7次低速離心,總耗時~100分鐘(含60分鐘孵育時間) 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入200μL親和純化樹脂(50%懸濁液)和1.5 mL漂洗緩沖液。 1,000×g離心1 min。 2. 加入0.5 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h,其間可溫和攪動促進結(jié)合。 3. 1,000×g離心1 min 以去除未結(jié)合雜質(zhì)。 4. 加入1.5 mL漂洗緩沖液,1,000×g離心1 min。 5. 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(可選用50k MWCO型號)。 6. 加入1 mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。4,000×g離心5 min。 7. 加入200μL 中和緩沖液。4,000×g離心15 min。 8. 加上**終需要的緩沖液1.5 mL。4,000×g離心15 min,置換緩沖液的同時進行濃縮。 9. 倒轉(zhuǎn)Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管,1,000×g離心回收純化和濃縮好的蛋白。益啟生物公司主營超濾濃縮管銷售。徐匯區(qū)超濾濃縮管規(guī)格
無血清樣品選擇 3kDa 孔徑是為了盡可能提高外泌體的回收率。 有血清樣品選擇100kDa/500kDa孔徑是為了盡可能去除細胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌體的白蛋白造成的影響。 研究者可根據(jù)樣品的粘稠程度,以及需要制備的目標(biāo)外泌體 / 囊泡 / 顆粒的大小分布來選擇和優(yōu)化超濾孔徑(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa),以便達到更好的得率和操作體驗。 樣品體積大于 30mL 時可以考慮用超濾杯或 Centricon-70 超濾管,請注意攪拌式超濾杯在200mL 以內(nèi)時吸附損耗可能較離心式超濾管略偏高。如需進一步提高特定外泌體的純度,可選用包被相應(yīng)抗體的磁珠進行親和純化精制。黃浦區(qū)默克15ml超濾濃縮管哪家好超濾濃縮管的各種系列應(yīng)用領(lǐng)域還是不一樣的。
近年來隨著分離純化技術(shù)的提高,關(guān)于外泌小體的研究成果頗豐;這進一步吸引了越來越多領(lǐng)域的課題將外泌體納入研究對象。研究的前提是方便、高效、標(biāo)準(zhǔn)化地分離純化外泌小體。經(jīng)過近20年的探索,已經(jīng)建立了超速離心法、沉淀法、色譜法、親和純化法等。在大量實踐中大家逐漸認(rèn)識到根據(jù)下游研究對樣品的要求,以及起始樣品的規(guī)模、數(shù)量,可以選擇不同的外泌體制備策略。因不需要特殊的設(shè)備和試劑盒,對操作人員也沒有特別的經(jīng)驗要求,超濾法后來居上,成為實驗室中制備外泌體的通用方法。
上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(有5種截留分子量規(guī)格可選)。 6. 加入1 mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。孵育5 min。 7. 4,000×g離心15 min。 8. 加上蛋白樣品**終需要的緩沖液1.5 mL。4,000×g離心15 min,置換緩沖液的同時進行濃縮。 9. 倒轉(zhuǎn)Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管,1,000×g離心回收純化和濃縮好的蛋白。 * 本操作受Amicon? Ultra-0.5 mL超濾管~1 mg蛋白的容量限制。體積較大而蛋白濃度較低的情況下也可以采用如上方法,但溶液體積和離心時間等需要略加優(yōu)化。 用Protein A或G對抗體進行親和純化您知道益啟生物公司的超濾濃縮管系列都有哪些嗎?
Minicon?濃縮器 Minicon? 濃縮器用于在電泳或免疫電泳分析前對尿液和腦脊液進行濃縮,以增強對不正常或病態(tài)的蛋白質(zhì)(例如尿中的 Bence Jones 蛋白)的識別。B15型有 8 個濃縮單元,用于 5mL 樣本的處理;CS15型有 10 個濃縮單元,適合 2.5mL 樣品的處理。溶劑和鹽分通過超濾被吸收劑吸收而樣品被濃縮。 優(yōu)點與應(yīng)用 靜態(tài)濃縮器,不需要其它輔助裝置 濃縮倍數(shù)達到 100 倍,樣品終體積小 同時濃縮多個臨床樣品 特別推薦用于尿液、腦脊液等的蛋白 富集分析上海超濾濃縮管代理銷售哪家比較好?青浦區(qū)默克0.5ml超濾濃縮管聯(lián)系方式
超濾濃縮管和其他的空壓機有什么區(qū)別呢?徐匯區(qū)超濾濃縮管規(guī)格
外泌小體(Exosome)是一種囊泡結(jié)構(gòu),直徑通常在30-150nm,常見于正常體液和病理樣本,培養(yǎng)細胞也可分泌。研究人員已經(jīng)在血液、唾液、尿液、母乳等中發(fā)現(xiàn)外泌小體,其運載的蛋白和核酸涉及其細胞間物資、信息交流,影響和調(diào)控著多方面的生理功能,包括**的發(fā)生、免疫促進、凋亡調(diào)控、血管的生成、炎癥的反應(yīng)及發(fā)育和分化等。由于在體液中出現(xiàn),外泌小體對于臨床生物標(biāo)志物檢測來說特別有利,成為體外診斷、biomarker研究的新熱點。徐匯區(qū)超濾濃縮管規(guī)格
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