對(duì)于成功的ChIP實(shí)驗(yàn)，選擇適當(dāng)?shù)腃hIP抗體是**關(guān)鍵的步驟之一。即使是比較高質(zhì)量的抗體，即在經(jīng)典的Western blot驗(yàn)證中表現(xiàn)非常好的抗體，也不一定適合ChIP。比較好只考慮使用在ChIP實(shí)驗(yàn)中專(zhuān)門(mén)驗(yàn)證過(guò)的抗體。一般的， ChIP實(shí)驗(yàn)之后會(huì)用定量PCR（qPCR）來(lái)驗(yàn)證某一特定DNA序列是否與靶蛋白有關(guān)。研究人員可以采用這種經(jīng)典方法評(píng)估目標(biāo)蛋白與已知的靶基因之間的相互作用。 ChIP實(shí)驗(yàn)可以細(xì)分為以下幾個(gè)主要步驟： 樣品制備 蛋白與DNA交聯(lián) 細(xì)胞裂解和染色質(zhì)片段化 染色質(zhì)免疫沉淀Upstate抗體的報(bào)價(jià)具體是多少呢?松江區(qū)Abcam抗體抗體代理商
請(qǐng)查測(cè)生產(chǎn)廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)。當(dāng)在Luminex200儀器上讀取分析的讀數(shù)時(shí)，采用4個(gè)校準(zhǔn)片，根題Luminex推薦的方案調(diào)整探針高度至適當(dāng)位置。當(dāng)在FLEX0MP3D"儀器上讀取分析法的讀數(shù)時(shí)，采用1個(gè)校準(zhǔn)片，根據(jù)Luminex建議的方案調(diào)整探針高度至適當(dāng)位置。當(dāng)在MAGPK"系統(tǒng)上讀取分析的讀數(shù)時(shí)，采用2個(gè)校準(zhǔn)片，根掘山uminex建議的方案調(diào)整探針高度至適當(dāng)位置。 適當(dāng)使用封閉劑，且用多道移液器移取液體而不觸碰微孔板中的試劑，這樣可以遍免孔的交叉污染。增加洗滌次數(shù)浦東新區(qū)抗體一級(jí)代理WB抗體的報(bào)價(jià)具體是多少呢?
在保存抗體時(shí)請(qǐng)注意以下幾點(diǎn)： 為保持比較大反應(yīng)性，應(yīng)按照廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)保存試劑（如，當(dāng)指定保存溫度為2-8℃時(shí)，應(yīng)避免將抗體置于室溫下）。保存抗體的經(jīng)驗(yàn)法則是將其置于非無(wú)霜冰箱/制冷機(jī)內(nèi)的嚴(yán)格密封容器中，遠(yuǎn)離組織固定劑和交聯(lián)試劑。除非加入穩(wěn)定蛋白，如BSA（1% w/v），否則抗體不得 在工作液中長(zhǎng)期保存。避免長(zhǎng)期保存稀釋的抗體。保存時(shí)遇到的主要問(wèn)題是細(xì)菌或***污染。 如果抗體保存在2-8℃超過(guò)2-3天，建議進(jìn)行過(guò)濾除菌和/或加入抑菌劑/防腐劑，如0.05%疊氮化鈉或0.1%硫柳汞。
對(duì)您的特定應(yīng)用，增加（和優(yōu)化）試劑濃度和培養(yǎng)時(shí)間。 檢查確保檢測(cè)試劑按建議的方法正確貯藏和使用。 從抗體緩沖液中除去吐溫。 配制少量工作液（1mL），在暗室中加入HRP偶聯(lián)二抗1mL。 應(yīng)觀(guān)察到可見(jiàn)的藍(lán)光。 在再雜交過(guò)程中可能有抗原損失。 信號(hào)較弱 在凝膠上的蛋白不足 在凝膠上載入更多的蛋白，或在載入之前濃縮樣品，或使用免疫沉淀以增加在凝膠運(yùn)行的中靶蛋白量。 使膜曝光時(shí)間延長(zhǎng)（1-2小時(shí)）。 轉(zhuǎn)移到膜上的蛋白過(guò)少--優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件，如轉(zhuǎn)膜緩沖液pH、膜類(lèi)型和電壓等。多種科研抗體的直銷(xiāo)公司。
問(wèn)題 可能的原因 處理方法 印跡上出現(xiàn)條紋 在凝膠的蛋白負(fù)荷過(guò)量。 準(zhǔn)確測(cè)量蛋白濃度，載入較少的蛋白。 印跡有污染或模糊 凝膠平衡不當(dāng)，或在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中收縮 檢查凝膠平衡時(shí)間。 采用麗春紅S染色時(shí)， 轉(zhuǎn)膜無(wú)效 轉(zhuǎn)膜時(shí)，小心除去氣泡。 印跡染色較差 確保在電轉(zhuǎn)過(guò)程中因?yàn)闇囟冗^(guò)高而產(chǎn)生氣泡或凝膠/膜變形 采用麗春紅S染色時(shí)， 在轉(zhuǎn)膜過(guò)程中蛋白沒(méi)有轉(zhuǎn)移 檢查設(shè)備（轉(zhuǎn)膜盒、盒蓋、電源）。 印跡沒(méi)有染色 檢查在轉(zhuǎn)膜過(guò)程中凝膠和膜的順序是 確保膜位于凝膠的右側(cè)。 否正確上海益啟生物的抗體詢(xún)價(jià)聯(lián)系方式。浦東新區(qū)抗體一級(jí)代理
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比較好將其保存于+4℃?？贵w上的熒光素較易感光淬滅。因此，熒光結(jié)合抗體應(yīng)在 深色瓶中避光保存。長(zhǎng)期保存時(shí)，某些抗體溶液可能產(chǎn)生不溶的成分。沉淀物可通過(guò)10000 g快速離心去除。 抗體的應(yīng)用與優(yōu)化 在19世紀(jì)末期，人們認(rèn)識(shí)到了特異性抗體-抗原相互作用的價(jià)值，進(jìn)而多種免疫技術(shù)問(wèn)世，其中大多數(shù)目前仍在應(yīng)用。從分析血液成分的沉淀素試驗(yàn)，到高度特異性的染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)，再到使用自動(dòng)化成像流式細(xì)胞儀上進(jìn)行的免疫染色實(shí)驗(yàn)，以抗體為基礎(chǔ)的工具在生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)研究中一直起著重要的作用。松江區(qū)Abcam抗體抗體代理商
