析復(fù)雜化。為了避免此類(lèi)問(wèn)題，我們以離心柱形式固定了活性SialEXO。這允許以更短的孵育時(shí)間孵育具有明顯更高量的唾液酸酶的糖蛋白底物。Genovis測(cè)試了 SialEXO 凍干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制劑上的性能。這種糖蛋白是一種具有挑戰(zhàn)性的底物，具有 6 個(gè) N- 和多達(dá) 26 個(gè) O-聚糖，由 α2,3 和 α2,6 連接的唾液酸修飾。對(duì)游離的N-聚糖的分析表明，SialEXO在溶液中完全脫唾液酸化，SialEXO固定化。Genovis測(cè)試了 SialEXO 凍干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制劑上的性能。四川瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)

Genovis的PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）是一種糖酰胺酶，可水解多肽天冬酰胺與所有哺乳動(dòng)物天冬酰胺連接復(fù)合物、雜交或高甘露糖寡糖的內(nèi)層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。該酶用于MS分析前的樣品制備，以降低蛋白質(zhì)異質(zhì)性并實(shí)現(xiàn)游離的聚糖分析，并研究N-聚糖的功能作用。1. 對(duì)所有哺乳動(dòng)物N-聚糖的高效水解；2.對(duì)多種糖蛋白具有活性；3.可固定在即用型離心柱產(chǎn)品形式；4. 自動(dòng)化友好型，96孔板，用于高通量 N-糖去除。Genovis的ImpaRATOR 是一種 O-糖依賴(lài)性蛋白酶，可消化攜帶粘蛋白型。O-聚糖的蛋白質(zhì)，包括唾液酸化物質(zhì)、糖基化絲氨酸和 Thr 殘基的 N-末端。該酶產(chǎn)生攜帶 O-糖的糖肽，從而實(shí)現(xiàn) O-糖譜分析、位點(diǎn)占用測(cè)定和 O-糖肽圖譜以及使用 LC-MS 分析的中級(jí)方法。1. 特異性廣 - 接受多種 O-聚糖變體，包括唾液酸化物種；2. 可靠O-聚糖特異性蛋白酶 – 消化絲氨酸/蘇氨酸糖基化位點(diǎn)的 N 末端；3. 穩(wěn)健的消化，增強(qiáng)復(fù)雜生物制藥的表征。遼寧N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究FucosEXO凍干劑以?xún)龈煞鄣男问教峁?，裝在2000單位的小瓶中，用于2mg糖蛋白的去碳基化。

為了證明Genovis的PNGase F凍干和PNGase F固定在各種底物上的去糖基化能力，用PNGase F凍干或PNGase F固定化處理了一系列糖蛋白。使用天然反應(yīng)條件在一小時(shí)內(nèi)有效去除曲妥珠單抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔單抗上的Fc-糖。當(dāng)加入RapiGest?并在變性條件下進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，西妥昔單抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分鐘內(nèi)完全去除，PNGase F固定化15分鐘內(nèi)完全去除。在變性反應(yīng)條件下，PNGase F 在 30 分鐘內(nèi)成功將更復(fù)雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用變性和還原反應(yīng)條件，將常用的糖蛋白標(biāo)準(zhǔn)品RNase B在10或15分鐘內(nèi)完全去糖基化，分別使用PNGase F凍干或PNGase F固定化。在天然和變性條件下生成的去糖基化樣品與LC-MS分析兼容。

GalactEXO中的酶來(lái)源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達(dá)。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成，均帶有His標(biāo)簽，組分的分子量為87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的凍干酶。Genovis的GalactEXO 凍干劑以?xún)龈煞鄣男问教峁?，裝在 2000 單位小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-連接的半乳糖。1. 用于方法開(kāi)發(fā)的靈活格式；2. 可以結(jié)合酶以提高效率； 3. 適用于自動(dòng)化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可！將混合物加載到GlycOCATCH上，洗滌樹(shù)脂，并用8M尿素洗脫結(jié)合的肽。純化后，在RP-LC-MS上分離樣品。數(shù)據(jù)顯示，糖苷酸肽的選擇性純化，攜帶he心1-O-聚糖。IgA 特異性 O-糖肽富集：IgA 抗體包含 N-連接的糖基化和重度 O-糖基化的鉸鏈區(qū)域。胰蛋白酶消化IgA后，將肽和genovis 的SialEXO的混合物加載到GlycOCATCH樹(shù)脂上，并用PBS和離心洗滌。用 8 M 尿素洗脫顯示預(yù)期的 O-糖基化鉸鏈肽富集，具有不同程度的糖基化。PNGase F Automation 含有以自動(dòng)化友好的 96 孔板形式凍干的 PNGase F 酶。

Genovis的PNGase F 是一種糖酰胺酶，可水解多肽天冬酰胺與所有哺乳動(dòng)物天冬酰胺連接復(fù)合物、雜交體或高甘露糖寡糖的內(nèi)層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。 在反應(yīng)過(guò)程中，從中去除聚糖的天冬酰胺殘基被脫酰胺為天冬氨酸。釋放的低聚糖完好無(wú)損，可用于進(jìn)一步分析。N-糖的去除被用于MS分析的樣品制備，以降低蛋白質(zhì)的異質(zhì)性，使游離的糖分析成為可能，并研究N-糖的功能作用。 該酶在大腸桿菌中表達(dá)，該重組基因來(lái)源于伊麗莎白金氏腦膜敗血癥。 評(píng)價(jià)抗體片段對(duì)完整蛋白聚集的影響。 IgG1 mAb1和mAb2在Biogen生產(chǎn)。 mAb1被糖基化，主要的糖型是具有0和1半乳糖的he心聚焦雙觸角聚糖(FA2和FA2G1); mAb2被糖基化。使用 GalactEXO 凍干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的轉(zhuǎn)變。湖北瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)

IgA 特異性O(shè)-糖肽富集：胰蛋白酶消化IgA。四川瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)

用于水解β1-3,4-連接半乳糖的固定化酶在離心柱中的糖蛋白上。Genovis的GalactEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的GalactEXO酶，用于糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的水解，而不會(huì)用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3. z終樣品中不含酶。GalactEXO 酶來(lái)源于 Akkermansia muciniphila 并重組表達(dá)，可有效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖。GalactEXO微離心柱經(jīng)過(guò)格式化，可在30-60分鐘內(nèi)水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。四川瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)