8000rpm離心1分鐘,上清DNA溶液轉(zhuǎn)移至新的離心管中。 2)PCR擴增及電泳 PCR擴增使用Identifiler Plus試劑盒,10 μl擴增體系中含4 μl master mix、2 μl primer set、4 μl模板,擴增程序為,95℃,11分鐘;94℃,20 秒,59℃,3分鐘,30個循環(huán);60℃,10分鐘;4℃保存;電泳在ABI 3500XL儀器中進行;電泳上樣體系為,1 μl PCR產(chǎn)物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 實施例2 以硅膠膜提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表層土壤,烘干,取100-200 mg土壤樣品,加入樣品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震蕩混勻后,75℃加熱裂解15分鐘;最大轉(zhuǎn)速離心5分鐘,將上清液轉(zhuǎn)移至新的樣品管中,加入800 ul結(jié)合液,混勻;混合液轉(zhuǎn)移至裝有硅膠膜的離心柱中,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,加入500 ul漂洗液,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,加入500 ul漂洗液,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,12000rpm離心3分鐘,將離心柱轉(zhuǎn)移至新的離心管中,70℃加熱3分鐘;加入20 ul洗脫液,70℃加熱3分鐘;12000rpm離心1分鐘,丟棄離心柱,離心管中液體即為DNA溶液。 2)網(wǎng)上訂購土壤DNA提取的官網(wǎng)。金山區(qū)土壤DNA提取批發(fā)
94℃,20 秒,59℃,3分鐘,30個循環(huán);60℃,10分鐘;4℃保存;電泳在ABI 3500XL儀器中進行;電泳上樣體系為,1 μl PCR產(chǎn)物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 實施例5 以二氧化硅包裹的磁性納米顆粒提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表層土壤,烘干,取100-200 mg土壤樣品,加入樣品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震蕩混勻后,75℃加熱裂解15分鐘;最大轉(zhuǎn)速離心5分鐘,將上清液轉(zhuǎn)移至新的樣品管中,加入800 ul結(jié)合液,混勻;混合液轉(zhuǎn)移至裝有15 ul二氧化硅包裹的磁性納米顆粒的離心管中,混勻后靜止15分鐘;上磁力架吸附2分鐘,吸棄上清液;加入500 ul漂洗液,混勻,上磁力架吸附1分鐘,吸棄上清;江蘇FastDNA SPIN土壤試劑盒土壤DNA提取有授權(quán)的土壤DNA提取公司有哪幾家?
實施例1 以二氧化硅納米顆粒提取土壤尿液DNA。 1)DNA提取 刮取含有尿液的表層土壤,烘干,取100-200 mg土壤樣品,加入樣品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震蕩混勻后,75℃加熱裂解15分鐘;最大轉(zhuǎn)速離心5分鐘,將上清液轉(zhuǎn)移至新的樣品管中,加入800 ul結(jié)合液,混勻;混合液轉(zhuǎn)移至裝有15 ul二氧化硅納米顆粒的離心管中,混勻后靜止15分鐘;8000rpm離心1分鐘去除上清液;加入500 ul漂洗液,混勻,8000rpm離心1分鐘去除上清液;加入500 ul漂洗液,混勻,8000rpm離心1分鐘去除上清液;70℃加熱3分鐘;加入20 ul洗脫液,震蕩混勻,70℃加熱3分鐘;
(a)土壤裂解液,其組成成分包括表面活性劑、螯合劑、pH緩沖劑; 所述表面活性劑為:十二烷基硫酸鈉、十二烷基磺酸鈉、月桂?;“彼徕c、聚乙二醇辛基苯基醚、TWEEN 20、TWEEN 40、TWEEN 60、TWEEN 80、NP 40、十六烷基三甲基溴化銨中的一種或兩種及以上的混合,所述表面活性劑的質(zhì)量濃度為1-100g/L,推薦的表面活性劑成分是十二烷基硫酸鈉或十二烷基磺酸鈉中的一種或兩種的混合,推薦的表面活性劑質(zhì)量濃度為1-10g/L; 所述螯合劑為乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸三鉀中的一種或兩種,所述離液鹽的濃度為1-100 mmol/L;高質(zhì)量的土壤DNA提取,保證您的實驗結(jié)果。
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調(diào)節(jié)樣本的含水量等因素來優(yōu)化裂解條件·裂解不充分:增加物理破碎的時間和次數(shù)?!z查洗滌液中是否加入乙醇。·洗脫不充分:建議二次洗脫增加產(chǎn)量或提高洗脫體積。問題3:提取的DNA無法擴增怎么辦?解決思路:· 檢測DNA的濃度:過量的DNA模板也會抑制PCR反應?!颖綝NA稀釋之后可以擴增:樣本中的腐殖酸等抑制物含量高?!ご_定PCR反應條件是否已優(yōu)化:退火溫度,時間,引物等等。·非特異條帶:洗脫液中目的DNA的豐度可能比較低金山區(qū)土壤DNA提取批發(fā)
上海益啟生物科技有限公司是一家有著雄厚實力背景、信譽可靠、勵精圖治、展望未來、有夢想有目標,有組織有體系的公司,堅持于帶領(lǐng)員工在未來的道路上大放光明,攜手共畫藍圖,在上海市等地區(qū)的化工行業(yè)中積累了大批忠誠的客戶粉絲源,也收獲了良好的用戶口碑,為公司的發(fā)展奠定的良好的行業(yè)基礎(chǔ),也希望未來公司能成為*****,努力為行業(yè)領(lǐng)域的發(fā)展奉獻出自己的一份力量,我們相信精益求精的工作態(tài)度和不斷的完善創(chuàng)新理念以及自強不息,斗志昂揚的的企業(yè)精神將**益啟供和您一起攜手步入輝煌,共創(chuàng)佳績,一直以來,公司貫徹執(zhí)行科學管理、創(chuàng)新發(fā)展、誠實守信的方針,員工精誠努力,協(xié)同奮取,以品質(zhì)、服務來贏得市場,我們一直在路上!