Westem HRP基材。高背景分鎖不足更改為不同的阻止解決方案。吸筆架不夠濕組裝前，先將吸墨紙架弄濕。阻塞解決方案可能有始終準(zhǔn)備新鮮的0.5％脫脂/低脂干奶。降級(jí)的抗體濃度過高降低抗體的濃度。吸筆架朝上放置將印跡架朝上放在蛋白素框架中。在框架中洗滌不足進(jìn)行至少4次每次30 mL的洗滌。添加清洗劑時(shí)，確保真空連續(xù)運(yùn)行緩沖。整個(gè)系統(tǒng)電平不一致的信號(hào)確保系統(tǒng)在平坦的水平表面上。污點(diǎn)抗體不均勻補(bǔ)充封閉液和抗體稀釋劑遍及整個(gè)表面0.1％Tween 20表面活性劑。吸墨紙架使用小量移液器（例如5毫升），慢慢散布整個(gè)印跡中的抗體。應(yīng)用至少2.5 mL（用于MultBlot），5 mL（用于Mini blot）或10 mL（用于Midi印跡）抗體?？贵w體積低沒有抗體回收盤確保抗體中的孔，回收托盤algn上海益啟生物細(xì)胞跨膜電阻儀訂購(gòu)方便。楊浦區(qū)Merck電阻儀Merck儀器參數(shù)

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15分鐘。圖4.擴(kuò)展孵化（過夜）：SNAP i.d.8 2.0系統(tǒng)與標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測(cè)一種。 SNAP id.o 2.0蛋白檢測(cè)b。標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)Midi印跡免疫檢測(cè)將A431細(xì)胞裂解液和大鼠肝裂解液（12至3 ug）轉(zhuǎn)移至Immobilon9-P膜。兩種印跡均用在TBST中制備的0.5％NFDM封閉。這SNAP i.d.c 2.0 Midi印跡被阻斷20秒，標(biāo)準(zhǔn)印跡為分鎖了1個(gè)小時(shí)。兩種印跡均與相同稀釋度的MAP激酶1/2（ErK1 / 2），但是，對(duì)于HRP偶聯(lián)的二抗山羊抗兔（AP132P），將SNAP i.d.2.0印跡孵育10分鐘在TBST中洗滌3次后，將標(biāo)準(zhǔn)印跡孵育1小時(shí)。 圖5.擴(kuò)展孵化（1小時(shí)）：，SNAP i.d.o 2.0系統(tǒng)1小時(shí)協(xié)議與SNAP i.d.9 2.0系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)協(xié)議與標(biāo)準(zhǔn)免

項(xiàng)卡（圖8）創(chuàng)建和啟動(dòng)自定義協(xié)議。要手動(dòng)控制流量，使用“手動(dòng)模式”標(biāo)簽選擇所需的井，壓力，和溫度（如果使用加熱歧管）。有關(guān)自動(dòng)化協(xié)議或每次融合的手冊(cè)，請(qǐng)參閱CellASICO《ONIX2微流體系統(tǒng)用戶指南》。注意：對(duì)于需要快速交換溶液的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)執(zhí)行以下操作可以應(yīng)用以下技術(shù)：高壓（55.2kPa[8psi）下的流量對(duì)于初始過渡，然后將流量減小到標(biāo)準(zhǔn)壓力長(zhǎng)期暴露于6.9-13.8kPa（1-2psi）。 軟件操作下圖顯示了使用ellAsICEONX2軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的兩種模式，請(qǐng)參閱CllASICEONIX2MicrofuidieSystem用戶有關(guān)軟件功能的詳細(xì)信息的指南。圖7.手動(dòng)模式降低了ONIX2系統(tǒng)的迭代操作。可以手動(dòng)設(shè)置操作參數(shù)，此模式a5o提供了選項(xiàng)運(yùn)行簡(jiǎn)短的自動(dòng)印版設(shè)置序列，這些序列質(zhì)量有保障的超濾杯在哪里買您知道嗎？

盤，請(qǐng)?jiān)诓襟E5之后插入托盤。有關(guān)詳細(xì)信息，請(qǐng)參閱“抗體恢復(fù)”部分。 6.在整個(gè)表面上涂適量的一抗吸墨紙架的數(shù)量（對(duì)于MultiBlot為2.5毫升，對(duì)于迷你吸墨紙為5毫升，或10 mL用于Midi印跡）。7.在室溫下孵育10分鐘。解決方案將是吸收到污點(diǎn)固定器中，表面可能會(huì)變干。重要提示：請(qǐng)勿在吸塵器清潔后再使用真空吸塵器。孵育10分鐘。8.向下壓框架并施加真空。等待5-8秒，直到框架完全是空的。9.在連續(xù)運(yùn)行真空的情況下，添加30 mL洗滌緩沖液（MultiBlot為15毫升）。重復(fù)洗滌步驟3次以上（總共4次洗滌）。當(dāng)框架完全為空時(shí)，將TURN真空關(guān)閉。10.在印跡架的表面上涂適量的二抗（對(duì)于多印跡，為2.5 mL，5毫升用于迷你印跡，或10毫升用于Midi印跡）。在室溫下孵育10分鐘，然后益啟生物提供專業(yè)的細(xì)胞計(jì)數(shù)器。楊浦區(qū)Merck電阻儀Merck儀器參數(shù)

益啟生物是默克細(xì)胞計(jì)數(shù)器的代理商。楊浦區(qū)Merck電阻儀Merck儀器參數(shù)

關(guān)閉真空。同樣，溶液將被吸收到印跡架中，并且表面可能看起來干燥。重要提示：孵育10分鐘后，再抽真空。11.向下壓框架并施加真空。等待5至8秒鐘，直到框架完全空了。真空運(yùn)行連續(xù)添加30 mL洗滌緩沖液（對(duì)于MultiBlot為15 mL）。重復(fù)洗滌步驟3次（共3次）4次洗滌）。12.關(guān)閉真空，然后從框架上取下吸墨架。從污點(diǎn)固定器中取出污點(diǎn)，并與適當(dāng)?shù)臋z測(cè)試劑。如果使用了MultiBlot孔空白，則卸下并清洗。 擴(kuò)展一級(jí)抗體孵育：一小時(shí)至過夜1.執(zhí)行《通用議定書》的步驟1至5。2.加入2.5 mL（對(duì)于MultiBlot），5 mL（對(duì)于Mini blot）或10 mL（對(duì)于Midi blot）1X一抗（濃縮液）通常在標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測(cè)過程中使用）。3.用蓋子蓋住吸墨紙固定架。如果需要的話，將其從底座楊浦區(qū)Merck電阻儀Merck儀器參數(shù)