耐高鹽全能核酸酶與一般核酸酶的主要區(qū)別體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.**鹽耐受性**:-**耐高鹽全能核酸酶**:具有較高鹽濃度耐受性,在150-900mM鹽濃度范圍內(nèi)有效,尤其在600-700mM鹽濃度下活性比較好。-**一般核酸酶**:大多數(shù)全能核酸酶在高鹽環(huán)境下會(huì)失活,酶切效果降低。2.**活性條件**:-**耐高鹽全能核酸酶**:在0.5MNaCl條件下具有比較好活性,這使得它在高鹽環(huán)境下也能保持高效。-**一般核酸酶**:可能在低鹽或無鹽條件下活性更高,但在高鹽條件下活性受限。3.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-**耐高鹽全能核酸酶**:廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)工藝流程中高鹽環(huán)境下核酸污染去除,如病毒純化、疫苗生產(chǎn)、蛋白和多糖類制藥工業(yè)等。-**一般核酸酶**:可能更多用于一般的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),如DNA或RNA的降解,但不特別針對高鹽環(huán)境。4.**酶切效果**:-**耐高鹽全能核酸酶**:能夠有效去除核酸殘留,將所有類型的DNA和RNA降解為3~5個(gè)堿基片段。-**一般核酸酶**:酶切效果可能受到高鹽環(huán)境的影響,導(dǎo)致效率降低。5.**pH范圍**:-**耐高鹽全能核酸酶**:具有寬泛的pH范圍(7.0-11.0),在這一范圍內(nèi)保持活性。-**一般核酸酶**:可能具有更窄的pH活性范圍。FnCas12a的C端融合了核定位信號(NLS),有助于FnCas12a進(jìn)入細(xì)胞后定位至細(xì)胞核,提高基因編輯效率。Recombinant Human BD-3
T5核酸外切酶在基因克隆中的優(yōu)勢主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.**高效性**:T5核酸外切酶依賴性組裝(TEDA)方法在常規(guī)克隆中的效率與使用專有DNA聚合酶的商業(yè)In-Fusion方法相似,但高于使用T5核酸外切酶、PhusionDNA聚合酶和DNA連接酶的Gibson方法。2.**低成本**:TEDA方法每個(gè)反應(yīng)使用0.04U的T5核酸外切酶,價(jià)格為0.25美分,具有很高的成本效益。3.**簡單性**:TEDA方法的反應(yīng)混合物非常簡單,易于操作,這使得它在預(yù)算有限的實(shí)驗(yàn)室中尤其有用。4.**靈活性**:TEDA方法能夠組裝多個(gè)DNA片段,并在多個(gè)位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行定點(diǎn)誘變,提供了一種靈活的克隆和突變方法。5.**陽性克隆率**:使用T5核酸外切酶的無縫克隆技術(shù)可以確保100%的陽性克隆率,這提高了實(shí)驗(yàn)的成功率。6.**協(xié)同作用**:在無縫克隆中,T5核酸外切酶與Phusion高保真DNA聚合酶和TaqDNA連接酶協(xié)同作用,通過切割、填補(bǔ)和連接三個(gè)步驟,高效地完成DNA片段的連接。7.**減少污染**:T5核酸外切酶可以降解堿裂解提取質(zhì)粒中的變性DNA,減少超螺旋DNA的污染,提高DNA克隆和轉(zhuǎn)染效率。這些優(yōu)勢使得T5核酸外切酶成為基因克隆中一個(gè)非常有價(jià)值的工具,尤其是在需要高效、低成本和操作簡便的實(shí)驗(yàn)環(huán)境中。Recombinant Human HGFR/c-MET Protein,hFc TagPfu DNA Polymerase與Taq酶的對比:與Taq酶相比,Pfu DNA Polymerase的錯(cuò)誤率更低,適合高精度實(shí)驗(yàn)。
使用BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads(血液基因組DNA提取試劑盒,磁珠法)進(jìn)行血液樣本中基因組DNA的提取,主要步驟如下:1.**實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備**:準(zhǔn)備抗凝全血樣本(如EDTA抗凝血),移液器及無菌,15ml離心管,無水乙醇,70%乙醇,干凈的吸水紙,渦旋振蕩器,金屬浴/水浴,臺式離心機(jī)等。2.**樣本處理**:取適量血液樣本,根據(jù)試劑盒要求,可能需要將血液體積調(diào)整至特定量,例如200μl,并可能需要加入PBS緩沖液。3.**裂解血液細(xì)胞**:向血液樣本中加入蛋白酶K和細(xì)胞裂解液,渦旋混勻后,置于金屬浴或水浴中進(jìn)行裂解,通常在65°C孵育10-15分鐘,并在此期間定期混勻。4.**DNA與磁珠結(jié)合**:向裂解后的樣本中加入異丙醇和磁珠懸浮液,渦旋混勻后,室溫放置一段時(shí)間,以便于基因組DNA與磁珠結(jié)合。5.**磁珠分離**:將樣本置于磁力架上,待磁珠聚集后,小心移除上清液,去除雜質(zhì)。6.**洗滌磁珠**:向磁珠中加入漂洗液和洗滌液,進(jìn)行洗滌以去除殘留的蛋白質(zhì)和鹽分,然后再次使用磁力架分離磁珠,移除洗滌液。
BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads是一種利用磁珠技術(shù)從血液中提取基因組DNA的試劑盒。以下是一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**高效提取**:該試劑盒采用特殊的磁珠和緩沖體系,能夠快速且高效地從100μl至1ml的血液中分離和純化高質(zhì)量的基因組DNA。2.**磁珠特性**:獨(dú)特的磁珠具有很強(qiáng)的核酸親和力,在特定條件下可以快速分離和純化核酸。這些磁珠對磁場響應(yīng)迅速,使得提取過程既安全又便捷。3.**提取過程**:血液樣本在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解,釋放出的基因組DNA與磁珠特異性結(jié)合。通過磁分離架的作用,磁珠與溶液快速分離,經(jīng)過洗滌去除雜質(zhì),用洗脫液將基因組DNA從磁珠上洗脫下來。4.**應(yīng)用廣**:提取的基因組DNA可用于多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),如PCR擴(kuò)增、酶切、基因分型、Southern雜交、高通量測序、基因組DNA文庫構(gòu)建等。5.**操作簡便**:整個(gè)抽提過程大約需要50分鐘,操作簡便,無需使用有毒有害的有機(jī)試劑,如酚或氯仿,提高了實(shí)驗(yàn)的安全性。6.**高純度和高回收率**:提取的DNA純度高,A260/A280通常在1.7-1.9之間,表明蛋白和RNA的污染低?;厥章释ǔ3^80%。
Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease,簡稱λExonuclease)是一種具有特定特性和應(yīng)用的酶,以下是其主要特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**特異性作用**:λExonuclease是一種5'→3'核酸外切酶,能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。2.**酶切活性**:對單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低,不能從DNA的切刻或缺口處起始消化。3.**嗜磷酸性**:該酶具有非常強(qiáng)的嗜磷酸性,磷酸化的核酸鏈與非磷酸化的核酸鏈的切割效率相差達(dá)200倍以上。4.**切割效率**:Lambda核酸外切酶是一種具有高度持續(xù)性的堿性核酸外切酶,可以連續(xù)地將核酸切割成為單個(gè)堿基,切割比較高速率可以達(dá)到1000nt/S。5.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-生成單鏈PCR產(chǎn)物用于DNA測序。-DNA單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)分析。-滾環(huán)擴(kuò)增。-從雙鏈DNA片段生成單鏈DNA。-PCR產(chǎn)物的克隆。-質(zhì)粒制備凈化。6.**酶活性定義**:Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoproduce10nmolofacid-solubledeoxyribonucleotidefromdouble-strandedsubstrateinatotalreactionvolumeof50μlin30minutesat37oCin1XLambdaExonucleaseReactionBufferwith1μgsonicatedduplex[3H]-DNA。來源于 Thermococcus kodakaraensis,具有高熱穩(wěn)定性和校正能力,適用于長片段PCR和熱啟動(dòng)PCR。Recombinant Human TRAIL R2/DR5/TNFRSF10B Protein,His-Avi Tag
泛素從E1轉(zhuǎn)移到泛素結(jié)合酶E2的活性位點(diǎn)半胱氨酸殘基上,形成E2-泛素硫酯中間體。Recombinant Human BD-3
在PCR實(shí)驗(yàn)中,防止非特異性擴(kuò)增的關(guān)鍵在于優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件和采取一些特定的策略。以下是一些有效的方法:1.**優(yōu)化引物設(shè)計(jì)**:引物設(shè)計(jì)是PCR成功的關(guān)鍵。應(yīng)確保引物序列具有高度特異性,避免與非目標(biāo)序列互補(bǔ)。使用在線工具進(jìn)行引物設(shè)計(jì),并進(jìn)行BLAST搜索以確認(rèn)特異性。2.**使用熱啟動(dòng)PCR**:熱啟動(dòng)PCR技術(shù)可以抑制室溫下的DNA聚合酶活性,減少非特異性擴(kuò)增。這種方法通過在高溫下激起酶的活性,從而在PCR體系配制階段降低引物與模板或引物與引物之間的非特異性結(jié)合。3.**調(diào)整Mg2+濃度**:Mg2+濃度對PCR擴(kuò)增的特異性和產(chǎn)量有重要影響。過高的Mg2+濃度可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增,因此需要優(yōu)化Mg2+濃度以獲得比較好的結(jié)果。4.**退火溫度優(yōu)化**:退火溫度對PCR特異性至關(guān)重要。較高的退火溫度有助于減少非特異性結(jié)合,但過高的退火溫度可能會(huì)降低引物與模板的結(jié)合效率。通常,退火溫度設(shè)置比引物的Tm值低5°C左右。5.**使用降落PCR**:降落PCR(TouchdownPCR)通過在初始循環(huán)中使用較高的退火溫度,然后逐漸降低退火溫度,從而在PCR開始時(shí)減少非特異性擴(kuò)增,同時(shí)在后續(xù)循環(huán)中保持特異性擴(kuò)增。Recombinant Human BD-3
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,...