外泌體用于細(xì)胞學(xué)或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前的無(wú)菌處理 已經(jīng)經(jīng)過(guò)上述方法制備的外泌體在進(jìn)行細(xì)胞或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)之前還需進(jìn)行一步除菌過(guò)濾,這個(gè)時(shí)候考慮到得率,應(yīng)該采用離心法處理,以減少過(guò)濾時(shí)的外泌體樣品損失。 超濾方法純化具體操作步驟舉例 Amicon? Ultra-15 超濾管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip?真空抽濾對(duì)樣品進(jìn)行澄清[目錄號(hào)SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜] 用PBS平衡Amicon? Ultra-15 超濾管(目錄號(hào)UFC901024,10 kDa MWCO) ,4000g離心 X 10 min。 從超濾管內(nèi)管及收集管吸走PBS。向超濾管加入15 mL 樣品。4000g 離心30 min 濃縮。倒空收集管。加入14 mL PBS 進(jìn)行緩沖液置換,溫柔吸打樣品數(shù)次。4000g離心 30 min。從濃縮管吸回處理好的樣品。(30X 濃縮) 注意 : 所有 Amicon? Ultra 超濾管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 與此操作流程兼容 *上海Millipore超濾濃縮管授權(quán)代理商!江蘇離心濃縮管聯(lián)系方式
外泌小體(Exosome)是一種囊泡結(jié)構(gòu),直徑通常在30-150nm,常見(jiàn)于正常體液和病理樣本,培養(yǎng)細(xì)胞也可分泌。研究人員已經(jīng)在血液、唾液、尿液、母乳等中發(fā)現(xiàn)外泌小體,其運(yùn)載的蛋白和核酸涉及其細(xì)胞間物資、信息交流,影響和調(diào)控著多方面的生理功能,包括**的發(fā)生、免疫促進(jìn)、凋亡調(diào)控、血管的生成、炎癥的反應(yīng)及發(fā)育和分化等。由于在體液中出現(xiàn),外泌小體對(duì)于臨床生物標(biāo)志物檢測(cè)來(lái)說(shuō)特別有利,成為體外診斷、biomarker研究的新熱點(diǎn)。嘉定區(qū)默克超濾濃縮管銷售超濾濃縮管的好處都有很多。
高通量超濾 MultiScreen?超濾膜板 MultiScreen? 超濾膜板是實(shí)現(xiàn)高通量生物樣品處理的必備工具,能配合自動(dòng)化工作平臺(tái)對(duì)樣品進(jìn)行純化、濃縮、脫鹽或分析前去除蛋白等操作。Millipore 提 供 3 種帶有低吸附超濾膜的 96 孔板,在高通量操作時(shí)樣品吸附損失小而得率高。 優(yōu)點(diǎn)與應(yīng)用: 高通量:96 孔超濾膜板和 384 孔膜板 可靠:低蛋白吸附,蛋白得率高,孔間數(shù)據(jù)均一性好 功能多樣:樣品體積 50-500μL 適用,兼容各種 96/384 孔板標(biāo)準(zhǔn)操作設(shè)備或自動(dòng)化平臺(tái) 用于高通量蛋白鑒定與篩選的濃縮、脫鹽,以及樣品分析前大分子蛋白去除 也可用于核酸(DNA/RNA/PCR 產(chǎn)物 / ***)樣品制備及二代測(cè)序樣品制備
濃度:當(dāng)需要截留的樣品濃度很低時(shí),通量通常不受濃度影響。操作過(guò) 程中,隨著溶質(zhì)濃度的升高,增加的粘滯性和極化將導(dǎo)致通量降低。 溫度:粗體,作為獲得壓力、濃度一樣的詞條通常增加操作時(shí)的溫度可 以提高超濾效率。每增加 1℃蛋白擴(kuò)散率增加 3-3.5%,同時(shí)溶液粘度降低。 實(shí)踐中一般是以樣品和設(shè)備能耐受的比較高溫度來(lái)操作。 pH:改換溶液和 / 或 pH 常常改變分子結(jié)構(gòu),蛋白尤其如此。在蛋白的 pI 值蛋白會(huì)沉淀,產(chǎn)生堵塞和得率損失。 污垢:溶液中除了目的分子造成的濃差極化,還有其它小顆粒和分子會(huì) 在膜上富集和沉淀,逐漸堆積在膜孔上或膜孔結(jié)構(gòu)中,形成結(jié)晶和沉淀。超濾濃縮管代理銷售哪家比較靠譜。
截留 截留有時(shí)也稱為排阻。水合程度、離子和空間位置效應(yīng)會(huì)導(dǎo)致分子量相近 的分子表現(xiàn)非常不同的截留狀態(tài)。許多生物大分子在不同的 pH 或離子強(qiáng) 度改變的情況下傾向于聚集或改變構(gòu)象,因此其有效大小可能比 “天然” 分子大恨多,從而導(dǎo)致排阻增加。比如,有些蛋白質(zhì)在某些緩沖液條件下 會(huì)發(fā)生多聚化,而另一些則發(fā)生解聚(如血紅素蛋白)成亞基。這使選擇 合適截留分子量的膜變得復(fù)雜。以默克密理博的經(jīng)驗(yàn),我們通常推薦選擇 為目的分子大小一半的膜作為嘗試的優(yōu)先,再根據(jù)實(shí)際情況加以調(diào)整。益啟生物公司的超濾濃縮管種類繁多。靜安區(qū)Millipore超濾濃縮管代理價(jià)
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特點(diǎn)與優(yōu)點(diǎn): 特別的反轉(zhuǎn)離心回收設(shè)計(jì),滯留體積很小,樣品損失少, 樣品回收率通常>90% 濃縮倍數(shù)達(dá)到50-200倍 Ultracel?再生纖維素膜和聚丙烯外殼將吸附降至比較低 特別設(shè)計(jì)的死體積防止離干,保證樣品回收率和活性 有四種截留分子量供選擇 法醫(yī)gDNA鑒定、PCR產(chǎn)物純化與小分子分離 Microcon? 超濾管 Microcon?為橫膜式超濾管,沒(méi)有死體積,用于大分子樣品的濃縮、脫 鹽、換液都非常高效方便。實(shí)際應(yīng)用中還常用于大分子與其它分子的分 離,比如蛋白酶切后的處理及藥物結(jié)合率分析等等。江蘇離心濃縮管聯(lián)系方式
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