確定來源不明的轉(zhuǎn)移瘤的原發(fā)部位,臨床上免疫組化也可以進(jìn)行操作。對于來源不明的轉(zhuǎn)移瘤,用免疫組化技術(shù)有助于確定惡性cancer的組織學(xué)來源,進(jìn)一步確定原發(fā)部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer、胰腺cancer中陽性,而在肺cancer、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細(xì)胞cancer;肌動蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、結(jié)蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫(yī)療及預(yù)后提供了依據(jù)。如何做好免疫組化實驗?福建切片免疫組化哪家好
免疫組化的優(yōu)缺點(diǎn)
免疫組化的優(yōu)點(diǎn)在于其高特異性和敏感性,能夠在組織原位檢測目標(biāo)蛋白的表達(dá)和分布。此外,免疫組化可以與其他技術(shù)(如熒光顯微鏡、電子顯微鏡)結(jié)合,提供更豐富的信息。然而,免疫組化也存在一些缺點(diǎn)。首先,實驗步驟復(fù)雜,需要優(yōu)化多個參數(shù)(如一抗?jié)舛取⒎跤龝r間)。其次,免疫組化的結(jié)果可能受到組織固定、抗原修復(fù)等因素的影響,導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果。此外,免疫組化的定量分析相對困難,通常只能進(jìn)行半定量分析。 黑龍江小鼠免疫組化推薦做好免疫組化,你需要了解這些!
免疫組化的顯色系統(tǒng)
免疫組化的顯色系統(tǒng)是將抗原-抗體反應(yīng)轉(zhuǎn)化為可見信號的關(guān)鍵步驟。常用的免疫組化顯色系統(tǒng)有DAB(3,3'-二氨基聯(lián)苯胺)和AEC(3-氨基-9-乙基咔唑)。DAB顯色產(chǎn)生棕色沉淀,適用于光學(xué)顯微鏡觀察。AEC顯色產(chǎn)生紅色沉淀,適用于光學(xué)顯微鏡觀察,但不適合長期保存。此外,還有熒光顯色系統(tǒng),如FITC(異硫氰酸熒光素)和TRITC(四甲基羅丹明異硫氰酸酯),適用于熒光顯微鏡觀察。選擇合適的顯色系統(tǒng)需要考慮實驗?zāi)康暮蜋z測設(shè)備。
細(xì)胞屬性的判定,免疫組化也可以進(jìn)行這方面的臨床應(yīng)用。通過特定抗體標(biāo)記出細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原成分,來判定細(xì)胞的屬性,確定cancer的來源。如細(xì)胞角蛋白(CK)是上皮性標(biāo)記,CK陽性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標(biāo)記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見于前列腺上皮;膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽性則提示膠質(zhì)cancer;CD20和CD79a陽性則提示B細(xì)胞淋巴瘤;平滑肌肌動蛋白(Actin)陽性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質(zhì)瘤中原cancer基因蛋白產(chǎn)物CD117陽性;血管源性cancer中內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD34陽性等等。如果您需要做實驗外包,可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。大鼠、小鼠組織免疫組化,找英瀚斯生物。
病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說的一句話應(yīng)該就是“做個免疫組化吧”;不管是臨床醫(yī)師,還是患者,他們問的多的問題則是“為什么要做免疫組化?”病理醫(yī)師通過“特殊染色”來進(jìn)行細(xì)胞的識別。這一做法的依據(jù)是特定細(xì)胞和組織中的成分不同、則化學(xué)性質(zhì)不同,通過染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色。不過,由于組織固定或儲存等,會造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失,因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展,根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì),則有了現(xiàn)在免疫組化的方法:不同細(xì)胞、不同組織中抗原有一定差異,抗體與被測組織中的特定抗原結(jié)合,進(jìn)而通過一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來。如有相應(yīng)顯色,則證實可能有被測抗原;無顯色則可能無被測抗原。當(dāng)然,這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”,如抗體的非特異性結(jié)合、非特異性顯色,則容易造成“假陽性”;或者雖有相關(guān)抗原、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等,則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗的增加,這些問題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免,前者如各種顯色方法的優(yōu)化;后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化、新型抗體開發(fā)及選擇。英瀚斯生物實驗外包,多種病理染色熟練掌握,可做免疫組化!貴州組織免疫組化哪家好
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免疫組化實驗流程介紹:
英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細(xì)步驟:
1、SP三步法
1)石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水。
2)0.3%或3%H2O2去離子水(無色液體)孵育10-30分鐘,以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。
3)蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘
4)候選步驟:采用抗原修復(fù):微波(建議30分鐘內(nèi)4次中火)、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻,再用3分鐘×3次.
5)血清封閉:室溫15-30分鐘,盡可能與二抗來源一致。傾去,勿洗。
6)滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,37℃孵育2~3小時或4℃過夜(比較好復(fù)溫)。PBS沖洗,3分鐘×5次。
7)滴加生物素標(biāo)記的二抗,室溫或37℃孵育30分鐘-1h。
8)PBS沖洗,3分鐘×5次。
9)滴加SP(鏈霉親和素-過氧化物酶),室溫或37℃孵育30分鐘-1h。
10)PBS沖洗,3分鐘×5次。
11)顯色劑顯色(DAB等)。
12)自來水充分沖洗。
13)可進(jìn)行復(fù)染,脫水,透明。
14)選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?福建切片免疫組化哪家好