HE染色顯微鏡下見切片內(nèi)有大量水珠分析以及應對原因:切片經(jīng)梯度乙醇處理后沒有完全脫水,導致二甲苯透明中性樹膠封固后殘留大量水分。對策:移去蓋玻片,用二甲苯溶解封固劑如中性樹膠。將切片置入新鮮的無水乙醇中,待切片重新脫水完全后,用新二甲苯透明,中性樹膠封固。所有用于脫水和透明的液體,在使用一定時間以后,應即時更換。光鏡下切片某些區(qū)域難以聚焦分析以及應對原因:蓋玻片上可能有封固切片的封固劑。對策:移去蓋玻片,重新用干凈的蓋玻片封片專業(yè)的HE染色服務平臺,南京英瀚斯生物。江西HE染色價格
HE染色分化作用:染色后,用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去,這個過程稱為分化作用,所用的溶液稱為分化液。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液,因酸能破壞蘇木精的醌型結(jié)構(gòu),使組織與色素分離而褪色。經(jīng)蘇木精染色后,必須用0.5%鹽酸乙醇分化,使細胞核過多結(jié)合的蘇木精染料和細胞漿吸附的蘇木精染料脫去,在進行伊紅染色,才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。因此,在HE染色中分化是極為關(guān)鍵的一步。返藍作用:分化之后,蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),呈紅色,在堿性條件下處于藍色離子狀態(tài),呈藍色。組織切片經(jīng)0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色,故分化之后,立即用水出去組織切片上的酸而終止分化,再用弱堿性水(0.2%氨水)使蘇木精染上的細胞核呈現(xiàn)藍色,這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍,但所需時間較長。江西HE染色價格HE染色是常見的病理染色,是比較基礎(chǔ)是病理染色之一。
HE染色原理:一、細胞核染色原理:蘇木精為堿性天然染料,可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA,在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外。使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。二、細胞漿染色原理:細胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì),為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系,當pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點4.7-5.0時,胞漿對外不顯電性,此時酸或堿性染料不易染色。當pH調(diào)到6.7-6.8時,大于蛋白質(zhì)的等電點pH值,表現(xiàn)酸性電離,而帶負電荷的陰離子,可被帶正電荷的染料染色,現(xiàn)時胞核也被染色,核和胞漿難以區(qū)分。因此必須把pH調(diào)至胞漿等電點以下,在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽離子),就可被帶負電荷(陰離子)的染料染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷(陽離子)結(jié)合而使細胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結(jié)締組織,嗜伊紅顆料等被***成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明的對比
HE染色全名為蘇木精和伊紅染色方法,是**基本的病理學染色技術(shù)。由于組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質(zhì)不一樣。經(jīng)蘇木精染色后,細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色,可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍,如處理適宜,可使細胞核著清楚的深藍色,胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細胞成分與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)特點均可顯示出來。質(zhì)量好的HE具備條件1.細胞核與細胞漿藍紅相映,鮮艷亮麗;2.胞核鮮明、核膜、核染色質(zhì)顆粒均清晰可見;3.組織或一般結(jié)構(gòu)特點及假物質(zhì)成分均能顯示出來。常用HE染色試劑配制方法。
HE染色標本一般是針對石蠟標本,脂滴和石蠟都是的有機物, 都具有非極,脂滴應該可以溶解石蠟的。 HE染色就是用蘇木精和伊紅對細胞內(nèi)的核糖體和細胞質(zhì)染色的方法。 H:Hematoxylin,蘇木精 E:Eosin,伊紅 蘇木精(Hematoxylin,H)是一種堿染料,可將細胞核和細胞內(nèi)核糖體染成藍紫色,被堿染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿。 伊紅(,E)是一種酸染料,能將細胞質(zhì)染成紅色或淡紅色,被酸染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸。染色前,須用二甲苯脫去切片中的石蠟,再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精,***入蒸餾水,就可染色。南京英瀚斯生物骨組織HE染色的操作流程。江西HE染色價格
HE染色觀察細胞形態(tài)變化。江西HE染色價格
HE染色常見問題:成片的染色模糊不清,灰染答:(1)組織未及時固定,部分自溶;或固定不佳,深部組織未處理到。這種只能重新固定了。(2)盡管乙醇也是一種固定液,但盡量少用或不用,因為其會導致組織發(fā)硬變脆,染色效果不好。(3)包埋時蠟的溫度過高,或切片后烤片時間和溫度過久過高都不好,可能會導致無法染色。(4)脫蠟不徹底;染料有問題;分化過度導致的顏色變淡,鏡下組織界限不清;染完后的脫水和透明不佳,水霧殘留在組織上。(5)通風窗中(防止空氣中的水霧),戴口罩操作封片(減少哈氣帶來的水霧)。江西HE染色價格