冷凍電鏡,就是用于掃描電鏡的比較低溫冷凍制樣及傳輸技術(shù)(Cryo-SEM)可實(shí)現(xiàn)直接觀察液體、半液體及對電子束敏感的樣品,如生物、高分子材料等。樣品經(jīng)過比較低溫冷凍、斷裂、鍍膜制樣(噴金/噴碳)等處理后,通過冷凍傳輸系統(tǒng)放入電鏡內(nèi)的冷臺(溫度可至-185℃)即可進(jìn)行觀察。其中,快速冷凍技術(shù)可使水在低溫狀態(tài)下呈玻璃態(tài),減少冰晶的產(chǎn)生,從而不影響樣品本身結(jié)構(gòu),冷凍傳輸系統(tǒng)保證在低溫狀態(tài)下對樣品進(jìn)行電鏡觀察。假如觀察的是透過樣本的掃描電子的話,那么這種顯微鏡被稱為掃描透射電子顯微鏡(Scanning Transmission Electron Microscopy,STEM)。掃描電鏡可得到有關(guān)物質(zhì)微觀形貌的信息;對x射線的采集,可得到物質(zhì)化學(xué)成分的信息。山西哪家做掃描電鏡拍照
在掃描電鏡中,入射電子束在樣品上的掃描和顯像管中電子束在熒光屏上的掃描是用一個共同的掃描發(fā)生器控制的。這樣就保證了入射電子束的掃描和顯像管中電子束的掃描完全同步,保證了樣品上的“物點(diǎn)”與熒光屏上的“象點(diǎn)”在時間和空間上一一對應(yīng),稱其為“同步掃描”。一般掃描圖象是由近100萬個與物點(diǎn)一一對應(yīng)的圖象單元構(gòu)成的,正因?yàn)槿绱?,才使得掃描電鏡除能顯示一般的形貌外,還能將樣品局部范圍內(nèi)的化學(xué)元素、光、電、磁等性質(zhì)的差異以二維圖象形式顯示。湖南組織掃描電鏡檢測掃描電子顯微鏡在其微觀結(jié)構(gòu)分析研究方面同樣顯示出極大的優(yōu)勢。
掃描電鏡以觀察樣品的表面形態(tài)為主。掃描電鏡樣品的制備,必須滿足以下要求: ?、俦3滞旰玫慕M織和細(xì)胞形態(tài); ②充分暴露欲觀察的部位; ?、哿己玫膶?dǎo)電性和較高的二次電子產(chǎn)額; ④保持充分干燥的狀態(tài)。 某些含水量低且不易變形的生物材料,可以不經(jīng)固定和干燥而在較低加速電壓下直接觀察,如動物毛發(fā)、昆蟲、植物種子、花粉等,但圖像質(zhì)量差,而且觀察和拍攝照片時須盡可能迅速。對大多數(shù)的生物材料,則應(yīng)首先采用化學(xué)或物理方法固定、脫水和干燥,然后噴鍍碳與金屬以提高材料的導(dǎo)電性和二次電子產(chǎn)額。掃描電鏡生物樣品制備技術(shù) 常規(guī)掃描電鏡對樣品要求:必須是干燥的,不含水分或揮發(fā)性物質(zhì);具有一定機(jī)械強(qiáng)度,能耐受電子束轟擊;具有導(dǎo)電性,被激發(fā)時能夠產(chǎn)生足夠的二次電子。生物材料特點(diǎn):含水分多,質(zhì)地柔軟,機(jī)械強(qiáng)度小;組成元素的原子序數(shù)低,導(dǎo)電性差,激發(fā)后二次電子的產(chǎn)額較少。制樣的任務(wù):通過一系列處理,既要盡量完美地保存材料的固有形態(tài),又要改良其物理性能,使其適合在電鏡下觀察成像 以下即為步驟方法、所需注意項(xiàng)目、以及操作中的使用技巧。
掃描電鏡由電子器發(fā)射出來的電子束,在加速電壓的作用下,經(jīng)過磁透鏡系統(tǒng)匯聚,形成直徑為5nm,經(jīng)過二至三個電磁透鏡所組成的電子光學(xué)系統(tǒng),電子束會聚成一個細(xì)的電子束聚焦在樣品表面。在末級透鏡上邊裝有掃描線圈,在它的作用下使電子束在樣品表面掃描。 由于高能電子束與樣品物質(zhì)的交互作用,結(jié)果產(chǎn)生了各種信息:二次電子、背反射電子、吸收電子、X射線、俄歇電子、陰極發(fā)光和透射電子等。這些信號被相應(yīng)的接收器接收,經(jīng)放大后送到顯像管的柵極上,調(diào)制顯像管的亮度。由于經(jīng)過掃描線圈上的電流是與顯像管相應(yīng)的亮度一一對應(yīng),也就是說,電子束打到樣品上一點(diǎn)時,在顯像管熒光屏上就出現(xiàn)一個亮點(diǎn)。 掃描電鏡就是這樣采用逐點(diǎn)成像的方法,把樣品表面不同的特征,按順序,成比例地轉(zhuǎn)換為視頻信號,完成一幀圖像,從而使我們在熒光屏上觀察到樣品表面的各種特征圖像。英瀚掃描電鏡可用于觀察動物:大腸、絨毛、細(xì)胞、纖維等。
掃描電鏡檢測粉末狀試樣的制備 首先在載物盤上粘上雙面膠帶,然后取少量粉末試樣在膠帶上的靠近載物盤圓心部位,然后用洗耳球朝載物盤徑向朝外方向輕吹(注意不可用嘴吹氣,以免唾液粘在試樣上,也不可用工具撥粉末,以免破壞試樣表面形貌),以使粉末可以均勻分布在膠帶上,也可以把粘結(jié)不牢的粉末吹走(以免污染鏡體)。然后在膠帶邊緣涂上導(dǎo)電銀漿以連接樣品與載物盤,等銀漿干了之后就可以進(jìn)行較為后的蒸金處理。檢測溶液試樣的制備 對于溶液試樣我們一般采用薄銅片作為載體。首先,在載物盤上粘上雙面膠帶,然后粘上干凈的薄銅片,然后把溶液小心滴在銅片上,等干了(一般用臺燈近距離照射10分鐘)之后觀察析出來的樣品量是否足夠,如果不夠再滴一次,等再次干了之后就可以涂導(dǎo)電銀漿和蒸金了。 英瀚斯生物,掃描電鏡、透射電鏡都在行!廣東靠譜的掃描電鏡多少錢
掃描電鏡(SEM)是介于透射電鏡和光學(xué)顯微鏡之間的一種微觀形貌觀察手段。山西哪家做掃描電鏡拍照
掃描電鏡樣本臨界點(diǎn)干燥法 臨界點(diǎn)干燥法是利用物質(zhì)在臨界狀態(tài)時,其表面張力等于零的特性,使樣品的液體完全汽化,并以氣體方式排掉,來達(dá)到完全干燥的目的。這樣就可以避免表面張力的影響,較好地保存樣品的微細(xì)結(jié)構(gòu)。此法操作較為方便,所用的時間也不算長,一般約2~3小時即可完成,所以是較為為常用的干燥方法。但用此法, 需要特殊儀器設(shè)備。臨界點(diǎn)干燥是在臨界點(diǎn)干燥儀中進(jìn)行的,操作步驟如下: a.固定、脫水:按常規(guī)方法進(jìn)行。如樣品是用乙醇脫水的,在脫水至100%后,要用純acetone置換15~20分鐘。 b.轉(zhuǎn)入中間液:由純acetone轉(zhuǎn)入中間液醋酸異戊酯中,時間約15~30分鐘。 c.移至樣品室:將樣品從醋酸異戊酯中取出,放入樣品盒,然后移至臨界點(diǎn)干燥儀的樣品室內(nèi),蓋上蓋并擰緊以防漏氣。 d.用液體二氧化碳置換醋酸異戊酯:在達(dá)到臨界狀態(tài)(31℃, 72.8大氣壓)后,將溫度再升高10℃,使液體二氧化碳?xì)饣?,然后打開放氣閥門,逐漸排出氣體,樣品即完全干燥。 山西哪家做掃描電鏡拍照
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