全細(xì)胞膜片鉗模式下有電壓鉗記錄和電流鉗記錄兩種。電壓鉗記錄的原理與電壓鉗技術(shù)相似,但有所不同:首先,全細(xì)胞電壓鉗記錄只使用單根電極,但在電學(xué)效果上同時實(shí)現(xiàn)了電壓鉗制和電流記錄。其次,電壓鉗記錄的電極不細(xì)胞,對細(xì)胞造成的損傷較小,因而能用于小細(xì)胞如神經(jīng)元的研究。電流鉗記錄則是通過鉗制電極電流來測量膜電位。電流鉗在本質(zhì)上也是電壓鉗位,它將差分放大器的輸出電流與指令電流相比較,然后將這個差動輸出施加到放大器前級的倒相端,通過高速反饋使得同相端的電壓與其相等,無論電極電流是否為零,都能從輸出電壓得到膜電位的準(zhǔn)確數(shù)值。膜片鉗的應(yīng)用:與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道。寧波神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄服務(wù)
膜片鉗技術(shù)與其他生物檢測技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用:1.膜片鉗與光學(xué)顯微成像技術(shù)結(jié)合應(yīng)用:利用激光掃描共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術(shù)可以對細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時成像研究,將膜片鉗技術(shù)與光學(xué)顯微成像技術(shù)結(jié)合使用不但可以檢測細(xì)胞的電流變化情況,而且還可以對細(xì)胞的電信號傳遞活動進(jìn)行成像觀察。2.膜片鉗與原子力顯微鏡結(jié)合應(yīng)用:將膜片鉗和AFM結(jié)合使用的技術(shù)可以提高細(xì)胞電生理檢測的分辨率和靈敏度;而且,在獲得細(xì)胞電生理信息的同時,還能獲取細(xì)胞的生物力學(xué)性質(zhì),從而更很全地研究細(xì)胞的生理功能。金華全自動膜片鉗技術(shù)技術(shù)膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇。
膜片鉗技術(shù)的工作原理:膜片鉗技術(shù)是用于了解離了通道行為的通用型電生理工具,首先用微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細(xì)胞膜,然后以千兆歐姆以上的阻抗使電極尖銳端與細(xì)胞膜封接,通過吸破或者電破的方式使與電極尖開口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域與其周圍區(qū)域在電學(xué)上分隔,然后細(xì)胞膜破裂,進(jìn)而對此區(qū)域上的離子通道的離子電流進(jìn)行監(jiān)測記錄的方法。該方法普遍應(yīng)用于神經(jīng)細(xì)胞,肌纖維細(xì)胞,心肌細(xì)胞及高表達(dá)單一通道的卵母細(xì)胞。主要用于監(jiān)測離子通道在正?;蛘呒膊顟B(tài)下如何表現(xiàn),以及不同藥物、離子或其他分析物如何改變這些狀態(tài)。膜片鉗技術(shù)的建立,對生物科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一項具有重大意義的變革。這是一種通過離子通道記錄的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的(或多個)的離子通道活動的技術(shù)。該技術(shù)的出現(xiàn)將生理學(xué)的細(xì)胞水平和分子水平聯(lián)系在一起,又將神經(jīng)科學(xué)的不同亞科融匯在一起,促進(jìn)了各個學(xué)科之間的聯(lián)系,加速了我們神經(jīng)科學(xué)的研究進(jìn)展,深入探討神經(jīng)活動的機(jī)制研究。
膜片鉗技術(shù)基本原理與特點(diǎn):又由于玻璃微電極管徑很小,其下膜面積光約1 μm2,在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少,一般只有一個或幾個通道,經(jīng)這一個或幾個通道流出的離子數(shù)量相對于整個細(xì)胞來講很少,可以忽略,也就是說電極下的離子電流對整個細(xì)胞的靜息電位的影響可以忽略,那么,只要保持電極內(nèi)電位不變,則電極下的一小片細(xì)胞膜兩側(cè)的電位差就不變,從而實(shí)現(xiàn)電位固定另外,高阻封接技術(shù)還很大降低了電流記錄的背景噪聲,從而戲劇性地提高了時間、空間及電流分辨率,如時間分辨率可達(dá)10 μs、空間分辨率可達(dá)1平方微米及電流分辨率可達(dá)10-12 A。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:在神經(jīng)科學(xué)中的研究。
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細(xì)胞模式的胞質(zhì)滲漏問題,有學(xué)者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細(xì)胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導(dǎo)電性孔道,借此對全細(xì)胞膜電流進(jìn)行記錄。由于此模式的胞質(zhì)滲漏極為緩慢,局部串聯(lián)阻抗較常規(guī)全細(xì)胞模式高,所以鉗制速度很慢,也稱為緩慢全細(xì)胞模式。它適合于小細(xì)胞的電壓鉗位,對于直徑大于30μm的細(xì)胞很難實(shí)現(xiàn)鉗位。不足之處是由于電極與細(xì)胞間交換快,細(xì)胞內(nèi)環(huán)境很容易破壞,因此記錄所用的電極液應(yīng)與胞漿主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的緩沖成分和能量代謝所需的物質(zhì)。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):藥液交換非常迅速,作用時間快。常州神經(jīng)生物學(xué)腦片膜片鉗研究方案
全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):外灌流時間常數(shù):~200ms;內(nèi)灌流時間常數(shù):~2s。寧波神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄服務(wù)
膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞式與細(xì)胞吸附式的區(qū)別:全細(xì)胞式記錄這個名字乍聽上去好像和細(xì)胞吸附式?jīng)]啥兩樣,無非就是把電極戳在細(xì)胞上然后記錄它的電活動。但事實(shí)是,這兩者存在天壤之別。首先的一大區(qū)別體現(xiàn)在外部構(gòu)型上:在cell-attached的記錄中,我們不需要用電極戳破細(xì)胞膜,只需將其懟在細(xì)胞膜上即可;但在whole-cell的記錄中,我們不只要將電極懟進(jìn)細(xì)胞膜內(nèi),而且還不能懟得過深或過淺,否則你就無法記錄到有用的電信號。概括一下就是,要形成全細(xì)胞記錄必須打破細(xì)胞膜,但由于這個操作比較厲害,所以要破膜時請相信玄學(xué)。其次,第二大區(qū)別在電阻補(bǔ)償上:在cell-attached的記錄中,由于我們無需打通細(xì)胞內(nèi)外膜,因此細(xì)胞膜上的各種離子通道或蛋白質(zhì)就沒有串聯(lián)在電路當(dāng)中,但是在whole-cell中,串聯(lián)電阻(Rs)就存在了,因此軟件輸出的命令電壓也就不等于細(xì)胞的跨膜電位,故我們需要對其進(jìn)行補(bǔ)償。這些注意事項包括:電極電容及細(xì)胞膜電容補(bǔ)償問題,漏電流問題,液接電位的校正問題,空間鉗位問題,細(xì)胞內(nèi)容物被電擊內(nèi)液稀釋問題,電極內(nèi)液的成分問題等。寧波神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄服務(wù)
上海司鼎生物科技有限公司是一家從事免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)研發(fā)、生產(chǎn)、銷售及售后的服務(wù)型企業(yè)。公司坐落在放鶴路1088號,成立于2016-06-07。公司通過創(chuàng)新型可持續(xù)發(fā)展為重心理念,以客戶滿意為重要標(biāo)準(zhǔn)。公司主要經(jīng)營免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)等產(chǎn)品,產(chǎn)品質(zhì)量可靠,均通過醫(yī)藥健康行業(yè)檢測,嚴(yán)格按照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。目前產(chǎn)品已經(jīng)應(yīng)用與全國30多個省、市、自治區(qū)。上海司鼎生物科技有限公司研發(fā)團(tuán)隊不斷緊跟免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)行業(yè)發(fā)展趨勢,研發(fā)與改進(jìn)新的產(chǎn)品,從而保證公司在新技術(shù)研發(fā)方面不斷提升,確保公司產(chǎn)品符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和要求。上海司鼎生物科技有限公司注重以人為本、團(tuán)隊合作的企業(yè)文化,通過保證免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)產(chǎn)品質(zhì)量合格,以誠信經(jīng)營、用戶至上、價格合理來服務(wù)客戶。建立一切以客戶需求為前提的工作目標(biāo),真誠歡迎新老客戶前來洽談業(yè)務(wù)。
膜片鉗在通道研究中的重要作用:用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型,并能在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進(jìn)一步計算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開放概率,還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物質(zhì)對離子通道開閉及通道電流的影響等。同時用于研究細(xì)胞信號的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機(jī)制。結(jié)合分子克隆和定點(diǎn)突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于離子通道分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能關(guān)系的研究。膜片鉗技術(shù)可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細(xì)菌離子通道。嘉興全自動腦片膜片鉗網(wǎng)站一種提高膜片鉗實(shí)驗效率的方法與流程:膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜上離子通...