膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞記錄的實(shí)驗(yàn)流程：（1）破膜：加大微電極內(nèi)的負(fù)壓將細(xì)胞膜吸破，此時(shí)可見時(shí)間常數(shù)較大的全細(xì)胞膜電容電流的出現(xiàn)，以及方波電流的輕微加大。①可用嘴吸；②也可用注射器施加負(fù)壓；③還可以在施加負(fù)壓的基礎(chǔ)上進(jìn)行電擊穿來破膜。若只用電擊穿破膜，形成的入口電阻Ra較大。（2）細(xì)胞破膜后，若所用浴液的滲透壓比電極內(nèi)液的滲透壓略高，則應(yīng)該將所施加的負(fù)壓力在幾秒內(nèi)或幾十秒內(nèi)去掉；反之，適當(dāng)保留一點(diǎn)負(fù)壓對破膜狀態(tài)及細(xì)胞的穩(wěn)定更有利。（3）全細(xì)胞膜電容補(bǔ)償：調(diào)節(jié)全細(xì)胞膜電容補(bǔ)償板塊中的Cm和Rs進(jìn)行膜電容電流補(bǔ)償，使輸出電流信號中細(xì)胞膜電容電流成分消失或變至較小。（4）串聯(lián)電阻補(bǔ)償：打開串聯(lián)電阻補(bǔ)償鍵，調(diào)節(jié)串聯(lián)電阻補(bǔ)償至不產(chǎn)生震蕩為度。（5）漏減調(diào)節(jié)。（6）正式進(jìn)入標(biāo)本細(xì)胞的檢測。膜片鉗技術(shù)在可興奮細(xì)胞如神經(jīng)元、心肌細(xì)胞、肌纖維和胰腺細(xì)胞的研究中起至關(guān)重要的作用。無錫藥理學(xué)腦片膜片鉗網(wǎng)站

膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法：膜片鉗使用的基本方法是，把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下，與清潔處理過的細(xì)胞膜形成高阻抗封接，導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來，由于電性能隔離與微電極的相對低電阻（1～5MΩ），只要對微電極施以電壓就能對膜片進(jìn)行鉗制，從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉(zhuǎn)換放大器輸送至電子計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析處理。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)的關(guān)鍵是建立高阻抗封接，并能通過特定的記錄儀器反映這些變化。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接。無錫藥理學(xué)腦片膜片鉗網(wǎng)站全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：信號準(zhǔn)確，噪聲少，使用了先進(jìn)的微型“法拉第板”替代傳統(tǒng)的“法拉第籠”。

膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細(xì)胞膜面積不同，進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細(xì)胞跨膜電位不變，并迅速控制其數(shù)值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個(gè)細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動(dòng)。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究，特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。

膜片鉗使用的注意事項(xiàng)：1.為了防止塵埃、靜電傷害機(jī)器，每天做實(shí)驗(yàn)前請用清水拖地。2.拉制儀使用前需預(yù)熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時(shí)，請先用砂紙輕微打磨，再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀，如果銀絲電極30min未變黑，則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放大器，后開軟件；先關(guān)軟件，后關(guān)放大器。5.非必須用到汞燈時(shí)請不要打開汞燈電源，打開后至少需1個(gè)小時(shí)才可關(guān)閉。6.在放大器打開時(shí)不能用手、金屬物品或其它導(dǎo)電的物品接觸電極絲（包括地線），在取放細(xì)胞片時(shí)請關(guān)閉放大器。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級，因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：進(jìn)行細(xì)胞吸附、封接和維持全細(xì)胞記錄模式。并兼容常規(guī)膜片鉗放大。

膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細(xì)胞模式的胞質(zhì)滲漏問題,有學(xué)者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細(xì)胞膜上,形成只允許一價(jià)離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導(dǎo)電性孔道,借此對全細(xì)胞膜電流進(jìn)行記錄。由于此模式的胞質(zhì)滲漏極為緩慢,局部串聯(lián)阻抗較常規(guī)全細(xì)胞模式高,所以鉗制速度很慢,也稱為緩慢全細(xì)胞模式。它適合于小細(xì)胞的電壓鉗位,對于直徑大于30μm的細(xì)胞很難實(shí)現(xiàn)鉗位。不足之處是由于電極與細(xì)胞間交換快,細(xì)胞內(nèi)環(huán)境很容易破壞,因此記錄所用的電極液應(yīng)與胞漿主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的緩沖成分和能量代謝所需的物質(zhì)。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級，因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。膜片鉗使用的注意事項(xiàng)：浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時(shí)清洗，防止長菌影響實(shí)驗(yàn)。南京神經(jīng)生物學(xué)實(shí)用膜片鉗原理及步驟

膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍：在神經(jīng)科學(xué)中的研究。無錫藥理學(xué)腦片膜片鉗網(wǎng)站

全細(xì)胞膜片鉗模式下有電壓鉗記錄和電流鉗記錄兩種。電壓鉗記錄的原理與電壓鉗技術(shù)相似，但有所不同：首先，全細(xì)胞電壓鉗記錄只使用單根電極，但在電學(xué)效果上同時(shí)實(shí)現(xiàn)了電壓鉗制和電流記錄。其次，電壓鉗記錄的電極不細(xì)胞，對細(xì)胞造成的損傷較小，因而能用于小細(xì)胞如神經(jīng)元的研究。電流鉗記錄則是通過鉗制電極電流來測量膜電位。電流鉗在本質(zhì)上也是電壓鉗位，它將差分放大器的輸出電流與指令電流相比較，然后將這個(gè)差動(dòng)輸出施加到放大器前級的倒相端，通過高速反饋使得同相端的電壓與其相等，無論電極電流是否為零，都能從輸出電壓得到膜電位的準(zhǔn)確數(shù)值。無錫藥理學(xué)腦片膜片鉗網(wǎng)站

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