雖然影響因素較多，我們通常建議截留分子量約為目的分子分子量一半的膜，這樣可以比較大化樣品的回收，同時節(jié)省過濾時間。截留微濾中膜的孔徑大小通常以微米計，表示大于這一規(guī)格的顆粒將被膜截留。超濾膜根據(jù)NMWL分級，有時也用截留分子量（MWCO）。NMWL表示大多數(shù)大于這個值的分子將在超濾時截留。一個確定NMWL的超濾膜應(yīng)該截留至少90%以上的這個大小的球形分子。但為了保險起見，實踐中選擇的膜孔徑要小于目的分子。緩沖液置換時 膜截留分子量應(yīng)該充分大于流過的溶質(zhì)。當(dāng)膜材料相同時，孔徑減小 會增加排阻而減小濾過率。截留及產(chǎn)物回收的影響因素包括分子的形狀、帶電性質(zhì)、樣品濃度及組成成分、操作條件、使用的設(shè)備構(gòu)造等。因此常常發(fā)生同樣 NMWL 的膜對一定范圍內(nèi)的不同分子截留效果有一定差異的情況。使用超濾方法進(jìn)行樣品濃縮或除鹽時，需要謹(jǐn)慎地選擇合適的 NMWL膜和設(shè)備。雖然影響因素較多，我們通常建議截 留分子量約為目的分子分子量一半的膜，這樣可以比較大化樣品的回收，同時節(jié)省過濾時間。超濾濃縮管應(yīng)用領(lǐng)域你知道嗎。浦東新區(qū)默克2ml超濾濃縮管咨詢問價

經(jīng)典離心濃縮裝置 Amicon? Ultra 離心超濾管 反轉(zhuǎn)離心回收 ?反轉(zhuǎn)離心回收設(shè)計使蛋白樣品，特別是小體積樣品高效 回收，避免***頭吸取造成的樣品丟失或操作錯誤 ?0.5mL、2mL 和 70mL 超濾管設(shè)計為反轉(zhuǎn)回收模式 樣品吸附損失小 ?Ultracel? 超濾膜為密理博超濾產(chǎn)品特有的設(shè) 計，非特異吸附比較低，減少樣品的吸附損失 ?膜和聚丙烯管都是低吸附材質(zhì)，保證> 90% 回收率 ?豎膜切向流設(shè)計，不像橫膜那樣容易堵，樣品 損失少 ?濃縮速度超快，**少需 10 分鐘常州默克4ml超濾濃縮管商家超濾濃縮管的系列有很多。

外泌體的精制磁珠法富集精制外泌體：300μg樣品（相當(dāng)于300μg總蛋白）用含有5μg anti-CD63抗體的溶液稀釋，與protein A/G磁珠共孵育1hr，漂洗后用0.2M glycine洗脫。如果要先將抗體偶聯(lián)在磁珠上（以避免抗體洗脫下來對外泌體的干擾），請參考默克磁珠操作說明書。（Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3)）。推薦使用試劑目錄號信息：cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。 默克已經(jīng)建立了基于“微濾+超濾”的外泌體制備操作標(biāo)準(zhǔn)，相較于需要昂貴的設(shè)備及繁瑣操作的超速密度梯度離心，用實驗室常見的工具解決外泌體制備的高大上問題，真是惠而不費，不亦樂乎？

脫鹽/緩沖液置換并濃縮 5次低速離心，總耗時~35分鐘 1. 在上樣池中加入0.5 mL TBS-T預(yù)濕Amicon? Pro。1,000×g離心1 min。 2. 優(yōu)化選做：加入1.5 mL用于置換的緩沖液，1,000×g離心1 min。 3. 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管（有5種截留分子量規(guī)格可選）。 4. 加入1.5 mL樣品，4,000×g離心15 min進(jìn)行濃縮。 5. 加入1.5 mL需要置換的緩沖液，4,000×g離心15 min，換液的同時進(jìn)行濃縮。 6. 倒轉(zhuǎn)Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管，1,000×g離心回收處理好的蛋白。 * 進(jìn)行較大體積操作時，可以適當(dāng)延長離心時間，也可參考Amicon? Pro完整操作說明書 查看詳細(xì)信息。上海超濾濃縮管代理銷售推薦益啟生物公司。

離心方式的超濾方法進(jìn)行溶液置換也被稱為“滲濾”，操作時樣品首先被濃縮，繼而加入新的溶液，再次濃縮時，原溶液已經(jīng)被換成選定的溶液。 化學(xué)相容性與溶出 樣品的化學(xué)背景有時很多樣而復(fù)雜，過濾的過程中很重要的一點是操作過程不應(yīng)給樣品帶來新的污染。所以濾膜和裝置與樣品接觸的其它部分都不能與樣品中的化學(xué)成分發(fā)生反應(yīng)而產(chǎn)生溶出污染。關(guān)于默克密理博各種微濾、超濾產(chǎn)品的化學(xué)相容性請參考產(chǎn)品使用說明書或垂詢技術(shù)支持專線 。回收率及其重要性超濾的**終目的常常是很大程度地回收目標(biāo)溶質(zhì)，但膜的很多特性會對這一目的產(chǎn)生影響。影響回收的因素包括：? 標(biāo)稱分子量限制（NMWL）/ 核酸截留分子量（NCO）? 截留 ? 濃差極化 ? 通量益啟生物公司專業(yè)從事超濾濃縮管代理銷售。無錫Millipore超濾濃縮管代理價格

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截留 截留有時也稱為排阻。水合程度、離子和空間位置效應(yīng)會導(dǎo)致分子量相近 的分子表現(xiàn)非常不同的截留狀態(tài)。許多生物大分子在不同的 pH 或離子強 度改變的情況下傾向于聚集或改變構(gòu)象，因此其有效大小可能比 “天然” 分子大恨多，從而導(dǎo)致排阻增加。比如，有些蛋白質(zhì)在某些緩沖液條件下 會發(fā)生多聚化，而另一些則發(fā)生解聚（如血紅素蛋白）成亞基。這使選擇 合適截留分子量的膜變得復(fù)雜。以默克密理博的經(jīng)驗，我們通常推薦選擇 為目的分子大小一半的膜作為嘗試的優(yōu)先，再根據(jù)實際情況加以調(diào)整。浦東新區(qū)默克2ml超濾濃縮管咨詢問價