冷凍電鏡技術(shù)之冷凍掃描電鏡:掃描電鏡工作者都面臨著一個不能回避的事實,就是所有生命科學以及許多材料科學的樣品都含有液體成分。很多動植物組織的含水量達到98%,這是掃描電鏡工作者比較難對付的樣品問題。冷凍掃描電鏡(Cryo-SEM)技術(shù)是克服樣品含水問題的一個快速、可靠和有效的方法。這種技術(shù)還被普遍地用于觀察一些“困難”樣品,如那些對電子束敏感的具有不穩(wěn)定性的樣品。各種高壓模式如VP、LVESEM的出現(xiàn),已允許掃描電鏡觀察未經(jīng)冷凍和干燥的樣品。但是,冷凍掃描電鏡仍然是防止樣品丟失水分的Z有效方法,它能應用于任何真空狀態(tài),包括裝于掃描電鏡的Peltier臺以及向樣品室內(nèi)沖以水汽的裝置。冷凍掃描電鏡還有一些其他優(yōu)點,如具有冷凍斷裂的能力以及可以通過控制樣品升華刻蝕來選擇性地去除表面水分(冰)等。冷凍電鏡技術(shù)的基本原理利用快速冷凍技術(shù)將其瞬間冷凍至液氮溫度下。嘉興Cryo-TEM技術(shù)應用
冷凍電子顯微鏡技術(shù)在20世紀70年代時提出,經(jīng)過近10年的努力,在80年代趨于成熟,近年來已經(jīng)進入了快速發(fā)展的時期。它的研究對象非常普遍,包括病毒、蛋白、肌絲、蛋白質(zhì)核昔酸復合體、亞細胞器等。一方面,冷凍電微鏡技術(shù)所研究的生物樣品既可以是具有二維晶體結(jié)構(gòu)的,也可以是非晶體的;而且對于樣品的分子量沒有限制。因此,很大程度突破了X-射線晶體學只能研究三維晶體樣品和核磁共振波譜學只能研究小分子量(小于100KD)樣品的限制。另一方面,生物樣品是通過快速冷凍的方法進行固定的,克了因化服學固定、染色、金屬鍍膜等過程對樣品構(gòu)象的影響,更加接近樣品的生活狀態(tài)。嘉興透射電鏡技術(shù)哪家好冷凍電鏡技術(shù)也正在成為助力醫(yī)藥研發(fā)的有力手段。
冷凍電鏡技術(shù)的儀器結(jié)構(gòu):冷凍電子顯微鏡的儀器結(jié)構(gòu)與透射電子顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)相似,只是在進樣之前搭載了液態(tài)乙烷罐與冷凍倉,保證在樣品快速冷凍后能夠即刻轉(zhuǎn)移至樣品倉內(nèi)。冷凍室:在實際操作中,向液態(tài)乙烷中投入樣品時,乙烷會在樣品周圍快速沸騰,形成絕緣氣態(tài)膜,減慢向低溫液體的熱傳遞,稱為萊頓弗羅斯效果好應。因此要使厚度超過幾微米的樣品中的水以足夠高的冷卻速度產(chǎn)生非晶冰非常困難。冷凍室中加入旋轉(zhuǎn)葉片真空泵將冷凍劑泵入,可以提高冷卻速度。
冷凍電子顯微技術(shù)主要包括單顆粒冷凍電鏡技術(shù)和冷凍電子斷層掃描技術(shù)。單顆粒冷凍電鏡技術(shù)首先捕獲大量隨機分布的同一種生物樣品的二維圖像,然后通過圖像處理算法解析其三維結(jié)構(gòu)。近年來,隨著冷凍電鏡設備和計算機軟硬件的快速發(fā)展,特別是隨著直接電子探測器在冷凍電鏡中的應用,單顆粒冷凍電鏡技術(shù)邁進了原子分辨率水平,在生物學、醫(yī)學和新藥研發(fā)等領域發(fā)揮著越來越重要的作用。冷凍電鏡通過記錄單個生物樣品在傾斜旋轉(zhuǎn)過程中投影的一系列二維圖像,采用特殊的算法計算,將二維圖像重構(gòu)為三維斷層圖像。冷凍電鏡主要研究組織、細胞和微生物中的超微結(jié)構(gòu),它能夠提供生理環(huán)境下大分子復合物納米、亞納米甚至近原子尺度的原位結(jié)構(gòu)信息以及其與其它大分子的相互作用信息。冷凍電鏡技術(shù)的獨特優(yōu)勢:冷凍電鏡單粒子法既可以對具有對稱結(jié)構(gòu)的大分子進行研究。
冷凍電鏡技術(shù)中的單顆粒分析法(Singleparticleanalysis,SPA):單顆粒技術(shù)獲得投影的具體方法:制備很多具有同樣結(jié)構(gòu)的大分子樣品,將其進行分散冷凍后進行隨機的投影拍照,再通過計算模擬測定角度,對具有相同角度的粒子進行組合,突出其中更特殊、更容易解釋的特征。單顆粒冷凍電鏡是針對單個粒子進行重構(gòu)的技術(shù),但我們的研究對象往往是多構(gòu)象或結(jié)構(gòu)異質(zhì)的蛋白,顆粒之間存在細微差別,這是一些蛋白質(zhì)無法獲得高分辨結(jié)構(gòu)的重要原因之一。對于結(jié)構(gòu)異質(zhì)性樣品的分析,我們需要首先將樣品分成幾個同質(zhì)的子集,然后分別進行三維重建。由于單顆粒分析法理論成像分辨率更高,尤其在分析具有同質(zhì)性結(jié)構(gòu)的樣品時表現(xiàn)出更方便、更優(yōu)異的成像能力,因此得到了更普遍的應用。單顆粒分析法的研究對象可以是具有某種對稱性的顆粒,也可是不具有任何對稱性的蛋白分子或復合體,尤其是針對核糖體的表征。冷凍電鏡技術(shù)就是在傳統(tǒng)透射電子顯微鏡之上,加上了低溫傳輸系統(tǒng)和冷凍防污染系統(tǒng)。合肥冷凍電鏡技術(shù)
冷凍電鏡技術(shù)使生物分子成像,變得更加簡單,把生物化學帶入了一個新紀元。嘉興Cryo-TEM技術(shù)應用
冷凍電鏡技術(shù)基本原理之電鏡三維重構(gòu)理論:D.DeRosier和A.Klug提出三維重構(gòu)理論是借助一系列沿不同方向投影的電子顯微像來重構(gòu)被測物體的立體構(gòu)型,利用計算機數(shù)字圖像處理技術(shù)進行電子顯微像三維重構(gòu)測定生物大分子結(jié)構(gòu)的概念和方法。透射電子顯微鏡成像過程中,電子束穿透樣品,將樣品的三維電勢密度分布函數(shù)沿著電子束的傳播方向投影至與傳播方向垂直的二維平面上。運用中心截面定理,從而可以通過三維物體不同角度的二維投影在計算機內(nèi)進行三維重構(gòu)來解析獲得物體的三維結(jié)構(gòu)。嘉興Cryo-TEM技術(shù)應用
上海司鼎生物科技有限公司公司是一家專門從事免疫印跡(WB)技術(shù)服務,熒光定量PCR技術(shù)服務,膜片鉗電生理技術(shù)服務,在體光纖成像記錄技術(shù)服務產(chǎn)品的生產(chǎn)和銷售,是一家服務型企業(yè),公司成立于2016-06-07,位于放鶴路1088號。多年來為國內(nèi)各行業(yè)用戶提供各種產(chǎn)品支持。公司主要經(jīng)營免疫印跡(WB)技術(shù)服務,熒光定量PCR技術(shù)服務,膜片鉗電生理技術(shù)服務,在體光纖成像記錄技術(shù)服務等產(chǎn)品,產(chǎn)品質(zhì)量可靠,均通過醫(yī)藥健康行業(yè)檢測,嚴格按照行業(yè)標準執(zhí)行。目前產(chǎn)品已經(jīng)應用與全國30多個省、市、自治區(qū)。上海司鼎生物科技有限公司每年將部分收入投入到免疫印跡(WB)技術(shù)服務,熒光定量PCR技術(shù)服務,膜片鉗電生理技術(shù)服務,在體光纖成像記錄技術(shù)服務產(chǎn)品開發(fā)工作中,也為公司的技術(shù)創(chuàng)新和人材培養(yǎng)起到了很好的推動作用。公司在長期的生產(chǎn)運營中形成了一套完善的科技激勵政策,以激勵在技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品改進等。上海司鼎生物科技有限公司以市場為導向,以創(chuàng)新為動力。不斷提升管理水平及免疫印跡(WB)技術(shù)服務,熒光定量PCR技術(shù)服務,膜片鉗電生理技術(shù)服務,在體光纖成像記錄技術(shù)服務產(chǎn)品質(zhì)量。本公司以良好的商品品質(zhì)、誠信的經(jīng)營理念期待您的到來!
冷凍電鏡技術(shù)之冷凍透射電鏡:冷凍透射電鏡(Cryo-TEM)通常是在普通透射電鏡上加裝樣品冷凍設備,將樣品冷卻到液氮溫度(77K),用于觀測蛋白、生物切片等對溫度敏感的樣品。通過對樣品的冷凍,可以降低電子束對樣品的損傷,減小樣品的形變,從而得到更加真實的樣品形貌。它的優(yōu)點主要體現(xiàn)在以下幾個方面:首先是加速電壓高,電子能穿透厚樣品;第二是透鏡多,光學性能好;第三是樣品臺穩(wěn)定;第四是全自動,自動換液氮,自動換樣品,自動維持清潔。冷凍電鏡技術(shù)中的單顆粒分析法理論成像分辨率更高。廣州冷凍電鏡技術(shù)服務冷凍電鏡技術(shù)解析結(jié)構(gòu)的一般流程是怎樣的?對樣品的要求是什么?冷凍電鏡解析蛋白結(jié)構(gòu)一般流程為:蛋白表達純化...