一個(gè)美國客戶做了對照實(shí)驗(yàn),比較Benzonase和SAN HQ高鹽核酸酶純化病毒載體的效率。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下,HEK293細(xì)胞轉(zhuǎn)染及培養(yǎng)后,分別取了150Million的293細(xì)胞進(jìn)行裂解,分別在各自適宜的條件下(即SAN HQ組反應(yīng)條件為500mM鹽濃度,而Benzonase組反應(yīng)條件是150mM鹽濃度)加入等量的酶(0、2kU、3kU、4kU、5kU、6kU),37°孵育1hr,加入Picogreen染料后檢測DNA的殘留量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),SAN HQ高基因療法制造商面臨的挑戰(zhàn)與抗體療法剛出現(xiàn)時(shí)單克隆抗體制造商面臨的挑戰(zhàn)相似。例如,在生產(chǎn)、儲存和處理過程中,單克隆抗體也會受到低滴度、產(chǎn)品和工藝相關(guān)雜質(zhì)和降解的挑戰(zhàn)。盡管與重組單克隆抗體相比,單劑量AAV產(chǎn)品與工藝相關(guān)雜質(zhì)相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)可能更低(取決于雜質(zhì)的類型、劑量和給藥途徑),但這也不能忽視。由于這些相似性,制藥商、化學(xué)品和輔料供應(yīng)商有機(jī)會進(jìn)行合作,并開發(fā)創(chuàng)新的解決方案,以實(shí)現(xiàn)穩(wěn)健和成本效益高的AAV產(chǎn)品生產(chǎn)。鹽核酸酶組用更少的酶得到了更好的去除效果(即2kU的SAN HQ消化結(jié)果明顯優(yōu)于6kU的Benzonase),且SAN HQ的高純化效率是非血清型依賴的。ArcticZymes Technologies的研發(fā)基于北極海洋區(qū)的自然資源。海南哪些高鹽核酸酶
ArcticZymes Technologies致力于提供高質(zhì)量產(chǎn)品,具有良好的批間一致性、穩(wěn)定可靠的質(zhì)量、及時(shí)的文件及技術(shù)支持。ArcticZymes所有產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)及銷售等都符合ISO13485:2016質(zhì)量管理體系標(biāo)準(zhǔn);鑒于生物制品更嚴(yán)格的質(zhì)控要求,廠家對鹽活性核酸酶系列產(chǎn)品(Salt Active Nucleases,SANs)的生產(chǎn)及質(zhì)控,在符合ISO13485:2016體系基礎(chǔ)上,增加了cGMP相應(yīng)要求,如生產(chǎn)用原輔料是Non-animal和Non-plant來源的,終產(chǎn)品經(jīng)過0.22μm過濾sterilization,放行檢測包括microbes、fungus及內(nèi)毒檢測等,所有標(biāo)準(zhǔn)符合USP-EP要求。青海在線高鹽核酸酶量大優(yōu)惠ArcticZymes所有產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)及銷售等都符合ISO13485:2016質(zhì)量管理體系標(biāo)準(zhǔn)。
跟其他類型的核酸酶一樣,SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶的滅活方法有很多,分為可逆滅活及不可逆滅活。金屬離子螯合劑如EDTA會可逆抑制兩者的活性,加入的EDTA濃度一般是溶液中Mg2+濃度的2倍左右即可完全抑制活性;后續(xù)補(bǔ)加過量的Mg2+即可恢復(fù)核酸酶活性。加熱、還原劑(如DTT)、咪唑、甘油及表面活性劑(如高于15%濃度的Triton X-100、SDS、尿素等)等都可以使其不可逆失活。在生物工藝流程,需要結(jié)合上下游應(yīng)用需要選擇合適的方法去除或滅活核酸酶。
目前基因藥物領(lǐng)域常用的病毒載體有腺病毒、慢病毒、重組腺相關(guān)病毒(rAAV)以及逆轉(zhuǎn)錄病du等,其中AAV因其免疫原性極低、安全性高、宿主細(xì)胞范圍廣、擴(kuò)散能力強(qiáng)、表達(dá)穩(wěn)定以及特異性強(qiáng)等優(yōu)勢脫穎而出。據(jù)NIH統(tǒng)計(jì),已有超過200個(gè)正在進(jìn)行或已完成的基因藥物臨床試驗(yàn)使用rAAV載體。盡管rAAV基因藥物已顯示出巨大的前景,但是強(qiáng)大、穩(wěn)健而且可放大的基因載體生產(chǎn)制造工藝一直是CGT行業(yè)的痛點(diǎn)。目前rAAV生產(chǎn)平臺主要有三種:三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)體系(TransientTransfection, TT)、桿狀病毒表達(dá)載體體系(Baculovirusexpression vector,BEV)和包裝細(xì)胞體系(Packaging/Producercell line,PCL)。黃山高鹽核酸酶服務(wù)哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
三種AAV載體的生產(chǎn)體系(三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)體系、桿狀病毒表達(dá)載體體系以及包裝細(xì)胞體系) 中都會出現(xiàn)三種衣殼:完整衣殼(full capsid)、部分衣殼(partial capsid),和空衣殼(empty capsid)。其中完整衣殼包含正確的DNA序列,是人們所期待的產(chǎn)品;部分衣殼和空衣殼包含部分不包含目的基因,屬于生產(chǎn)中的雜質(zhì),約占細(xì)胞生產(chǎn)的總AAV顆粒的50%-90%??找職?部分衣殼有如下幾種危害:1), 影響產(chǎn)品的純度,2), 增加終產(chǎn)品的免疫原性,3), 與完整衣殼競爭infection細(xì)胞上的載體結(jié)合受體,抑制完整衣殼的轉(zhuǎn)導(dǎo),4),增加總體病毒載量。部分衣殼與空衣殼地存在嚴(yán)重地影響了AAV產(chǎn)品的安全性和有效性,因此監(jiān)管機(jī)構(gòu)強(qiáng)烈建議在整個(gè)生產(chǎn)過程中監(jiān)控空/完整衣殼比(空殼率)。衢州高鹽核酸酶價(jià)格哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。甘肅進(jìn)口高鹽核酸酶用途
SAN HQ是生物工藝流程中去除核酸污染的理想選擇。海南哪些高鹽核酸酶
ArcticZymes Technologies提供獨(dú)特特性的鹽活性核酸酶(Salt Active Nucleases,SANs)系列產(chǎn)品,主要包含SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶。這兩款酶都是非特異核酸內(nèi)切酶,跟Benzonase一樣能高效降解任何形式(雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀)的DNA和RNA;都來自于深海microbes,通過Pichia pastoris發(fā)酵生產(chǎn)得到。這兩款酶的區(qū)別在于發(fā)揮酶活的適宜鹽濃度不同,——M-SAN HQ中鹽核酸酶的適宜鹽濃度在175mM-250mM,而SAN HQ高鹽核酸酶的適宜鹽濃度在400mM-600mM。海南哪些高鹽核酸酶
一個(gè)美國客戶做了對照實(shí)驗(yàn),比較Benzonase和SAN HQ高鹽核酸酶純化病毒載體的效率。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)...
【詳情】殘留的宿主DNA是生產(chǎn)中產(chǎn)生的雜質(zhì),其存在潛在的致瘤性、傳染性和免疫原性等風(fēng)險(xiǎn)。相關(guān)研究表明,基因的...
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【詳情】綜合腺相關(guān)病毒AAV制備的三個(gè)工藝階段介紹,可以看出下游處理可以占病毒生產(chǎn)總成本的很大一部分,而且難...
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