膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)記錄的幾種形式:全細(xì)胞記錄構(gòu)型(whole-cell recording) 高阻封接形成后,繼續(xù)以負(fù)壓抽吸使電極管內(nèi)細(xì)胞膜破裂,電極胞內(nèi)液直接相通,而與浴槽液絕緣,這種形式稱為“全細(xì)胞”記錄。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄,或?qū)⒉9苓B到標(biāo)準(zhǔn)高阻微電極放大器上記錄。在電壓鉗條件下記錄到的大細(xì)胞全細(xì)胞電流可達(dá)nA級(jí),全細(xì)胞鉗的串聯(lián)電阻(玻管和細(xì)胞內(nèi)部之間的電阻)應(yīng)當(dāng)補(bǔ)償。任何流經(jīng)膜的電流均流經(jīng)這一電阻,所引起的電壓降將使玻管電壓不同于細(xì)胞內(nèi)的真正電位。電流愈大,愈需對(duì)串聯(lián)電阻進(jìn)行補(bǔ)償。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:對(duì)單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究。嘉興神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄研究方案
膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞式與細(xì)胞吸附式的區(qū)別:全細(xì)胞式記錄這個(gè)名字乍聽上去好像和細(xì)胞吸附式?jīng)]啥兩樣,無非就是把電極戳在細(xì)胞上然后記錄它的電活動(dòng)。但事實(shí)是,這兩者存在天壤之別。首先的一大區(qū)別體現(xiàn)在外部構(gòu)型上:在cell-attached的記錄中,我們不需要用電極戳破細(xì)胞膜,只需將其懟在細(xì)胞膜上即可;但在whole-cell的記錄中,我們不只要將電極懟進(jìn)細(xì)胞膜內(nèi),而且還不能懟得過深或過淺,否則你就無法記錄到有用的電信號(hào)。概括一下就是,要形成全細(xì)胞記錄必須打破細(xì)胞膜,但由于這個(gè)操作比較厲害,所以要破膜時(shí)請(qǐng)相信玄學(xué)。其次,第二大區(qū)別在電阻補(bǔ)償上:在cell-attached的記錄中,由于我們無需打通細(xì)胞內(nèi)外膜,因此細(xì)胞膜上的各種離子通道或蛋白質(zhì)就沒有串聯(lián)在電路當(dāng)中,但是在whole-cell中,串聯(lián)電阻(Rs)就存在了,因此軟件輸出的命令電壓也就不等于細(xì)胞的跨膜電位,故我們需要對(duì)其進(jìn)行補(bǔ)償。這些注意事項(xiàng)包括:電極電容及細(xì)胞膜電容補(bǔ)償問題,漏電流問題,液接電位的校正問題,空間鉗位問題,細(xì)胞內(nèi)容物被電擊內(nèi)液稀釋問題,電極內(nèi)液的成分問題等。湖州醫(yī)學(xué)電生理膜片鉗原理膜片鉗使用操作注意:在儀器使用以前及使用之后按按照使用時(shí)長(zhǎng)做好登記工作。
膜片鉗的應(yīng)用:對(duì)單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究:將膜片鉗技術(shù)與單細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)欠磻?yīng)技術(shù)結(jié)合,在全細(xì)胞膜片鉗記錄下,將單細(xì)胞內(nèi)容物或整個(gè)細(xì)胞(包括細(xì)胞膜)吸入電極中,將細(xì)胞內(nèi)存在的各種mRNA全部快速逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,再經(jīng)常規(guī)PCR擴(kuò)增及待檢的特異mRNA的檢測(cè),借此可對(duì)形態(tài)相似而電活動(dòng)不同的結(jié)果做出分子水平的解釋或?yàn)閱渭?xì)胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)提供標(biāo)本,為同一結(jié)構(gòu)中形態(tài)非常相似但功能不同的事實(shí)提供分子水平的解釋。
膜片鉗電生理技術(shù)的樣本種類:從較早的肌細(xì)胞、神經(jīng)元和內(nèi)分泌細(xì)胞發(fā)展到血細(xì)胞、肝細(xì)胞、耳蝸毛細(xì)胞、胃壁細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、精母細(xì)胞等多種細(xì)胞;從急性分散細(xì)胞和培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)展到組織片乃至整體動(dòng)物;從蝸牛、青蛙、蠑螈、爪蟾母細(xì)胞發(fā)展到雞細(xì)胞、大鼠細(xì)胞、人細(xì)胞等;從動(dòng)物細(xì)胞發(fā)展到細(xì)菌及植物細(xì)胞。此外,膜片鉗技術(shù)還普遍地應(yīng)用到平面雙分子層(planarbilayer)、脂質(zhì)體(liposome)等人工標(biāo)本上。研究對(duì)象:從對(duì)離子通道(配體門控性離子通道、電壓門控性離子通道、第二信使介導(dǎo)的離子通道、機(jī)械敏感性離子通道及縫隙連接通道等)的研究發(fā)展到對(duì)離子泵、交換體及可興奮細(xì)胞的胞吞、胞吐機(jī)制的研究等。膜片鉗電極已不單單是傳統(tǒng)意義上的電信號(hào)記錄電極,它還可作為其他研究方法的工具使用,如用于進(jìn)行單細(xì)胞PCR技術(shù)時(shí)的細(xì)胞內(nèi)容物抽吸。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:對(duì)藥物作用機(jī)制的研究。
膜片鉗在通道研究中的重要作用:用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時(shí)程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時(shí)可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型,并能在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進(jìn)一步計(jì)算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開放概率,還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物質(zhì)對(duì)離子通道開閉及通道電流的影響等。同時(shí)用于研究細(xì)胞信號(hào)的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機(jī)制。結(jié)合分子克隆和定點(diǎn)突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于離子通道分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能關(guān)系的研究。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):換液時(shí)應(yīng)時(shí)刻觀察浴槽,防止液面過低或液體溢出污染鏡頭。湖州藥理學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄設(shè)計(jì)公司
全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):操作簡(jiǎn)單,全過程可自動(dòng)化。嘉興神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄研究方案
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:全細(xì)胞式膜片方式使細(xì)胞內(nèi)與浴槽之間的漏流極少。電極本身阻抗(1~10mω)與細(xì)胞封接后的阻抗相比較低,這種低接觸阻抗使單管電壓鉗容易實(shí)現(xiàn)。電極管內(nèi)與細(xì)胞之間彌散交換與平衡快,因而容易控制細(xì)胞內(nèi)液的成分。細(xì)胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。如果有目的地將膜電位鉗制在某一程度,可做到選擇性抑制某些通道的活性而只記錄某種通道電流的總和,并可在同一細(xì)胞上觀察幾種不同通道的情況。通過改變內(nèi)部介質(zhì),如改變電極液成分,或在電極液中加入所需藥物,通過滲透很快改變胞漿成分并達(dá)到平衡,該手段在全細(xì)胞記錄中廣泛應(yīng)用。嘉興神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄研究方案
上海司鼎生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、咨詢、規(guī)劃、銷售、服務(wù)于一體的服務(wù)型企業(yè)。公司成立于2016-06-07,多年來在免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)行業(yè)形成了成熟、可靠的研發(fā)、生產(chǎn)體系。在孜孜不倦的奮斗下,公司產(chǎn)品業(yè)務(wù)越來越廣。目前主要經(jīng)營(yíng)有免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)等產(chǎn)品,并多次以醫(yī)藥健康行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、客戶需求定制多款多元化的產(chǎn)品。我們以客戶的需求為基礎(chǔ),在產(chǎn)品設(shè)計(jì)和研發(fā)上面苦下功夫,一份份的不懈努力和付出,打造了司鼎;OriCell產(chǎn)品。我們從用戶角度,對(duì)每一款產(chǎn)品進(jìn)行多方面分析,對(duì)每一款產(chǎn)品都精心設(shè)計(jì)、精心制作和嚴(yán)格檢驗(yàn)。上海司鼎生物科技有限公司嚴(yán)格規(guī)范免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)產(chǎn)品管理流程,確保公司產(chǎn)品質(zhì)量的可控可靠。公司擁有銷售/售后服務(wù)團(tuán)隊(duì),分工明細(xì),服務(wù)貼心,為廣大用戶提供滿意的服務(wù)。
膜片鉗在通道研究中的重要作用:用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時(shí)程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時(shí)可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型,并能在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進(jìn)一步計(jì)算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開放概率,還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物質(zhì)對(duì)離子通道開閉及通道電流的影響等。同時(shí)用于研究細(xì)胞信號(hào)的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機(jī)制。結(jié)合分子克隆和定點(diǎn)突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于離子通道分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能關(guān)系的研究。膜片鉗技術(shù)可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細(xì)菌離子通道。嘉興全自動(dòng)腦片膜片鉗網(wǎng)站一種提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的方法與流程:膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜上離子通...