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企業(yè)商機
膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)基本參數(shù)
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膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)企業(yè)商機

腦片膜片鉗實驗全細胞記錄:用可視化膜片鉗尋找清楚、且表面光滑、折光性較好的突觸后神經(jīng)元。在加了正壓后,將記錄電極移入腦片視野中,并接近事先選好的神經(jīng)元,然后,調(diào)整電極與神經(jīng)元的相對位置,利用負壓形成穩(wěn)定的高阻封接。用短簇的脈沖負壓使細胞破膜,穩(wěn)定2~3分鐘,觀察封接測試波形起始段與基線間的差值是否在100pA以內(nèi),封接電阻是否大于200M,如果是,且較穩(wěn)定,再迅速補償串聯(lián)電阻和慢電容,舍棄串聯(lián)電阻大于30M的細胞,且在記錄過程中監(jiān)測串聯(lián)電阻的變化,當變化大于20%時,中止記錄。如果細胞狀態(tài)不好,就馬上重新制備腦片,以提高實驗效率。膜片鉗技術(shù)可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細菌離子通道。南京醫(yī)學膜片鉗供應(yīng)商

南京醫(yī)學膜片鉗供應(yīng)商,膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗在通道研究中的重要作用:利用膜片鉗技術(shù)還可以用于藥物在其靶受體上作用位點的分析。如神經(jīng)元煙堿受體為配體門控性離子通道,膜片鉗全細胞記錄技術(shù)通過記錄煙堿誘發(fā)電流,可直觀地反映出神經(jīng)元煙堿受體活動的全過程,包括受體與其激動劑和拮抗劑的親和力,離子通道開放、關(guān)閉的動力學特征及受體的失敏等活動。使用膜片鉗全細胞記錄技術(shù)觀察拮抗劑對煙堿受體激動劑量效曲線的影響,來確定其作用的動力學特征。然后根據(jù)分析拮抗劑對受體失敏的影響,拮抗劑的作用是否有電壓依賴性、使用依賴性等特點,可從功能上區(qū)分拮抗劑在煙堿受體上的不同作用位點,即判斷拮抗劑是作用在受體的激動劑識別位點,離子通道抑或是其它的變構(gòu)位點上。南京醫(yī)學膜片鉗供應(yīng)商膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇。

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膜片鉗技術(shù)基本原理與特點:膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。該技術(shù)的主要缺陷是必須在細胞內(nèi)插入兩個電極,對細胞損傷很大,在小細胞如神經(jīng)元,就難以實現(xiàn),又因細胞形態(tài)復(fù)雜,很難保持細胞膜各處生物特性的一致。

膜片鉗在通道研究中的重要作用:應(yīng)用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型,并能在記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎(chǔ)上進一步計算出細胞膜上的通道數(shù)和開放概率,還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物質(zhì)對離子通道開閉及通道電流的影響等。同時用于研究細胞信號的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細胞分泌機制。結(jié)合分子克隆和定點突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于離子通道分子結(jié)構(gòu)與生物學功能關(guān)系的研究。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標:藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。

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膜片鉗操作實驗:標本制備根據(jù)研究目的的不同,可采用不同的細胞組織,如心肌細胞、平滑肌細胞、細胞等,現(xiàn)在幾乎可對各種細胞進行膜片鉗的研究。對所采用的細胞,必須滿足實驗要求,一般多采用酶解分離法,也可采用細胞培養(yǎng)法;另外,由于與分子生物學技術(shù)的結(jié)合,現(xiàn)在也運用分子克隆技術(shù)表達不同的離子通道,如利用非洲爪蟾卵母細胞表達外源性基因等。電極在實驗前要灌注電極液,由于電極較細,因此在充灌前,電極內(nèi)液要用0.2 μm的濾膜進行過濾。一般電極充灌可分灌尖(tipfilling)和后充兩步灌尖時將電極浸入內(nèi)液中5s即可。膜片鉗使用的注意事項:打雷天氣必須禁止膜片鉗實驗。常州藥理學膜片鉗成像技術(shù)

膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。南京醫(yī)學膜片鉗供應(yīng)商

膜片鉗技術(shù)之全細胞記錄的實驗流程:(1)破膜:加大微電極內(nèi)的負壓將細胞膜吸破,此時可見時間常數(shù)較大的全細胞膜電容電流的出現(xiàn),以及方波電流的輕微加大。①可用嘴吸;②也可用注射器施加負壓;③還可以在施加負壓的基礎(chǔ)上進行電擊穿來破膜。若只用電擊穿破膜,形成的入口電阻Ra較大。(2)細胞破膜后,若所用浴液的滲透壓比電極內(nèi)液的滲透壓略高,則應(yīng)該將所施加的負壓力在幾秒內(nèi)或幾十秒內(nèi)去掉;反之,適當保留一點負壓對破膜狀態(tài)及細胞的穩(wěn)定更有利。(3)全細胞膜電容補償:調(diào)節(jié)全細胞膜電容補償板塊中的Cm和Rs進行膜電容電流補償,使輸出電流信號中細胞膜電容電流成分消失或變至較小。(4)串聯(lián)電阻補償:打開串聯(lián)電阻補償鍵,調(diào)節(jié)串聯(lián)電阻補償至不產(chǎn)生震蕩為度。(5)漏減調(diào)節(jié)。(6)正式進入標本細胞的檢測。南京醫(yī)學膜片鉗供應(yīng)商

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