對于涉及完整Fab或Fc抗體片段的應(yīng)用，需要在抗體鉸鏈處進行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統(tǒng)酶可用于生成 Fab 片段，但非特異性酶活性需要仔細優(yōu)化，以極大限度地降低多個消化位點的風險。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一個消化位點，可從人 IgG1 生成均質(zhì)的 Fab 和 Fc 抗體片段。生成的片段可用于結(jié)晶和高階結(jié)構(gòu) （HOS） 的 NMR 研究、結(jié)合研究等。在這里，我們提出了獲得完整Fab和Fc抗體片段的不同策略。所得片段顯示 GingisKHAN 的有效消化，用于生成完整的 Fab 片段或從依那西普上的融合 TNFR 結(jié)構(gòu)域中分離 Fc。由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊，因此在變性條件下特異性受到負面影響。為了使用SDS-PAGE分析消解效率，在加入SDS上樣緩沖液之前，停止在分析樣品中加入碘乙酰胺的反應(yīng)。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。含有富含甘氨酸的連接子的各種mAb片段進行詳細表征的中級方法。浙江FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學

Genovis將固定化酶固定在磁珠上，用于在鉸鏈下方自動消化IgG。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORMagIC磁珠含有FabRICATOR固定化酶。這些微球能夠在中級表征工作流程中并行快速自動酶解多種抗體。它們專為自動化平臺而設(shè)計，但在無法實現(xiàn)自動化的情況下，在振動臺上的表現(xiàn)同樣出色。酶切消解后，樣品可直接轉(zhuǎn)移到LC-MS的自動進樣器進行快速色譜分析，或轉(zhuǎn)移到其他分析方法進行分析。自動平行抗體酶切和亞基生成允許處理與克隆選擇、工藝開發(fā)和潛在生物制藥穩(wěn)定性研究相關(guān)的大量樣品。自動抗體亞基分析可減少操作人員的時間和樣品處理錯誤的風險，并提高通量。甘肅FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白組學可以用Genovis的GlySERIAS固定化酶（瓊脂糖珠共價偶聯(lián)）消化度拉糖肽。

當你應(yīng)用像肽圖這樣的方法時，你可以從Genovis中級方法中獲得的信息量就沒有那么多了。一個主要的區(qū)別是你不能像在肽水平上那樣將修改定位到單個氨基酸。然而，中級分析比肽圖譜具有快速和簡單的巨大優(yōu)勢，因為需要分析的色譜峰要少得多，數(shù)據(jù)處理任務(wù)要簡單得多。此外，在中級實驗中，手工實驗步驟要少得多，F(xiàn)abALACTICA（IdeS）酶切消化方法不需要針對不同的人體IgG1進行優(yōu)化。一旦在氨基酸水平上進行了PTM表征，我們非常認為中級表征肽圖的一種補充方法，可以在更常規(guī)的基礎(chǔ)上應(yīng)用。中級分析更適用于高通量或監(jiān)測類型的方法，并可用于支持肽圖分析。

Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS）試劑盒可消化兔 IgG，但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段，您需要另一種填料，而不是試劑盒中通常包含的 CaptureSelect? Fc。如果您對處理兔IgG感興趣，請聯(lián)系Genovis團隊，我們將在FabRICATOR Fab2試劑盒中提供與兔Fc相容的樹脂色譜柱。使用FabRICATOR的抗體消化的簡單性、速度和可重復性也意味著這種酶可以被用于質(zhì)量控制應(yīng)用。 QC方法需要執(zhí)行簡單，易于訓練，高度可重復，數(shù)據(jù)易于分析，這正是您使用FabRICATOR所得到的。 因為它適用于一系列不同的IgG，這也意味著使用FabRICATOR進行QC工作的客戶將能夠在未來的產(chǎn)品中使用它。 這顯示了這種酶在抗體消化中是多么的有效。Blinatumomab（一種對 CD19 和 T 細胞標志物 CD3 具有特異性的 BiTE 分子）。

為什么客戶想在他們的工作試用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特異性(在鉸鏈下方有單個消化位點)以及它對IgG種和亞類表現(xiàn)出活性的事實使其成為高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大優(yōu)勢是速度。在大多數(shù)IgG上，您可以在短短30分鐘內(nèi)生成F(ab’)2和Fc/2片段，這一速度簡化了方法開發(fā)，并允許快速有效的中層表征，使客戶能夠在不比做完整質(zhì)量實驗長太多的時間內(nèi)獲得更多關(guān)于分子的信息。Genovis發(fā)現(xiàn)更多的緩沖液與溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已經(jīng)測試了PBS和150mM醋酸銨，pH7，結(jié)果良好。并且應(yīng)該也適用于FabRICATORHPLC。然而，緩沖液的離子強度會影響抗體片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色譜柱上的保留，并且IgG1亞基需要至少100-150mM鹽才能洗脫為單個窄峰。其他IgG亞類或融合蛋白可能需要對緩沖液組成進行一些優(yōu)化。用于抗體療法（如mAb、ADC和Fc融合蛋白）的表征、質(zhì)量控制、生產(chǎn)監(jiān)測。重慶FabDELLOIdeS蛋白酶

在大多數(shù)IgG上，您可以在短短30分鐘內(nèi)生成F(ab’)2和Fc/2片段。浙江FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學

經(jīng)過多年的經(jīng)驗積累及市場積淀，倍篤生物已組合多條不同產(chǎn)品線，分別滿足體外診斷、organoid及干細胞、細胞基因藥物等領(lǐng)域的需求。其中，細胞基因藥物領(lǐng)域產(chǎn)品線包含SAN HQ高鹽核酸酶及M-SAN HQ中鹽核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP級MSC/PSC培養(yǎng)基、GMP級膠原酶、AAV滴度檢測產(chǎn)品、工藝雜質(zhì)及外源污染物殘留檢測產(chǎn)品、聚糖分析用酶、ADC偶聯(lián)技術(shù)、QED抗體對、AAV中和抗體、蛋白酶等；相關(guān)品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德國BASF、德國Sartorius、德國Nordmark、瑞典Genovis、美國QED、中國君研生物等。浙江FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學