IdeSProtease是一種免疫球蛋白G(IgG)特異性降解酶,它能夠在IgG的鉸鏈區(qū)下方的一個(gè)特定位點(diǎn)進(jìn)行切割,產(chǎn)生F(ab')2和Fc片段。這種酶是通過(guò)大腸桿菌(E.coli)表達(dá)系統(tǒng)重組表達(dá)生產(chǎn)的,并且經(jīng)過(guò)分子改造,使其具有更高的酶活和更廣的底物特異性。在生產(chǎn)過(guò)程中,確保IdeSProtease符合GMP(良好生產(chǎn)規(guī)范)標(biāo)準(zhǔn),需要進(jìn)行以下步驟:1.**分子改造**:通過(guò)分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)IdeS進(jìn)行改造,增強(qiáng)其穩(wěn)定性和比活性。2.**大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)**:利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行IdeS的重組表達(dá),確保無(wú)動(dòng)物源性成分,減少病毒污染風(fēng)險(xiǎn)。3.**純化**:通過(guò)高度純化過(guò)程,確保IdeS的純度達(dá)到≥95%。4.**酶活定義**:1個(gè)酶活力單位定義為在37°C條件下,30分鐘內(nèi)酶切1μg重組單克隆IgG所需的酶量。5.**質(zhì)量控制**:每批產(chǎn)品都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制,以確保產(chǎn)品批間穩(wěn)定性和高穩(wěn)定性。6.**儲(chǔ)存條件**:采用適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件,如-30℃至-10℃凍存,確保產(chǎn)品在有效期內(nèi)保持活性和穩(wěn)定性。7.**微生物學(xué)安全性檢測(cè)**:進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)、體內(nèi)有毒物質(zhì)的檢測(cè)、抗生物質(zhì)殘留檢測(cè)、宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)和病毒安全性檢測(cè),確保產(chǎn)品符合微生物學(xué)安全性要求。
大腸桿菌表達(dá)的重組抑肽酶(Aprotinin)是一種通過(guò)基因工程技術(shù)在大腸桿菌中生產(chǎn)的蛋白酶抑制劑,具有以下特性和應(yīng)用:1.**來(lái)源**:重組抑肽酶是通過(guò)大腸桿菌(E.coli)表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的,確保了無(wú)動(dòng)物源性成分,減少了病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)。2.**結(jié)構(gòu)**:它是一種單體球狀蛋白,由58個(gè)氨基酸組成,具有三個(gè)交聯(lián)二硫鍵的單個(gè)多肽鏈。3.**功能**:作為一種競(jìng)爭(zhēng)性、可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑,重組抑肽酶能夠抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、激肽釋放酶和血纖維蛋白溶酶等的活性。4.**應(yīng)用**:在生物技術(shù)過(guò)程中,重組抑肽酶可以替代動(dòng)物源性抑肽酶,用于重組蛋白生產(chǎn)中抑制絲氨酸蛋白酶的活性,以及在細(xì)胞培養(yǎng)等過(guò)程中。5.**產(chǎn)品信息**:通常以粉末形式提供,具有明確的貨號(hào)和規(guī)格,如1mg或10mg的包裝。6.**產(chǎn)品性質(zhì)**:包括外觀(guān)、溶解度、純度、蛋白含量、酶濃度和活性定義等詳細(xì)參數(shù)。7.**儲(chǔ)存條件**:凍干粉在2~8℃保存,有效期為2年。8.**使用方法**:推薦的結(jié)合pH>6.0,在pH<3.0的條件下不結(jié)合,可直接使用0.9%NaCl溶解,溶解后可-20℃儲(chǔ)存。9.**注意事項(xiàng)**:產(chǎn)品作科研用途,操作時(shí)需穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。Recombinant Mouse B2M/beta 2-Microglobulin Protein,hFc Tag盡管Ultra-Long Master Mix設(shè)計(jì)用于長(zhǎng)片段擴(kuò)增,但在某些情況下,可能出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增,需要通過(guò)優(yōu)化引物。
重組的化膿性鏈球菌Cas9蛋白(SpCas9)是一種用于基因組編輯的核酸酶。它是CRISPR-Cas系統(tǒng)的一部分,該系統(tǒng)是一種細(xì)菌和古菌的適應(yīng)性免疫防御機(jī)制,能夠識(shí)別并切割入侵的外源核酸。Cas9蛋白在CRISPR系統(tǒng)中起到關(guān)鍵作用,它能夠識(shí)別特定的原間隔子相鄰基序(PAM),在引導(dǎo)RNA(gRNA)的引導(dǎo)下與目標(biāo)DNA結(jié)合并進(jìn)行切割。SpCas9蛋白由1053個(gè)氨基酸組成,相對(duì)較小的體積使其便于在體內(nèi)遞送,因此它在多種生物中都能進(jìn)行有效的基因組編輯。為了提高SpCas9的表達(dá)量和溶解度,研究人員采用了多種策略,例如使用GB1促溶標(biāo)簽和多重啟動(dòng)子策略,這些策略可以顯著提高蛋白的產(chǎn)量和活性,同時(shí)保持其功能活性不受影響。在基因編輯過(guò)程中,SpCas9與gRNA形成穩(wěn)定的核糖核的蛋白(RNP)復(fù)合物,通過(guò)gRNA與基因組DNA的序列匹配來(lái)識(shí)別目標(biāo)位點(diǎn),并在距離NGGPAM序列3個(gè)堿基以?xún)?nèi)的位置切割DNA。為了增強(qiáng)SpCas9的基因組編輯效率,研究人員還開(kāi)發(fā)了嵌合融合蛋白,例如與5’至3’核酸外切酶重組J(RecJ)或GFP融合的SpyCas9蛋白,這些嵌合蛋白可以顯著提高靶向基因編輯效率,同時(shí)保持較低的脫靶效應(yīng)。
重組Exendin-4在科研方面的作用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.**糖尿病研究**:重組Exendin-4作為一種GLP-1受體激動(dòng)劑,其在2型糖尿?。═2DM)方面具有的療效,能夠模擬GLP-1的作用,增加胰島素的分泌,抑制胰高的血糖素的分泌,從而降低糖水平。2.**藥物開(kāi)發(fā)**:Exendin-4的結(jié)構(gòu)和功能特性使其成為開(kāi)發(fā)新型糖尿病藥物的重要候選物質(zhì)。科研人員通過(guò)基因工程方法構(gòu)建長(zhǎng)效融合蛋白,以延長(zhǎng)Exendin-4的半衰期,提高其效果和降低生產(chǎn)成本。3.**分子機(jī)制研究**:科研中對(duì)Exendin-4的作用機(jī)制進(jìn)行了深入研究,包括其對(duì)胰島β細(xì)胞的作用、對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用,以及其在胰島移植受者中增加胰島素分泌量的效果。4.**生物合成研究**:通過(guò)生物工程技術(shù),如基因序列優(yōu)化和密碼子改造,提高Exendin-4在宿主細(xì)胞中的表達(dá)效率,以及通過(guò)純化工藝提高其純度,為臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)。5.**藥理作用及機(jī)制研究**:Exendin-4的藥理作用及其機(jī)制是科研關(guān)注的重點(diǎn),包括其對(duì)胰島素分泌的影響、對(duì)胰島β細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)控,以及其在減緩胃排空和抑制食欲方面的作用。UBE2L3在調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路中的作用可能對(duì)免疫反應(yīng)和炎癥過(guò)程至關(guān)重要。
通過(guò)EndoS糖苷內(nèi)切酶S進(jìn)行糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)分析通常涉及以下步驟:1.**樣本準(zhǔn)備**:首先,需要獲得糖蛋白的純化樣本,以確保分析的準(zhǔn)確性。2.**酶的準(zhǔn)備**:準(zhǔn)備適量的EndoS糖苷內(nèi)切酶S,根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇合適的濃度和緩沖體系。3.**酶切反應(yīng)**:-將糖蛋白樣本與EndoS酶混合,在適宜的條件下(如pH、溫度等)進(jìn)行酶切反應(yīng)。-反應(yīng)時(shí)間根據(jù)EndoS的活性和所需的切割程度來(lái)確定。4.**終止反應(yīng)**:在達(dá)到預(yù)期的酶切時(shí)間后,通過(guò)加熱或添加適當(dāng)?shù)木彌_液來(lái)終止酶切反應(yīng)。5.**分離純化**:-使用色譜技術(shù)(如凝膠滲透色譜、離子交換色譜等)將酶切后的糖蛋白和釋放的糖鏈分離。-純化過(guò)程可能需要多步色譜以確保糖鏈的純度。6.**糖鏈分析**:-對(duì)分離得到的糖鏈進(jìn)行進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)分析,可能包括質(zhì)譜分析、核磁共振(NMR)波譜分析等。-可以使用高分辨率的質(zhì)譜技術(shù),如MALDI-TOF或ESI-MS,來(lái)確定糖鏈的精確質(zhì)量。7.**序列鑒定**:通過(guò)與已知糖鏈數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),確定糖鏈的序列和結(jié)構(gòu)。8.**功能分析**:研究酶切后的糖蛋白和釋放的糖鏈對(duì)生物活性的影響,如結(jié)合特性、免疫原性等。9.**數(shù)據(jù)分析**:收集所有數(shù)據(jù)并進(jìn)行綜合分析,以揭示糖鏈結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。
CRISPR/Cas12a 是一種單一的RNA引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶,通過(guò)CRISPR/Cas9系統(tǒng)為靶向基因組工程提供了新的機(jī)會(huì)。dITP,100mM Solution 脫氧肌苷三磷酸溶液(100 mM)
NLS-Cas9Nuclease是一種重組的化膿性鏈球菌Cas9蛋白,它在N端和C端都添加了核定位信號(hào)(NLS),這使得它能夠更有效地進(jìn)入細(xì)胞核并進(jìn)行基因組編輯。這種蛋白與CRISPR/Cas9系統(tǒng)的引導(dǎo)RNA(gRNA)形成穩(wěn)定的核糖核的蛋白(RNP)復(fù)合物,可以在進(jìn)入細(xì)胞后立即定位到細(xì)胞核,從而誘導(dǎo)特定的DNA雙鏈斷裂,實(shí)現(xiàn)基因編輯。與傳統(tǒng)的mRNA或質(zhì)粒系統(tǒng)相比,使用NLS-Cas9Nuclease不需要轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程,因此可以避免將外源DNA插入基因組的風(fēng)險(xiǎn),這對(duì)于基因編輯尤其有用。NLS-Cas9Nuclease的特點(diǎn)包括:1.無(wú)DNA:系統(tǒng)不添加外部DNA,降低了插入外源DNA的風(fēng)險(xiǎn)。2.高切割效率:雙NLS確保Cas9蛋白高效進(jìn)入細(xì)胞核。3.低脫靶效應(yīng):Cas9核酸酶的瞬時(shí)表達(dá)提高了切割的特異性。4.節(jié)省時(shí)間:無(wú)需轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程。這種核酸酶可以用于體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA,以及通過(guò)電穿孔或注射與特定gRNA結(jié)合時(shí)的體內(nèi)基因編輯。產(chǎn)品的保存條件通常是在-25~-15℃,有效期為一年。使用時(shí),可以根據(jù)推薦的反應(yīng)體系進(jìn)行體外DNA裂解實(shí)驗(yàn),并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)消化效率。具體產(chǎn)品的詳細(xì)信息和應(yīng)用指南,可以參考金斯瑞生物科技有限公司、NEB、金斯瑞、YEASEN和Novoprotein等公司提供的資料。dITP,100mM Solution 脫氧肌苷三磷酸溶液(100 mM)
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過(guò)添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀(guān)的監(jiān)測(cè)手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱(chēng),其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過(guò)程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,...