關(guān)于免疫組化的封閉：用和二抗來源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min，然后甩去封閉用血清，勿洗；注意：封閉時間根據(jù)具體實驗調(diào)整；封閉液一般選用5%BSA或與二抗來源一致的血清，切記是BSA，不是PBS.很多論壇寫的是PBS,太坑了。①使用血清好還是BSA好？答：***是待檢樣本會非特異性的和蛋白結(jié)合，從而導致背景過高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合，從這點看，BSA和血清沒有明顯區(qū)別。第二是待檢樣本中可能會有Fc受體，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合，與抗體特異性無關(guān)，封閉血清中有抗體，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。BSA則無法封閉Fc受體。免疫組化IHC詳細介紹！青海什么是免疫組化價格

免疫組化中免疫膠體金技術(shù)，英瀚斯生物小編為您說明介紹。免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進行光鏡觀察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。四川小鼠免疫組化外包免疫組化技術(shù)的原理、分類和優(yōu)點！

免疫組化的DAB顯色時間如何把握？

1、DAB顯色時間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時間，到出現(xiàn)淺棕色本底時即可沖洗；

2、DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長，需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間；

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3、此外，若很短時間就出現(xiàn)背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時間；

4、DAB顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現(xiàn)陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（比較好一抗4度過夜）；另一方面就是封閉時間過長。

免疫組化分類中免疫酶標方法，英瀚斯生物為您介紹。免疫酶標方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術(shù)?；驹硎窍纫悦笜擞浀目贵w與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內(nèi)的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術(shù)是目前定位準確、對比度好、染色標本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標記方法，目前在病理診斷中廣為使用的當屬***法（過氧化物酶-抗過氧化物酶）、ABC法（卵白素-生物素-過氧化物酶復合物）、SP法（鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶）、即用型二步法（聚合物鏈接）等。英瀚斯生物自有專業(yè)病理染色實驗室，可做免疫組化。

免疫組化實驗注意事項總結(jié)：

?本實驗室所用切片一般是石蠟切片。

?烘片：使蠟片水分蒸發(fā)，石蠟軟化，組織切片牢固貼在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差異。

?抗原修復時，使片子始終浸沒在修復液中，液體不能干。

?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱，濕盒放置1h，省時間和結(jié)合效果好，不要超過1h，容易過染。

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?二抗使用：兩個二抗放大信號或一個二抗；若抗體信號強，可不用放大信號，盡量增大信噪比。

?10XDAB在常溫溶解，盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配，放于4度儲存時間久了效果不佳。

?復水和脫水時所用的梯度酒精不可混用，要區(qū)分開。

?加抗體和顯色液時，都要將片子甩干，在半干半濕的狀態(tài)下再加，不然容易造成溶液的二次稀釋。

?整個操作過程中在顯色之前，一定不能干片。 常見的免疫組化方法有哪些？山東大鼠免疫組化要多少錢

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免疫組化如何才能充分脫蠟？

 （1）蠟不溶于水，如果脫蠟不干凈，少許蠟存留于切片上，將會引起染色不均勻、陽性物時隱時現(xiàn)、真假難辨、背景染色增加等。為了解決上述的問題，切片在染色前必須徹底脫蠟，目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯，因它脫蠟力強，脫蠟時間較短； 

（2）脫蠟的時間要根據(jù)季節(jié)，室溫和試劑的新鮮謀面是在不同。如果在夏天，室溫較高，脫蠟試劑也新鮮，則脫蠟時間不需很多，3-5分鐘就已足夠。如果在冬天，室溫較低，脫蠟試劑也較陳舊，則脫蠟時間需要延長，10-20分鐘或更長。

（3）當天切的切片，燒烤2小時后進行染色，切片帶有溫度進行脫蠟這將可加速脫蠟的過程，如果預先切好烤好的切片，在染色前，還必須對切片進行加溫10-20分鐘，然后再行脫蠟，這樣脫蠟速度加快，效果魁偉更好?？傊?，操作時應根據(jù)不同的季節(jié)，不同的室溫，不同的試劑來決定，脫蠟的時間，原則上是要徹底、干凈、完全地脫去切片上的蠟。

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