膜片鉗技術(shù)之全細胞記錄的實驗流程：（1）仔細檢查實驗系統(tǒng)各儀器間的線路連接。（2）依次打開各儀器的電源開關(guān)和實驗軟件，檢查各參數(shù)的初始設(shè)置。（3）將樣品置于倒置顯微鏡的載物臺上。（4）電極安裝。（5）偏移電位的補償和電極電阻的測定：在微操縱器控制下使微電極進入浴液，電流基線通常會立刻漂離零位，若此時處于VC模式，在維持電壓為零時，通過調(diào)節(jié)偏移電位補償，使電流基線等于零，此時可見基線上疊加有響應(yīng)電流方波。（6）細胞封接。（7）電極電容補償：若無特殊要求，一般將保持電位設(shè)為受試細胞靜息電位平均值。膜片鉗使用操作注意：封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。連云港全自動離子通道原理

膜片鉗技術(shù)操作方法：開始封接:調(diào)低微操步進速度，使電極尖銳端慢慢向細胞靠近，如發(fā)現(xiàn)基線方波突然變小，封接電阻上升時，即停止電極下降，通過注射器給電極負壓，封接成功的可見方波很快變小，電阻升至G歐。此時，調(diào)節(jié)快電容補償按鈕，將快電容電流補償?shù)?，如封接穩(wěn)定后，準(zhǔn)備破膜。破膜:在鉗制電位水平-60mV時，漏電流<20pA，給予比較大的負壓(也可根據(jù)情況使用ZAP電破方式破膜)，將要破時可見基線上下浮動，破后，可見基線前后有兩個較大的慢電容電流。南京醫(yī)學(xué)膜片鉗全細胞記錄應(yīng)用全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。

膜片鉗使用的注意事項：工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實驗技術(shù)。它的基本原理是以一個光潔，直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細胞的膜接觸，之后對微電極另一端開口處施加適當(dāng)?shù)呢搲河秒姌O的纖細開口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入，如此在微電極開口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會形成緊密的封接，它的電阻能夠達到數(shù)個或數(shù)十個千兆歐，這世界上就是在化學(xué)上完全隔離了吸附在微電極開口處的那一片膜同膜的其余部分，通過微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關(guān)聯(lián)。

膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細胞模式的胞質(zhì)滲漏問題,有學(xué)者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導(dǎo)電性孔道,借此對全細胞膜電流進行記錄。由于此模式的胞質(zhì)滲漏極為緩慢,局部串聯(lián)阻抗較常規(guī)全細胞模式高,所以鉗制速度很慢,也稱為緩慢全細胞模式。它適合于小細胞的電壓鉗位,對于直徑大于30μm的細胞很難實現(xiàn)鉗位。不足之處是由于電極與細胞間交換快,細胞內(nèi)環(huán)境很容易破壞,因此記錄所用的電極液應(yīng)與胞漿主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的緩沖成分和能量代謝所需的物質(zhì)。膜片鉗的應(yīng)用：在通道電流記錄中，可分別于不同時間、不同部位施加各種濃度的藥物來研究。

膜片鉗技術(shù)—打開細胞電生理研究之門：膜片鉗技術(shù)（patchclamptechniques）是采用鉗制電壓或電流的方法對生物膜上離子通道的電活動進行記錄的微電極技術(shù)。膜片鉗技術(shù)的原理：用一個尖銳端直徑在1.5-3.0um的玻璃微電極接觸細胞膜表面，通過負壓吸引使電極尖銳端與細胞膜之間形成千兆歐姆以上的阻抗封接，此時電極尖銳端下的細胞膜小區(qū)域（膜片,patch）與其周圍在電學(xué)上分隔，在此基礎(chǔ)上固定（鉗制,Clamp）電位，對此膜片上的離子通道的離子電流進行監(jiān)測及記錄。膜片鉗的應(yīng)用：與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道。南京醫(yī)學(xué)膜片鉗全細胞記錄應(yīng)用

膜片鉗使用操作注意：電熱加熱線溫度很高，在使用時注意避免燙傷。連云港全自動離子通道原理

膜片鉗電生理記錄技術(shù)：膜片鉗技術(shù)的基本原理：膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級，因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位，測量單個離子通道開放產(chǎn)生的微小電流，這種通道的開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放的電流幅值分布、開放概率、開放壽命分布等功能參數(shù)，并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。將該部分細胞采用負壓吸破，可以形成比較常見的全細胞記錄模式，可以研究整個細胞的生理功能和離子通道電生理功能。連云港全自動離子通道原理

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