T4UvsX重組酶的保存和純化是實(shí)驗(yàn)室工作流程中的重要環(huán)節(jié),確保了酶的穩(wěn)定性和活性。以下是根據(jù)搜索結(jié)果提供的信息:保存條件:-T4UvsX重組酶通常在-20°C的條件下保存,可以保持3年的有效期。-某些產(chǎn)品說(shuō)明中提到,該制品不含甘油,可用于建立凍干體系,這可能對(duì)長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸有額外的好處。-建議避免反復(fù)凍融,因?yàn)檫@可能會(huì)影響酶的活性。純化過(guò)程:-T4UvsX重組酶是由大腸桿菌表達(dá)和純化的。這意味著科學(xué)家首先將T4噬菌體的uvsX基因克隆到適合在大腸桿菌中表達(dá)的質(zhì)粒載體中。-然后將這個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌宿主細(xì)胞中,使其表達(dá)T4UvsX蛋白。-接下來(lái),通過(guò)一系列生化步驟從大腸桿菌細(xì)胞中提取和純化T4UvsX蛋白,這些步驟可能包括細(xì)胞裂解、離心、層析等技術(shù)。注意事項(xiàng):-T4UvsX重組酶的保存液中甘油含量為20%,建議單獨(dú)分裝保存,以避免反復(fù)凍融。-該酶無(wú)核酸酶活性,這表明它在催化反應(yīng)時(shí)不會(huì)切割DNA鏈,而是促進(jìn)DNA鏈的重組。-本產(chǎn)品用于科研用途,不應(yīng)用于臨床診斷。應(yīng)用:-T4UvsX重組酶主要用于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA),這是一種快速、靈敏的核酸檢測(cè)技術(shù)。通過(guò)遵循這些保存和純化指南,研究人員可以確保T4UvsX重組酶在實(shí)驗(yàn)中的有效性和可靠性。研究泛素-蛋白酶體途徑:重組人泛素可用于研究泛素化修飾和蛋白降解過(guò)程。Recombinant Human FGFR1 alpha (IIIc) Protein,His-Avi Tag
pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過(guò)特殊改造的融合蛋白,由ProteinA和高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶組成,具有以下主要應(yīng)用:1.**高通量測(cè)序建庫(kù)**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶可以用于快速構(gòu)建用于高通量測(cè)序的DNA文庫(kù),通過(guò)其轉(zhuǎn)座酶活性實(shí)現(xiàn)DNA片段化,同時(shí)加上測(cè)序接頭,簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)DNA測(cè)序建庫(kù)的多步過(guò)程。2.**CUT&Tag技術(shù)**:這是一種新興的蛋白質(zhì)與DNA相互作用研究方法,pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶利用ProteinA與特定抗體結(jié)合,將轉(zhuǎn)座酶帶到目標(biāo)蛋白附近進(jìn)行DNA切割和標(biāo)簽添加,實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的高通量測(cè)序分析。CUT&Tag技術(shù)具有高特異性、低背景噪音、高靈敏度、良好重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn),適用于表觀遺傳學(xué)、干細(xì)胞等領(lǐng)域的研究。3.**ATAC-seq**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶也可用于ATAC-seq實(shí)驗(yàn),這是一種研究染色質(zhì)可及性的方法,通過(guò)轉(zhuǎn)座酶在沒(méi)有核酸酶消化的情況下切割染色質(zhì)DNA,然后在切割位點(diǎn)加上測(cè)序接頭,進(jìn)行后續(xù)的測(cè)序分析。4.**轉(zhuǎn)錄組測(cè)序快速建庫(kù)**:有研究開(kāi)發(fā)了基于Tn5轉(zhuǎn)座酶的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序快速建庫(kù)方法,例如SHERRY方法,它利用Tn5轉(zhuǎn)座酶直接作用于RNA/DNA雜交鏈,簡(jiǎn)化了建庫(kù)過(guò)程,適用于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,提高了樣本的利用率和測(cè)序速度。
Lambda核酸外切酶的生產(chǎn)和應(yīng)用涉及到多種生物技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù),主要包括:1.**基因克?。℅eneCloning)**:首先將Lambda核酸外切酶的基因從噬菌體λ的基因組中克隆出來(lái),并插入到質(zhì)?;蚱渌d體中。2.**轉(zhuǎn)化(Transformation)**:將含有Lambda核酸外切酶基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞,通常是大腸桿菌(E.coli),以便于在這些細(xì)胞中表達(dá)Lambda核酸外切酶。3.**表達(dá)系統(tǒng)(ExpressionSystems)**:利用原核或真核表達(dá)系統(tǒng)在宿主細(xì)胞中表達(dá)Lambda核酸外切酶的蛋白。4.**蛋白質(zhì)純化(ProteinPurification)**:使用各種色譜技術(shù),如親和層析、離子交換層析、凝膠過(guò)濾層析等,從宿主細(xì)胞的裂解物中分離和純化Lambda核酸外切酶。5.**PerfectProtein?技術(shù)平臺(tái)**:這是一種專(zhuān)有技術(shù),用于生產(chǎn)高質(zhì)量的重組蛋白,包括Lambda核酸外切酶。6.**熱失活(HeatInactivation)**:在某些應(yīng)用中,可能需要通過(guò)熱處理來(lái)失活Lambda核酸外切酶,以終止其催化活性。7.**熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FluorescenceResonanceEnergyTransfer,FRET)**:這是一種用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)酶活性和動(dòng)力學(xué)的技術(shù),可用于研究Lambda核酸外切酶降解核酸的機(jī)制。
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中的逆轉(zhuǎn)錄酶(ReverseTranscriptase,RT)具有一個(gè)關(guān)鍵特性:它們通過(guò)特定的突變消除了RNaseH活性。RNaseH是一種通常與某些逆轉(zhuǎn)錄酶相關(guān)的酶活性,它能夠降解RNA。然而,在1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中,逆轉(zhuǎn)錄酶被設(shè)計(jì)成不具有這種降解RNA的能力,從而在合成cDNA的鏈時(shí)保護(hù)RNA模板不被降解。以下是1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程的一般步驟,以及如何避免RNA降解:1.**RNA模板準(zhǔn)備**:首先確保RNA模板的純度和完整性,避免DNA污染??梢酝ㄟ^(guò)DNaseI處理去除RNA樣品中的DNA污染。2.**混合反應(yīng)組分**:將RNA模板、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)、逆轉(zhuǎn)錄引物(如oligo(dT)或隨機(jī)引物)和緩沖液混合。3.**逆轉(zhuǎn)錄酶添加**:加入經(jīng)過(guò)突變處理的逆轉(zhuǎn)錄酶,這種酶缺乏RNaseH活性,因此不會(huì)在合成過(guò)程中降解RNA。4.**逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)**:在適宜的溫度下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),逆轉(zhuǎn)錄酶根據(jù)RNA模板合成cDNA鏈。5.**終止反應(yīng)**:通過(guò)加熱至一定溫度來(lái)終止逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。通過(guò)使用PNGase F去除糖蛋白上的糖鏈,可以確定蛋白質(zhì)是否發(fā)生糖基化,以及糖基化位點(diǎn)。
磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米分離技術(shù)和細(xì)菌細(xì)胞的SDS堿裂解法從菌體中提取高質(zhì)量質(zhì)粒DNA的實(shí)驗(yàn)工具。以下是一些關(guān)于磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒的關(guān)鍵信息:1.**操作簡(jiǎn)便性**:-操作快速簡(jiǎn)單,可以在60分鐘內(nèi)完成96個(gè)不同樣品的提取,實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒提取的高通量化和自動(dòng)化。2.**高純度和高產(chǎn)量**:-抽提得到的質(zhì)粒純度高,OD260/OD280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/OD230比值大于2.0,可以直接用于轉(zhuǎn)化、DNA測(cè)序、PCR和酶切等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3.**試劑盒組件**:-包含BufferMP1、BufferMP2、BufferMP3、PureMagBeads、BufferMPB、TEBuffer(pH8.0)、RNaseA等組分。4.**應(yīng)用范圍**:-適用于從大腸桿菌中抽提小量質(zhì)粒,所得質(zhì)粒可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染、DNA測(cè)序、PCR等實(shí)驗(yàn)。5.**效率和純度**:-與同類(lèi)產(chǎn)品相比,提取效率更高,獲得質(zhì)粒的純度更高;與柱式法相比,可減少離心次數(shù),獲得完整性更好的質(zhì)粒。6.**注意事項(xiàng)**:-例如,SgMagBeads需要充分洗滌和干燥,以保證無(wú)乙醇?xì)埩?,并且在吸取上清時(shí)避免吸入SgMagBeads。7.**保存條件**:-室溫保存,有效期一年。磁珠長(zhǎng)期不使用時(shí),可以4℃保存以延長(zhǎng)保存時(shí)間。
泛素-蛋白酶體途徑在調(diào)控多種細(xì)胞過(guò)程中的關(guān)鍵作用,靶向這一途徑的藥物開(kāi)發(fā)已成為預(yù)防某些疾病的新策略。Recombinant Human FGFR1 alpha (IIIc) Protein,His-Avi Tag
脫氧腺苷三磷酸(Deoxyadenosinetriphosphate,dATP)是一種去氧核苷酸三磷酸,它是DNA合成和復(fù)制過(guò)程中必需的原料之一。dATP的結(jié)構(gòu)與腺苷三磷酸(ATP)相似,但dATP的五碳糖2號(hào)碳上缺少一個(gè)-OH基,取而代之的是一個(gè)氫原子。dATP是四種dNTPs(脫氧核糖核苷酸三磷酸)之一,四種dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP,它們分別對(duì)應(yīng)DNA中的腺嘌呤、胞嘧啶、鳥(niǎo)嘌呤和胸腺嘧啶。dATP的化學(xué)式為C10H16N5O12P3,分子量為491.182,CAS登錄號(hào)為1927-31-7。在實(shí)驗(yàn)室中,dATP通常以100mM的濃度提供,用于各種分子生物學(xué)技術(shù),如PCR、DNA測(cè)序和分子克隆技術(shù)。dATP溶液需要在低溫條件下保存,通常是-20℃,以保持其穩(wěn)定性和活性。在DNA測(cè)序中,dATP與ddATP一起使用,ddATP是dATP的衍生物,它缺少3'-OH基團(tuán),用于Sanger測(cè)序中的鏈終止反應(yīng)。在PCR中,dATP作為DNA聚合酶的底物,用于合成新的DNA鏈。dNTPs的濃度在PCR反應(yīng)中非常重要,適當(dāng)?shù)臐舛扔兄跍p少錯(cuò)配和提高擴(kuò)增效率。通常,四種dNTPs以等濃度混合使用,以減少PCR過(guò)程中的錯(cuò)配誤差。在某些情況下,根據(jù)目標(biāo)序列的長(zhǎng)度和組成,可能需要調(diào)整dNTPs的濃度,以優(yōu)化PCR反應(yīng)。Recombinant Human FGFR1 alpha (IIIc) Protein,His-Avi Tag
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過(guò)添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測(cè)手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱(chēng),其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過(guò)程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,...