ImpaRATOR 是一種 O-聚糖依賴性蛋白酶，可催化糖蛋白和糖肽中與糖基化絲氨酸或蘇氨酸殘基相鄰的肽鍵的水解。它切割用粘蛋白型O-聚糖修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基的N-末端，包括唾液酸化物種。粘蛋白型O-聚糖是ImpaRAT活性所必需的，該酶不會消化未修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基，也不會在糖蛋白的N-糖基化位點。該酶接受 O-聚糖結(jié)構(gòu)，包括唾液酸化he心 1 和he心 2 結(jié)構(gòu)以及 Tn 抗原。Genovis的ImpaRATOR 來源于銅綠假單胞菌，在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 97 kDa。O-和N-糖基化蛋白的高效α2-3去唾液酸化可以在1小時內(nèi)實現(xiàn)。江蘇PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究
使用Genovis的OpeRATOR圖譜O-聚糖位點對依那西普進行LC-MS分析：依那西普是一種 Fc 融合蛋白，具有高度 O-糖基化的鉸鏈區(qū)域。將依那西普與OpeRAT一起孵育，并使用LC-MS/MS分析所得糖肽。促紅xibao生成素 （EPO） 是一種具有單個 O-糖基化位點的 ~30 kDa 糖蛋白。在PNGase F去除N-糖并使用SialEXO進行去唾液酸化后，用OpeRAT消化天然蛋白，并通過反相LC-MS分析所得蛋白質(zhì)片段。O-糖基化的位點可以通過識別OeRATOR消化位點直接推斷出來。為了獲得良好性能，需要去除唾液酸助劑，因此購買中包括2000個單位（如果SialEXO凍干）。1. 用于方法開發(fā)的靈活產(chǎn)品形式；2. 可以結(jié)合酶以提高效率；3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。O-聚糖是OpeRATOR活性所必需的，而該酶在N-聚糖上沒有活性。OpeRATOR和SialEXO處理后，O-糖基化蛋白被消化成攜帶O-聚糖的肽。消化發(fā)生在O-糖基化位點的N端。山西固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶SialEXO酶來源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達。
由于蛋白質(zhì)的O-糖模式的異質(zhì)性和O-糖結(jié)構(gòu)的OpeRATOR特異性，形成了重疊的肽，從而可以獲得O-糖位點的完整圖譜為了進行比較，相同材料的標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶消化物， 顯示難以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR進行O-糖位點定位：OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶，可消化絲氨酸和蘇氨酸糖基化位點的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。這會產(chǎn)生攜帶O-糖的糖肽，并能夠使用質(zhì)譜法進行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級分析。下面是OpeRATOR消解位點的示意圖。
用于水解β1-3,4-連接半乳糖的固定化酶在離心柱中的糖蛋白上。Genovis的GalactEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的GalactEXO酶，用于糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的水解，而不會用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3. z終樣品中不含酶。GalactEXO 酶來源于 Akkermansia muciniphila 并重組表達，可有效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖。GalactEXO微離心柱經(jīng)過格式化，可在30-60分鐘內(nèi)水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。GalactEXO 是一種β-半乳糖苷酶混合物，可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-連接末端半乳糖。
Genovis的PNGase F Automation 含有以自動化友好的 96 孔板形式凍干的 PNGase F 酶。它能夠?qū)崿F(xiàn)高通量 N-糖去除，從而簡化一系列糖蛋白底物的下游分析。根據(jù)您的工作流程要求和樣品可用性。PNGase F Automation 可在 96 孔板中凍干，用于 96 x 5 μg 或 96 x 50 μg 糖蛋白上的 N-糖自動水解。1. 實現(xiàn)自動化高通量樣品處理；2. 可同時消解多達 96 個樣品；3. 兩種選擇可用于不同樣品量的消解;4. 即用型 - 只需添加您的樣品即可。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽（包括唾液酸化O-聚糖）的凍干酶。Genovis的ImpaRATOR 凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在 2000 單位小瓶中，用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。1. 用于方法開發(fā)的靈活產(chǎn)品形式；2.以結(jié)合酶以提高效率；3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可！曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數(shù)據(jù)，進行了釋放的N-聚糖分析。山西高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究
對天然糖蛋白或游離的聚糖結(jié)構(gòu)上存在的 N- 和 O-連接聚糖均具有活性。江蘇PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究
GlycOCATCH設(shè)計用于特異性結(jié)合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。親和樹脂基于無活性的Genovis的OpeRATOR酶，該酶經(jīng)過工程設(shè)計，可以高親和力結(jié)合O-糖基化蛋白和肽。 結(jié)合在pH 5-8的生理緩沖液中進行。由于GlycOCATCH樹脂和O-糖蛋白/肽之間的強相互作用，可以用8M尿素進行洗脫?；蛘撸梢允褂没钚設(shè)peRATOR酶進行洗脫，該酶消化O-聚糖位點的N末端結(jié)合的O-糖蛋白。在后一種情況下，肽在天然條件下回收。OpeRATOR 凍干酶包含在購買中。由于 O-糖蛋白上的旋亞氨酸化 O-聚糖與樹脂結(jié)合效率更高，因此唾液酸酶混合物 SialEXO 凍干也包含在購買中。江蘇PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究
糖蛋白性能測試：O-聚糖的巖藻糖基化參與功能上重要的聚糖表位的合成，例如血型抗原和劉易斯結(jié)構(gòu)。分析用...
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