genvois的OpeRATOR 是一種內(nèi)切蛋白酶,可催化直接靠近 O-聚糖的天然粘蛋白型 O-糖基化蛋白的肽鍵的水解。內(nèi)切蛋白酶具有高特異性,可消化絲氨酸或蘇氨酸殘基的O-聚糖N端的蛋白質(zhì)。 OpeRATOR 活性需要粘蛋白型的 O-聚糖,并且該酶不會用 N-連接聚糖消化糖蛋白。該酶對具有亞洲化he心1 O-聚糖的位點z活躍。它還消化唾液酸化的he心 1 和he心 3,但程度要低得多。為了獲得z佳性能,需要去除唾液酸,因此,SialEXO凍干(唾液酸酶混合物)包含在購買中。 依那西普是一種 Fc 融合蛋白,具有高度 O-糖基化的鉸鏈區(qū)域。青海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶
α連接的Genovis的GalNAcs的水解:GalNAcEXO 是一種 α-N-乙酰半乳糖胺苷酶,可有效水解糖蛋白上的末端 GalNAc 殘基。與絲氨酸或蘇氨酸連接的 GalNAc(稱為 Tn 抗原)被 GalNAcEXO 快速有效地水解,并且該酶還在 α1-3 連接的末端 GalNAcs 上顯示出活性。Genovis的GalNAcEXO 是一種外α-N-乙酰半乳糖胺酶,用于有效水解與糖蛋白(Tn 抗原)中的絲氨酸或蘇氨酸殘基相連的 α-N-乙酰半乳糖胺 (GalNAc)。該酶還在 α1-3 連接的末端 GalNAc 上顯示活性。GalNAcEXO 在天然條件下水解糖蛋白上的 GalNAc,在 pH 值 6.0 至 7.6 范圍內(nèi)具有高度活性。青海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶ImpaRATOR處理的依那西普顯示出與相應(yīng)的去唾液酸化OpeRATOR處理樣品略有不同的消化模式。
SialEXO 2-3 在天然條件下水解糖蛋白,在 pH 值范圍為 7.0 至 9.0 時顯示出活性。該酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶具有 His 標(biāo)簽,分子量為 66 kDa。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式;2. 可以結(jié)合酶以提高用于離心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的SialEXO酶,用于糖蛋白的去唾液酸化,而不會被酶污染z終制劑。它水解天然糖蛋白上的唾液酸(α2-3、α2-6 和 α2-8)并釋放出聚糖。效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。
Genovis的SialEXO固定化用于復(fù)雜糖蛋白的去唾液酸化:在設(shè)置反應(yīng)條件時,需要在所需的反應(yīng)時間和完成反應(yīng)所需的酶量之間進行權(quán)衡。較高的酶量可保證在更短的時間內(nèi)完成周轉(zhuǎn),但會使下游分析復(fù)雜化。為了避免此類問題,我們以離心柱形式固定了活性SialEXO。這允許以更短的孵育時間孵育具有明顯更高量的唾液酸酶的糖蛋白底物。Genovis測試了 SialEXO 凍干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制劑上的性能。這種糖蛋白是一種具有挑戰(zhàn)性的底物,具有 6 個 N- 和多達(dá) 26 個 O-聚糖,由 α2,3 和 α2,6 連接的唾液酸修飾。對游離的N-聚糖的分析表明,SialEXO在溶液中完全脫唾液酸化,SialEXO固定化。用于糖蛋白去唾液酸化的凍干酶混合物SialEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 個單位的小瓶中。
使用Genovis的GalNAcEXO 對 O-糖基化生物制藥進行 Tn 抗原表征:未成熟的截短O-聚糖導(dǎo)致了復(fù)雜生物制藥的異質(zhì)性,使其分析更具挑戰(zhàn)性。 O-聚糖的he心由n-α-GalNAc殘基組成,通過糖苷鍵與絲氨酸或蘇氨酸連接,稱為Tn抗原。 現(xiàn)在,使用GalNAcEXO可以采用合適的酶策略來去除這些GalNAc并簡化生物制藥的表征。在質(zhì)譜圖中可以觀察到重復(fù)峰的模式。其次,在與GalNAcEXO酶孵育后,剩余的GalNAc殘基被完全去除,留下一個峰。因此,該工作流程確認(rèn)了 O-糖基化生物制藥上存在 Tn 抗原,并允許定量he心 GalNAc 水平。這種工作流程的另一個好處是減少了剩余的異質(zhì)性,這有助于確認(rèn)蛋白質(zhì)的完整質(zhì)量,并揭示截短的片段。而用其他巖藻糖酶處理部分去除巖藻糖或根本沒有去除。青海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶
連接的巖藻糖殘基,而對于非常復(fù)雜的樣品可能需要更長的孵育時間。青海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶
Genovis 是一家瑞典生物技術(shù)公司,自2010年起,為生物制藥公司提供SmartEnzymes?工具酶。Genovis提供一系列獨特、快速且易于使用的酶學(xué)工具,主要用于生物制藥行業(yè)和學(xué)術(shù)界。 我們在全球范圍內(nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?,用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁面”獲得更多應(yīng)用信息,如果您有興趣,可以和我們一起做一個“SmartStories”,也可以聯(lián)系我們。?青海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶
糖蛋白性能測試:O-聚糖的巖藻糖基化參與功能上重要的聚糖表位的合成,例如血型抗原和劉易斯結(jié)構(gòu)。分析用...
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【詳情】當(dāng)在完整狀態(tài)下進行分析時,EPO的聚糖異質(zhì)性導(dǎo)致了非常復(fù)雜的質(zhì)譜圖。通過在 37°C 下在 Omni...
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