膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng):1.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室的水電,檢查實(shí)驗(yàn)室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作(值日生按照實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時(shí)長做好登記工作。4.拉制儀提前預(yù)熱(至少30min)。且用完及時(shí)關(guān)閉。電熱加熱線溫度很高,在使用時(shí)注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機(jī)電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時(shí)需用實(shí)驗(yàn)室配置的U盤。5.禁止私拉電線,如有實(shí)驗(yàn)要求可與老師及時(shí)溝通。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。使用膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)觀察拮抗劑對煙堿受體激動(dòng)劑量效曲線的影響,來確定其作用的動(dòng)力學(xué)特征。黃山醫(yī)學(xué)膜片鉗成像供應(yīng)商
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:1)細(xì)胞吸附式膜片(cell attached patch)是膜片鉗的基本方式,其它方式由此衍生。這種膜片形式比較穩(wěn)定因細(xì)胞骨架及有關(guān)代謝過程是完整的,故對細(xì)胞結(jié)構(gòu)和環(huán)境干擾比較小。但這種膜片形式易在電極形成囊泡,從而細(xì)胞骨架可能有所變化。另外這種膜片不能控制細(xì)胞內(nèi)成分。且任何影響膜電位的處理均可影響其電位水平。2)內(nèi)面向外式膜片( inside outpatch)細(xì)胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細(xì)胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對通道活動(dòng)的影響。全自動(dòng)實(shí)用膜片鉗方案膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇。
膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)只適用于藥物的初篩和二次篩選,且對樣本有很高的選擇性,而傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)可適用于各種樣本,應(yīng)用范圍廣,能夠分析檢測所有的離子通道類型,同時(shí)能夠分析離子通道的動(dòng)力學(xué)特征。因此目前,傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)仍然是不可替代的。在進(jìn)行膜片鉗實(shí)驗(yàn)時(shí),玻璃電極給負(fù)壓并吸住細(xì)胞,形成高阻封接,破膜,給藥,記錄數(shù)據(jù)的過程,都需要細(xì)胞保持比較好的活性狀態(tài),才能更加高效的獲得有效數(shù)據(jù)。因此細(xì)胞的穩(wěn)定性就成了評估樣品好壞的關(guān)鍵。膜片鉗芯片技術(shù)是繼細(xì)胞芯片之后的又一種嶄新的分析細(xì)胞電生理參數(shù)的芯片技術(shù).由于該芯片除了具有傳統(tǒng)膜片鉗的高分辨和高準(zhǔn)確性特點(diǎn)外,還具有高通量、自動(dòng)化以及細(xì)胞多通道參數(shù)和細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)參數(shù)在線和實(shí)時(shí)檢測等優(yōu)點(diǎn).因此,該芯片技術(shù)將很大促進(jìn)細(xì)胞離子通道、細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)傳導(dǎo)以及藥物篩選的研究和應(yīng)用。
膜片鉗的應(yīng)用:對藥物作用機(jī)制的研究:在通道電流記錄中,可分別于不同時(shí)間、不同部位(膜內(nèi)或膜外)施加各種濃度的藥物,研究它們對通道功能的可能影響,了解那些選擇性作用于通道的藥物影響人和動(dòng)物生理功能的分子機(jī)理。這是膜片鉗技術(shù)應(yīng)用較普遍的領(lǐng)域,既有對西藥藥物機(jī)制的探討,也普遍用在重要藥理的研究上。如開麗等報(bào)道細(xì)胞貼附式膜片鉗單通道記錄法觀測到人參二醇組皂苷可抑制正常和“缺血”誘導(dǎo)的大鼠大腦皮層神經(jīng)元L-型鈣通道的開放,從而減少鈣內(nèi)流,對缺血細(xì)胞可能有保護(hù)作用。陳龍等報(bào)道采用細(xì)胞貼附式單通道記錄法發(fā)現(xiàn)烏頭堿對培養(yǎng)的Wistar大鼠心室肌細(xì)胞L-型鈣通道有阻滯作用。膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)發(fā)展起來的,電壓鉗是利用負(fù)反饋技術(shù)將膜電位在空間和時(shí)間上固定于某一測定值。
電壓鉗與膜片鉗有什么區(qū)別?電壓鉗技術(shù)是通過向細(xì)胞內(nèi)注射一定的電流,抵消離子通道開放時(shí)所產(chǎn)生的離子流,從而將細(xì)胞膜電位固定在某一數(shù)值。由于注射電流的大小與離子流的大小相等、方向相反,因此它可以反映離子流的大小和方向。膜片鉗技術(shù)鉗制的是膜片,是指采用尖銳端經(jīng)過處理的微電極與細(xì)胞膜發(fā)生緊密接觸,使尖銳端下的這片細(xì)胞膜在電學(xué)上與其它細(xì)胞膜分離,這很大程度降低了背景噪聲,使單通道微弱的電流得以分辨出來。采用電壓鉗技術(shù)將這片膜的電位鉗制在某一數(shù)值,可記錄到單通道電流。從這點(diǎn)上看,膜片鉗技術(shù)是特殊的電壓鉗技術(shù)。隨著膜片鉗技術(shù)的發(fā)展,它已經(jīng)不只只局限于膜片的概念,也不只只采用電壓鉗技術(shù),還常采用電流鉗技術(shù)。膜片鉗使用操作注意:封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。全自動(dòng)膜片鉗實(shí)驗(yàn)方案
膜片鉗在通道研究中的重要作用:利用膜片鉗技術(shù)還可以用于藥物在其靶受體上作用位點(diǎn)的分析。黃山醫(yī)學(xué)膜片鉗成像供應(yīng)商
膜片鉗技術(shù)操作方法:開始封接:調(diào)低微操步進(jìn)速度,使電極尖銳端慢慢向細(xì)胞靠近,如發(fā)現(xiàn)基線方波突然變小,封接電阻上升時(shí),即停止電極下降,通過注射器給電極負(fù)壓,封接成功的可見方波很快變小,電阻升至G歐。此時(shí),調(diào)節(jié)快電容補(bǔ)償按鈕,將快電容電流補(bǔ)償?shù)?,如封接穩(wěn)定后,準(zhǔn)備破膜。破膜:在鉗制電位水平-60mV時(shí),漏電流<20pA,給予比較大的負(fù)壓(也可根據(jù)情況使用ZAP電破方式破膜),將要破時(shí)可見基線上下浮動(dòng),破后,可見基線前后有兩個(gè)較大的慢電容電流。黃山醫(yī)學(xué)膜片鉗成像供應(yīng)商
上海司鼎生物科技有限公司辦公設(shè)施齊全,辦公環(huán)境優(yōu)越,為員工打造良好的辦公環(huán)境。在司鼎生物近多年發(fā)展歷史,公司旗下現(xiàn)有品牌司鼎;OriCell等。公司以用心服務(wù)為重點(diǎn)價(jià)值,希望通過我們的專業(yè)水平和不懈努力,將從事生物科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù),營養(yǎng)健康咨詢服務(wù),商務(wù)咨詢,計(jì)算機(jī)軟件開發(fā),化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、煙花爆竹、易制毒化學(xué)品),實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,儀表儀器的銷售。 【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動(dòng)】等業(yè)務(wù)進(jìn)行到底。自公司成立以來,一直秉承“以質(zhì)量求生存,以信譽(yù)求發(fā)展”的經(jīng)營理念,始終堅(jiān)持以客戶的需求和滿意為重點(diǎn),為客戶提供良好的免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù),從而使公司不斷發(fā)展壯大。
膜片鉗在通道研究中的重要作用:用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時(shí)程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時(shí)可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型,并能在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進(jìn)一步計(jì)算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開放概率,還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物質(zhì)對離子通道開閉及通道電流的影響等。同時(shí)用于研究細(xì)胞信號的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機(jī)制。結(jié)合分子克隆和定點(diǎn)突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于離子通道分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能關(guān)系的研究。膜片鉗技術(shù)可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細(xì)菌離子通道。嘉興全自動(dòng)腦片膜片鉗網(wǎng)站一種提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的方法與流程:膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜上離子通...