pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是通過(guò)將ProteinA與Tn5轉(zhuǎn)座酶進(jìn)行融合來(lái)構(gòu)建的。ProteinA是一種來(lái)源于金黃色葡萄球菌的蛋白質(zhì),它具有高親和力結(jié)合大多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG抗體的Fc片段的能力。Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種能夠識(shí)別特定DNA序列并在基因組上進(jìn)行“剪切-粘貼”或“復(fù)制-粘貼”的酶。融合ProteinA的目的是為了在實(shí)驗(yàn)中實(shí)現(xiàn)對(duì)特定蛋白質(zhì)的靶向。下面是pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶融合的一般步驟:1.**基因克隆**:首先,將Tn5轉(zhuǎn)座酶的基因和ProteinA的基因克隆到一個(gè)表達(dá)載體中。這通常涉及到分子克隆技術(shù),如PCR擴(kuò)增、限制性內(nèi)切酶消化和連接酶連接。2.**融合蛋白設(shè)計(jì)**:設(shè)計(jì)一個(gè)融合蛋白,其中ProteinA的基因序列和Tn5轉(zhuǎn)座酶的基因序列通過(guò)一個(gè)短的連接肽(LinkerPeptide)相連。這個(gè)連接肽通常包含幾個(gè)氨基酸殘基,以確保兩個(gè)蛋白部分在融合后仍能保持各自的構(gòu)象和功能。3.**表達(dá)載體構(gòu)建**:將融合基因插入到適合的表達(dá)載體中,這個(gè)載體應(yīng)該包含適當(dāng)?shù)膯?dòng)子、標(biāo)記基因(如抗性基因)和終止子,以確保融合蛋白在宿主細(xì)胞中得到高效表達(dá)。4.**宿主細(xì)胞表達(dá)**:將構(gòu)建好的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞(如大腸桿菌)中,通過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白。泛素化是一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾過(guò)程,涉及將泛素分子共價(jià)結(jié)合到靶蛋白上。這個(gè)過(guò)程由一系列酶促反應(yīng)組成。Recombinant Human HVEM/TNFRSF14 Protein,hFc Tag
dITP(脫氧肌苷三磷酸)在PCR(聚合酶鏈反應(yīng))擴(kuò)增中的應(yīng)用是特定和有限的。以下是dITP在PCR擴(kuò)增中的一些關(guān)鍵點(diǎn):1.**PCR擴(kuò)增中的使用**:dITP可以在某些類型的PCR中替代部分dGTP,特別是在使用某些特殊的DNA聚合酶時(shí),例如那些不具有校正(proofreading)功能的酶。2.**替代比例**:在PCR中,dITP通常不能完全替代dGTP,因?yàn)檫@樣做可能會(huì)抑制PCR擴(kuò)增反應(yīng)。通常推薦在PCR反應(yīng)中使用10%的dITP來(lái)代替dGTP。3.**特殊DNA聚合酶**:某些高保真DNA聚合酶,如碧云天生產(chǎn)的Q6U?高保真DNA聚合酶,可以與dITP一起使用,以提高PCR擴(kuò)增的特異性和效率。4.**dNTP/dITP混合物**:在一些PCR應(yīng)用中,會(huì)使用dNTP/dITP混合物,其中包含2.5mM每種dNTP加上0.25mM的dITP,以優(yōu)化擴(kuò)增條件。5.**PCR反應(yīng)條件**:dITP的使用可能需要優(yōu)化PCR反應(yīng)條件,包括退火溫度、Mg2+濃度和循環(huán)次數(shù)。6.**穩(wěn)定性和儲(chǔ)存**:dITP溶液應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C或更低的溫度下,以保持其穩(wěn)定性。使用時(shí)應(yīng)避免多次凍融,以防止降解。7.**安全性和專業(yè)性**:dITP和其他PCR組分應(yīng)由專業(yè)人員用于科研目的,不應(yīng)在臨床診斷中使用。Recombinant Human ENPP-3 (558-875) Protein,His TagSpCas9-NLS的N端和C端都融合了SV40 T抗原的核定位信號(hào),這使得Cas9蛋白與gRNA形成的復(fù)合物。
磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米分離技術(shù)和細(xì)菌細(xì)胞的SDS堿裂解法從菌體中提取高質(zhì)量質(zhì)粒DNA的實(shí)驗(yàn)工具。以下是一些關(guān)于磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒的關(guān)鍵信息:1.**操作簡(jiǎn)便性**:-操作快速簡(jiǎn)單,可以在60分鐘內(nèi)完成96個(gè)不同樣品的提取,實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒提取的高通量化和自動(dòng)化。2.**高純度和高產(chǎn)量**:-抽提得到的質(zhì)粒純度高,OD260/OD280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/OD230比值大于2.0,可以直接用于轉(zhuǎn)化、DNA測(cè)序、PCR和酶切等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3.**試劑盒組件**:-包含BufferMP1、BufferMP2、BufferMP3、PureMagBeads、BufferMPB、TEBuffer(pH8.0)、RNaseA等組分。4.**應(yīng)用范圍**:-適用于從大腸桿菌中抽提小量質(zhì)粒,所得質(zhì)??芍苯佑糜诩?xì)胞轉(zhuǎn)染、DNA測(cè)序、PCR等實(shí)驗(yàn)。5.**效率和純度**:-與同類產(chǎn)品相比,提取效率更高,獲得質(zhì)粒的純度更高;與柱式法相比,可減少離心次數(shù),獲得完整性更好的質(zhì)粒。6.**注意事項(xiàng)**:-例如,SgMagBeads需要充分洗滌和干燥,以保證無(wú)乙醇?xì)埩?,并且在吸取上清時(shí)避免吸入SgMagBeads。7.**保存條件**:-室溫保存,有效期一年。磁珠長(zhǎng)期不使用時(shí),可以4℃保存以延長(zhǎng)保存時(shí)間。
5'DNA腺苷?;噭┖兄惺褂玫拿竿ǔ1环Q為腺苷?;?Adenylase),這種酶能夠催化5'端磷酸化的單鏈DNA或RNA(pDNA或pRNA)轉(zhuǎn)換成5'端腺苷酰化DNA或RNA(AppDNA或AppRNA)。根據(jù)搜索結(jié)果,該酶的來(lái)源是嗜熱古細(xì)菌,在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)并純化而獲得。這種酶在反應(yīng)中將ATP分解成AMP和PPi,然后將AMP轉(zhuǎn)移到單鏈DNA的5'磷酸基團(tuán)上,形成腺苷酰化單鏈DNA,從而制備出腺苷酰化接頭(linker)。此外,一些5'DNA腺苷?;噭┖兄惺褂玫拿甘荕thRNA連接酶(例如NEB#M2611A),這種酶也用于生成高產(chǎn)量的5'腺苷酰化DNA,并且操作簡(jiǎn)便,具有超過(guò)95%的效率,無(wú)需凝膠純化即可完成單步反應(yīng)。MthRNA連接酶是一種已知能夠在65℃下有效工作的酶,有助于避免DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)腺苷?;磻?yīng)的干擾。這些酶的高效率和特異性使得5'DNA腺苷?;噭┖性趩捂淒NA的5'端腺苷?;揎椫蟹浅S行?,常用于miRNA等3'端為羥基的RNA或單鏈DNA在克隆、高通量測(cè)序建庫(kù)或PCR檢測(cè)等應(yīng)用中。來(lái)源于Francisella tularensis:FnCas12a是一種來(lái)源于Francisella tularensis菌株的核酸內(nèi)切酶。
PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行電泳分析通常涉及以下步驟:PCR擴(kuò)增:首先使用PCR Master Mix和特定的引物對(duì)目標(biāo)DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物的準(zhǔn)備:如果使用的是含有預(yù)混凝膠加載染料的PCR Master Mix(如某些Blood Direct PCR Master Mix),則PCR產(chǎn)物在擴(kuò)增后已經(jīng)含有了適合電泳的染料。如果沒(méi)有使用含染料的Master Mix,則需要在PCR反應(yīng)完成后向產(chǎn)物中添加適量的凝膠加載染料。電泳槽的準(zhǔn)備:清潔電泳槽,確保沒(méi)有灰塵或殘留物。安裝電泳板和梳子,注意密封以防緩沖液泄漏。灌注緩沖液:向電泳槽中灌注適量的電泳緩沖液,常用的緩沖液有1X TAE或1X TBE。PCR產(chǎn)物的加載:將PCR產(chǎn)物輕輕混合均勻,避免氣泡的產(chǎn)生。使用移液槍或微量移液管將PCR產(chǎn)物加入到凝膠孔中。如果PCR Master Mix中已含有染料,通常不需要額外添加。電泳條件的設(shè)置:根據(jù)PCR產(chǎn)物的大小和凝膠的濃度選擇合適的電壓和時(shí)間進(jìn)行電泳。例如,較小的DNA片段可能需要較高的電壓,而較大的片段則可能需要較低的電壓和更長(zhǎng)的時(shí)間。通過(guò)測(cè)序或基于PCR的方法(如T7E1酶切和測(cè)序)來(lái)驗(yàn)證gRNA的編輯效率,篩選出效率高的gRNA序列 。Recombinant Mouse BST2 Protein,His Tag
全長(zhǎng)A2aR蛋白可應(yīng)用于免疫、ELISA、SPR(表面等離子共振)、BLI(生物層干涉)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)等場(chǎng)景。Recombinant Human HVEM/TNFRSF14 Protein,hFc Tag
dGTPSolution(脫氧鳥(niǎo)苷三磷酸溶液)在分子克隆中扮演著重要角色,主要應(yīng)用包括但不限于以下幾個(gè)方面:1.**DNA合成**:dGTP作為DNA聚合酶的底物之一,在分子克隆中用于合成新的DNA鏈,特別是在PCR擴(kuò)增和cDNA合成中。2.**PCR擴(kuò)增**:在常規(guī)PCR和高保真PCR中,dGTP提供必要的核苷酸,以確保目標(biāo)DNA片段的準(zhǔn)確復(fù)制。3.**cDNA合成**:在從mRNA模板合成cDNA的過(guò)程中,dGTP是合成互補(bǔ)DNA鏈的關(guān)鍵成分。4.**DNA測(cè)序**:dGTP也用于Sanger測(cè)序等DNA測(cè)序技術(shù)中,幫助合成測(cè)序反應(yīng)中的DNA鏈。5.**質(zhì)粒構(gòu)建**:在質(zhì)?;蚱渌d體的構(gòu)建過(guò)程中,dGTP可能用于填補(bǔ)缺口或連接DNA片段。6.**引物延伸**:在引物延伸反應(yīng)中,dGTP用于延伸引物,以合成完整的DNA鏈。7.**DNA標(biāo)記**:dGTP可以用于DNA片段的標(biāo)記,便于后續(xù)的克隆和檢測(cè)。dGTPSolution通常以100mM的濃度提供,以便于在實(shí)驗(yàn)中根據(jù)需要進(jìn)行稀釋。在使用時(shí),應(yīng)確保產(chǎn)品具有高純度、無(wú)DNase和RNase污染,以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。此外,dGTPSolution應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C的條件下,避免反復(fù)凍融,以保持其穩(wěn)定性。Recombinant Human HVEM/TNFRSF14 Protein,hFc Tag
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過(guò)添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測(cè)手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過(guò)程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,...