掃描電鏡操作基本步驟 1 、取材 掃描電鏡下觀察的樣品尺寸要求比較寬松,一般1cm3左右樣品都能適合大多數(shù)掃描電鏡觀察。 2 、固定 鋪片培養(yǎng)的細胞取出浸入 PBS 中,漂洗細胞表面。然后將細胞鋪片放入青霉素小瓶中,加 4 ℃ 預冷的 3% 戊二醛,在 4 ℃ 固定 2h 或過夜,吸出固定劑,用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min ,再用 4 ℃ 預冷的 1% 鋨酸。在 4 ℃ 固定 1h ,然后用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min 。 3 、脫水 acetone / 醋酸異戊酯( 1 : 1 )脫水 10min ,接下來醋酸異戊酯脫水 30min ,或用系列梯度酒精( 30% 、 50% 、 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% )脫水,每種濃度酒精通過 2 次,每次 15min 。 英瀚斯掃描電鏡檢測生物樣本!四川整體掃描電鏡哪家效果好
掃描電鏡可用于觀察厚試樣。其在觀察厚試樣時,能得到高的分辨率和較為真實的形貌。掃描電子顯微的分辨率介于光學顯微鏡和透射電子顯微鏡之間。但在對厚塊試樣的觀察進行比較時,因為在透射電子顯微鏡中還要采用復膜方法,而復膜的分辨率通常只能達到10 nm,且觀察的不是試樣本身,因此,用掃描電子顯微鏡觀察厚塊試樣更有利,更能得到真實的試樣表面資料。在觀察形貌的同時,進行微區(qū)的成分分析。以及三維形貌的觀察和分析在大視場、低放大倍數(shù)下觀察樣品。用掃描電子顯微鏡觀察試樣的視場大。在掃描電子顯微鏡中,能同時觀察試樣的視場范圍F由下式來確定廣東靠譜的掃描電鏡服務英瀚斯生物,掃描電鏡、透射電鏡都在行!
掃描電鏡樣本干燥 以臨界干燥法較為理想,但必須要有專門的儀器臨界點干燥器。當實驗室不具備此種儀器時,可采用冰凍干燥法和乙腈干燥法。乙腈干燥法的關鍵是乙腈置換。樣品經(jīng)上述處理后,浸入 520% 的乙腈溶液中,然后依次更換 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% 的乙腈溶液,每次浸泡 15-20min ,較為后再換 100% 乙腈。然后進行真空干燥。即將乙腈置換后的樣品連同青霉素瓶一起放到真空鍍膜臺的真空裝置內,抽低真空,一般需 30-50min 。樣品干燥后,待其溫度升至室溫時再放氣,取出樣品。 使用掃描電鏡觀察細胞樣品的制備方法 5 、樣品導電處理 用真空噴鍍法。所用的儀器為真空噴鍍儀,樣品被安置在離蒸發(fā)源約 10-15cm 處的樣品臺上,樣品進行旋轉活動,先噴碳。后噴金,噴鍍應均勻,完成后鏡下觀察。
掃描電子顯微鏡(SEM)是一種介于透射電子顯微鏡和光學顯微鏡之間的一種觀察手段。其利用聚焦的很窄的高能電子束來掃描樣品,通過光束與物質間的相互作用,來激發(fā)各種物理信息,對這些信息收集、放大、再成像以達到對物質微觀形貌表征的目的。新式的掃描電子顯微鏡的分辨率可以達到1nm;放大倍數(shù)可以達到30萬倍及以上連續(xù)可調;并且景深大,視野大,成像立體效果好。此外,掃描電子顯微鏡和其他分析儀器相結合,可以做到觀察微觀形貌的同時進行物質微區(qū)成分分析。掃描電子顯微鏡在巖土、石墨、陶瓷及納米材料等的研究上有普遍應用。因此掃描電子顯微鏡在科學研究領域具有重大作用掃描電子顯微鏡正是根據(jù)上述不同信息產(chǎn)生的機理,采用不同的信息檢測器,使選擇檢測得以實現(xiàn)。
掃描電鏡照片是灰度圖像,分為二次電子像和背散射電子像,主要用于表面微觀形貌觀察或者表面元素分布觀察。 一般二次電子像主要反映樣品表面微觀形貌,基本和自然光反映的形貌一致,特殊情況需要對比分析。 背散射電子像主要反映樣品表面元素分布情況,越亮的區(qū)域,原子序數(shù)越高。 2、看表面形貌,電子成像,亮的區(qū)域高,暗的區(qū)域低。非常薄的薄膜,背散射電子會造成假像。導電性差時,電子積聚也會造成假像。掃描電鏡是一種多功能的儀器,具有制樣簡單、放大倍數(shù)可調范圍寬、圖像的分辨率高、景深大等特點。數(shù)十年來,掃描電鏡已普遍地應用在生物學、醫(yī)學、冶金學等學科的領域中。它可以觀察納米粒子的形貌、在基體中的分散情況以及粒徑的測量、材料斷口分析、鍍層表面形貌分析和深度檢測、微區(qū)化學成分分析及顯微組織及超微尺寸材料的研究等分析應用。掃描電鏡觀察厚試樣:其在觀察厚試樣時,能得到高的分辨率和比較真實的形貌。山西整體掃描電鏡多少錢
掃描電子顯微鏡、 或掃描電鏡,是強大的顯微鏡用電子來形成圖像。四川整體掃描電鏡哪家效果好
掃描電鏡以觀察樣品的表面形態(tài)為主。掃描電鏡樣品的制備,必須滿足以下要求: ?、俦3滞旰玫慕M織和細胞形態(tài); ?、诔浞直┞队^察的部位; ?、哿己玫膶щ娦院洼^高的二次電子產(chǎn)額; ④保持充分干燥的狀態(tài)。 某些含水量低且不易變形的生物材料,可以不經(jīng)固定和干燥而在較低加速電壓下直接觀察,如動物毛發(fā)、昆蟲、植物種子、花粉等,但圖像質量差,而且觀察和拍攝照片時須盡可能迅速。對大多數(shù)的生物材料,則應首先采用化學或物理方法固定、脫水和干燥,然后噴鍍碳與金屬以提高材料的導電性和二次電子產(chǎn)額。掃描電鏡生物樣品制備技術 常規(guī)掃描電鏡對樣品要求:必須是干燥的,不含水分或揮發(fā)性物質;具有一定機械強度,能耐受電子束轟擊;具有導電性,被激發(fā)時能夠產(chǎn)生足夠的二次電子。生物材料特點:含水分多,質地柔軟,機械強度小;組成元素的原子序數(shù)低,導電性差,激發(fā)后二次電子的產(chǎn)額較少。制樣的任務:通過一系列處理,既要盡量完美地保存材料的固有形態(tài),又要改良其物理性能,使其適合在電鏡下觀察成像 以下即為步驟方法、所需注意項目、以及操作中的使用技巧。四川整體掃描電鏡哪家效果好
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