膜片鉗實驗中電極制備之分兩次拉制,首先次拉長7~10mm,直徑小于200μm,在此基礎(chǔ)上進行第二次拉制,較終使尖銳端的直徑為1~2μm,兩步拉制的目的主要是使電極前端的錐度變大,狹窄部長度縮短,因此可降低電極的串聯(lián)電阻,也可減少全細(xì)胞記錄時的電極液透析時間。由于膜片微電極較忌沾染灰塵和臟物,更忌觸碰尖銳端附近部位,所以一般要求在使用前制作。拋光:將電極固定于顯微鏡工作臺上,在鏡下將尖銳端靠近加熱絲,當(dāng)通電加熱時,可見電極尖銳端微微回縮,此時電極變得光滑,且尖銳端的雜質(zhì)燒去,得到較干凈的表面。從而有利于和細(xì)胞膜緊密封接,并在封接后更易保持穩(wěn)定。膜片鉗使用操作注意:禁止私拉電線,如有實驗要求可與老師及時溝通。杭州神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)哪家好
膜片鉗技術(shù)及其應(yīng)用:它是作者在\"膜片鉗技術(shù)及其應(yīng)用\"領(lǐng)域所進行的研究工作的總結(jié),同時也吸取了國際上的先進技術(shù)和新近的研究成果。內(nèi)容包括:細(xì)胞電生理與膜片鉗技術(shù),膜片鉗系統(tǒng)的組建及實驗技術(shù)概要,膜片鉗放大器原理與低噪聲設(shè)計,單通道和全細(xì)胞電流記錄技術(shù),數(shù)據(jù)采集和分析,細(xì)胞分泌活動的膜電容監(jiān)測技術(shù)和安培測量技術(shù),細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的測量及鈣庫特性,腦切片膜片鉗技術(shù),心肌細(xì)胞的藥理特性和植物細(xì)胞的離子通道特性。常州細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):擴展功能多。配套擴展設(shè)備豐富,如內(nèi)灌流系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等。
膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)的數(shù)據(jù)如何處理:1.內(nèi)面向外式膜片細(xì)胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細(xì)胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對通道活動的影響。但實驗中難以改變膜外側(cè)物質(zhì),且需浸于低鈣液中。常用于研究依賴細(xì)胞內(nèi)鈣的離子通道,如鈣敏感的鉀通道,還可用于細(xì)胞內(nèi)和第二信使與通道的調(diào)節(jié)作用。2.外面向外式膜片能接觸膜的兩側(cè),可以任意改變膜外物質(zhì)的濃度,有利于研究離子、遞質(zhì)對膜外表面的作用,多用于研究細(xì)胞膜外側(cè)受體控制的離子通道。這些受體直接作用于離子通道,而不需經(jīng)過第二信使系統(tǒng)。因細(xì)胞外液容易更換,故加藥方便。缺陷是實驗中難以改變胞內(nèi)成分,而且電極管內(nèi)必須充以低鈣液。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:細(xì)胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。
膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞式與細(xì)胞吸附式的區(qū)別:全細(xì)胞式記錄這個名字乍聽上去好像和細(xì)胞吸附式?jīng)]啥兩樣,無非就是把電極戳在細(xì)胞上然后記錄它的電活動。但事實是,這兩者存在天壤之別。首先的一大區(qū)別體現(xiàn)在外部構(gòu)型上:在cell-attached的記錄中,我們不需要用電極戳破細(xì)胞膜,只需將其懟在細(xì)胞膜上即可;但在whole-cell的記錄中,我們不只要將電極懟進細(xì)胞膜內(nèi),而且還不能懟得過深或過淺,否則你就無法記錄到有用的電信號。概括一下就是,要形成全細(xì)胞記錄必須打破細(xì)胞膜,但由于這個操作比較厲害,所以要破膜時請相信玄學(xué)。其次,第二大區(qū)別在電阻補償上:在cell-attached的記錄中,由于我們無需打通細(xì)胞內(nèi)外膜,因此細(xì)胞膜上的各種離子通道或蛋白質(zhì)就沒有串聯(lián)在電路當(dāng)中,但是在whole-cell中,串聯(lián)電阻(Rs)就存在了,因此軟件輸出的命令電壓也就不等于細(xì)胞的跨膜電位,故我們需要對其進行補償。這些注意事項包括:電極電容及細(xì)胞膜電容補償問題,漏電流問題,液接電位的校正問題,空間鉗位問題,細(xì)胞內(nèi)容物被電擊內(nèi)液稀釋問題,電極內(nèi)液的成分問題等。膜片鉗使用操作注意:不得在本機電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時需用實驗室配置的U盤。
膜片鉗實驗常見問題及解決方法:膜片鉗實驗難度大、技術(shù)要求高,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實驗數(shù)據(jù)中,經(jīng)過處理和分析,得出有意義、有價值的結(jié)果和結(jié)論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液,如何選擇阻斷劑、激動劑,如何進行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問題,還需在科研實踐中不斷地探索和解決。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):外灌流時間常數(shù):~200ms;內(nèi)灌流時間常數(shù):~2s。杭州細(xì)胞生物學(xué)電生理膜片鉗網(wǎng)站
膜片鉗使用操作注意:電腦里面的軟件不得隨意刪改。杭州神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)哪家好
膜片鉗芯片技術(shù)是繼細(xì)胞芯片之后的又一種嶄新的分析細(xì)胞電生理參數(shù)的芯片技術(shù).由于該芯片除了具有傳統(tǒng)膜片鉗的高分辨和高準(zhǔn)確性特點外,還具有高通量、自動化以及細(xì)胞多通道參數(shù)和細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)參數(shù)在線和實時檢測等優(yōu)點.因此,該芯片技術(shù)將很大促進細(xì)胞離子通道、細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)傳導(dǎo)以及藥物篩選的研究和應(yīng)用.文中具體介紹了膜片鉗芯片技術(shù)的發(fā)展及其應(yīng)用,結(jié)合作者的研究工作,著重介紹了膜片鉗芯片技術(shù)在味覺細(xì)胞研究的比較新進展,并結(jié)合神經(jīng)芯片研究細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)的方法,對采用膜片鉗芯片技術(shù)在細(xì)胞和分子水平上研究味覺的敏感機理和傳導(dǎo)機制的應(yīng)用前景進行了展望。杭州神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)哪家好
上海司鼎生物科技有限公司專注技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā),發(fā)展規(guī)模團隊不斷壯大。一批專業(yè)的技術(shù)團隊,是實現(xiàn)企業(yè)戰(zhàn)略目標(biāo)的基礎(chǔ),是企業(yè)持續(xù)發(fā)展的動力。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括:免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為本的經(jīng)營宗旨,深受客戶好評。公司深耕免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù),正積蓄著更大的能量,向更廣闊的空間、更寬泛的領(lǐng)域拓展。
膜片鉗在通道研究中的重要作用:用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型,并能在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進一步計算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開放概率,還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物質(zhì)對離子通道開閉及通道電流的影響等。同時用于研究細(xì)胞信號的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機制。結(jié)合分子克隆和定點突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于離子通道分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能關(guān)系的研究。膜片鉗技術(shù)可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細(xì)菌離子通道。嘉興全自動腦片膜片鉗網(wǎng)站一種提高膜片鉗實驗效率的方法與流程:膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜上離子通...