Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease,簡稱λExonuclease)是一種具有特定特性和應用的酶,以下是其主要特點和應用:1.**特異性作用**:λExonuclease是一種5'→3'核酸外切酶,能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。2.**酶切活性**:對單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低,不能從DNA的切刻或缺口處起始消化。3.**嗜磷酸性**:該酶具有非常強的嗜磷酸性,磷酸化的核酸鏈與非磷酸化的核酸鏈的切割效率相差達200倍以上。4.**切割效率**:Lambda核酸外切酶是一種具有高度持續(xù)性的堿性核酸外切酶,可以連續(xù)地將核酸切割成為單個堿基,切割比較高速率可以達到1000nt/S。5.**應用領域**:-生成單鏈PCR產物用于DNA測序。-DNA單鏈構象多態(tài)性(SSCP)分析。-滾環(huán)擴增。-從雙鏈DNA片段生成單鏈DNA。-PCR產物的克隆。-質粒制備凈化。6.**酶活性定義**:Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoproduce10nmolofacid-solubledeoxyribonucleotidefromdouble-strandedsubstrateinatotalreactionvolumeof50μlin30minutesat37oCin1XLambdaExonucleaseReactionBufferwith1μgsonicatedduplex[3H]-DNA。其作用位點相對局限,主要作用于高甘露糖型和部分雜合型 N - 連接糖鏈,對于復雜型 N - 連接糖鏈的作用較弱。Recombinant Biotinylated Human MADCAM1 Protein,His-Avi Tag
磁珠法質粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米顆粒固相核酸富集技術來純化質粒DNA的產品。它通常包括高性能納米磁珠和獨特的緩沖體系組合,通過裂解菌體后釋放的DNA,能夠有效地結合于磁珠表面,漂洗除雜后獲得高質量的目的質粒。以下是磁珠法質粒小量抽提試劑盒的一些主要特點和應用:1.**快速簡便**:操作步驟簡單,無需多次離心,整個抽提過程通常只需20-25分鐘。2.**高得率和純度**:可以從1-5ml新鮮大腸桿菌菌液中分離純化2-20μg高質量的質粒DNA。純化得到的DNA質量高,完整性好,OD260/280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/230比值大于2.0。3.**適用性廣**:適用于1-5mL小體積高通量菌液質粒抽提,且抽提所得的質粒DNA可直接用于酶切、測序、文庫篩選、連接和轉化等各種下游分子生物學實驗。4.**自動化兼容**:可整合移液法自動化儀器和磁棒法自動化儀器進行高通量提取實驗。5.**安全性高**:操作過程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,更加環(huán)保和安全。6.**成本效益**:相比傳統(tǒng)的離心柱法,磁珠法可以減少離心次數(shù),獲得完整性更好的質粒,且操作更為簡便快捷。7.**操作靈活**:磁珠的使用量可靈活調節(jié),適合不同體積和濃度的樣品處理。Recombinant Biotinylated Human MADCAM1 Protein,His-Avi Tag泛素蛋白的C末端通常通過酰胺鍵與靶蛋白的氨基團連接在一起,最常見的是與靶蛋白賴氨酸的ε氨基團相連。
牛痘DNA拓撲異構酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)在實驗室中的使用主要涉及以下幾個步驟:1.**DNA載體連接**:-牛痘DNA拓撲異構酶I可以用于DNA載體連接,特別是在TOPO克隆載體制備中。它能夠識別并切割雙鏈DNA末端[5’C(T)CCTT],并與DNA形成共價連接形成穩(wěn)定復合物,遇到DNA的5’-OH基團后,重新連接形成完整DNA鏈。2.**接頭連接**:-在NGS建庫中,牛痘DNA拓撲異構酶I可用于接頭連接。這包括將含有特定序列的接頭A和接頭B與酶一起孵育,以實現(xiàn)DNA片段的連接。3.**操作步驟**:-**質粒解旋**:將超螺旋質粒DNA與牛痘DNA拓撲異構酶I混合,在37°C下孵育5-15分鐘,以實現(xiàn)質粒的解旋。-**接頭連接**:將接頭A(含CCCTT序列)和接頭B(含5’OH)與牛痘DNA拓撲異構酶I混合,在37°C下孵育5-15分鐘,以實現(xiàn)接頭的連接。4.**注意事項**:-雙鏈接頭A通常5’端做NH2封閉修飾,以防止自連接;接頭A的CCCTT后通常包含5-12bp尾巴,再長的尾巴會導致連接效率大幅下降。-雙鏈接頭B的5’端必須包含-OH。-由于該酶應用廣,在不同的實驗中使用策略不同,需要靈活運用,并根據(jù)具體文獻進行調整。
BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads是一種利用磁珠技術從血液中提取基因組DNA的試劑盒。以下是一些關鍵特點和應用:1.**高效提取**:該試劑盒采用特殊的磁珠和緩沖體系,能夠快速且高效地從100μl至1ml的血液中分離和純化高質量的基因組DNA。2.**磁珠特性**:獨特的磁珠具有很強的核酸親和力,在特定條件下可以快速分離和純化核酸。這些磁珠對磁場響應迅速,使得提取過程既安全又便捷。3.**提取過程**:血液樣本在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解,釋放出的基因組DNA與磁珠特異性結合。通過磁分離架的作用,磁珠與溶液快速分離,經過洗滌去除雜質,用洗脫液將基因組DNA從磁珠上洗脫下來。4.**應用廣**:提取的基因組DNA可用于多種分子生物學實驗,如PCR擴增、酶切、基因分型、Southern雜交、高通量測序、基因組DNA文庫構建等。5.**操作簡便**:整個抽提過程大約需要50分鐘,操作簡便,無需使用有毒有害的有機試劑,如酚或氯仿,提高了實驗的安全性。6.**高純度和高回收率**:提取的DNA純度高,A260/A280通常在1.7-1.9之間,表明蛋白和RNA的污染低?;厥章释ǔ3^80%。
牛痘DNA拓撲異構酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)是一種來源于牛痘病毒的I型真核拓撲異構酶,具有以下功能和應用:1.**功能**:-牛痘DNA拓撲異構酶I可以催化雙鏈DNA分子中單鏈DNA特定序列位置的磷酸二酯鍵的斷開和連接。-具有解超螺旋的酶(DNARelaxingEnzyme)活性,能夠通過快速的酶切和連接使雙鏈共價閉合環(huán)狀的正或負超螺旋DNA發(fā)生解超螺旋,形成含有較少的正或負超螺旋的雙鏈環(huán)狀DNA分子。-能夠使雙鏈DNA形成繩結(knotting)或解開繩結(unknotting),聯(lián)結互補的單鏈環(huán)狀DNA成為雙鏈環(huán)狀DNA。2.**應用**:-作為一種DNA重組連接的新型工具酶,用于DNA載體和重組片段的連接、缺刻修復、接頭連接等。-適用于TOPO克隆載體的制備、NGS建庫中的接頭連接等。-在TOPO克隆技術中,DNA拓撲異構酶I同時具有限制酶和連接酶特性,其生物學功能是在復制期間切割并重新連接DNA。3.**使用方法**:-用于DNA快速酶切流程,包括配制體系反應液、輕柔混勻、37℃孵育15分鐘等步驟。4.**儲存條件**:-建議在-25~-15℃保存,有效期為3年。5.**注意事項**:-避免起泡或劇烈攪拌、渦旋等操作,以防止酶失活。牛痘DNA拓撲異構酶I因其獨特的功能,在分子生物學研究和基因工程中扮演著重要的角色。泛素分子可以通過其內部的賴氨酸殘基(如Lys48)與其他泛素分子形成多聚泛素鏈。Recombinant Cynomolgus IL-3 Protein,His Tag
Endo H,糖苷內切酶 H 具有高度特異性的催化活性,它能夠特異性地水解 N - 連接寡糖鏈中兩個糖苷鍵。Recombinant Biotinylated Human MADCAM1 Protein,His-Avi Tag
5'-3'外切核酸酶活性是指DNA聚合酶能夠從DNA鏈的5'端向3'端切除核苷酸的能力。這種活性通常用于修復受損的DNA或去除錯誤配對的核苷酸。具體來說,5'-3'外切核酸酶活性可以在DNA合成過程中切除前方的核苷酸,幫助錯誤或不需要的序列,從而確保DNA的正確復制和修復。在DNA聚合酶中,5'-3'外切核酸酶活性與聚合酶活性相輔相成。聚合酶在合成新鏈時,5'-3'外切酶活性可以在發(fā)現(xiàn)錯誤時進行修正,確保合成的DNA鏈的準確性。例如,E.coliDNA聚合酶I具有這種外切酶活性,可以在合成過程中去除錯誤的核苷酸,從而提高DNA的保真度。需要注意的是,BstDNAPolymerase,LargeFragment不具有5'-3'外切核酸酶活性,這使得它在某些應用中更為穩(wěn)定,特別是在等溫擴增反應中,如LAMP(環(huán)介導等溫擴增)和RCA(滾環(huán)擴增)等。Recombinant Biotinylated Human MADCAM1 Protein,His-Avi Tag
在分子生物學實驗中,PCR技術是基因擴增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實驗提供了更直觀的監(jiān)測手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應緩沖液以及用于實時監(jiān)測的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯誤摻入的堿基,提高擴增產物的準確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯誤率更低,...