Endo H糖苷內(nèi)切酶H：結(jié)構(gòu)、功能及其在糖生物學(xué)中的應(yīng)用摘要Endo H糖苷內(nèi)切酶H（Endo H）是一種專(zhuān)門(mén)切割N-連接糖鏈的內(nèi)切酶，用于糖生物學(xué)和蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域。本文將探討Endo H的結(jié)構(gòu)特性、催化機(jī)制、以及其在研究和臨床應(yīng)用中的潛力。引言N-連接糖基化是一種在真核細(xì)胞中普遍存在的蛋白質(zhì)修飾方式，涉及將糖鏈添加到蛋白質(zhì)的天冬酰胺殘基上。Endo H作為一種內(nèi)切酶，能夠特異性地識(shí)別并切割N-連接糖鏈中的β-N-乙酰葡糖胺苷鍵，從而在蛋白質(zhì)工程和生物制藥中發(fā)揮重要作用。Endo H的結(jié)構(gòu)特性Endo H通常來(lái)源于流感嗜血桿菌（Hemophilus influenzae），其分子質(zhì)量約為50 kDa。該酶由兩個(gè)結(jié)構(gòu)域組成：一個(gè)負(fù)責(zé)識(shí)別糖鏈的催化結(jié)構(gòu)域和一個(gè)有助于酶穩(wěn)定性的非催化結(jié)構(gòu)域。催化機(jī)制Endo H的催化機(jī)制涉及對(duì)N-連接糖鏈的特異性識(shí)別和切割。酶的活性位點(diǎn)含有多個(gè)氨基酸殘基，這些殘基與糖鏈的特定結(jié)構(gòu)相互作用，導(dǎo)致酶對(duì)底物的高特異性。Endo H催化的糖苷鍵斷裂是一水解反應(yīng)，需要水分子的參與。在分子生物學(xué)、生物化學(xué)或生物工程制藥研究中也常作為工具酶用于重組融合蛋白的特異性斷裂。Recombinant Mouse TNFRSF11A/Rank Protein,hFc Tag

分子特性的重要性：牛凝血酶的高比活度和純度使其成為科研中理想的工具酶，有助于提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。在醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用：牛凝血酶在血液學(xué)研究、藥物篩選和疾病模型構(gòu)建中具有廣泛的應(yīng)用，對(duì)于理解血液凝固機(jī)制和開(kāi)發(fā)新型抗凝血藥物具有重要意義。安全性與穩(wěn)定性：牛凝血酶的穩(wěn)定性好，2~8℃條件下可保存3年，室溫下可保存1年，且在生產(chǎn)過(guò)程中進(jìn)行了病毒滅活處理，保證了科研使用的安全性。結(jié)論牛凝血酶（高活力，>2000 IU/mg）因其高效性和專(zhuān)一性，在生物醫(yī)學(xué)研究中具有不可替代的作用。深入研究其分子特性和生物學(xué)功能，將有助于推動(dòng)相關(guān)疾病的診斷。未來(lái)方向未來(lái)的研究可以集中在以下幾個(gè)方面：牛凝血酶在新型抗凝血藥物開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用。牛凝血酶在疾病模型，特別是血栓性疾病研究中的應(yīng)用。牛凝血酶作為分子生物學(xué)工具酶的進(jìn)一步優(yōu)化和改進(jìn)。Recombinant Human BST2 Protein,His Tag鼠AFGF與人AFGF具有96％的氨基酸序列身份，因此它在鼠和人AFGF之間表現(xiàn)出相當(dāng)大的物種交叉反應(yīng)性。

RecombinantBiotinylatedHumanOX40/TNFRSF4/CD134Protein(PrimaryAmineLabeling),hFcTag性能參數(shù)分子別名（Synonyms）OX40Lreceptor;CD134;TNFRSF4;Ly-70表達(dá)區(qū)間及表達(dá)系統(tǒng)（Source）BiotinylatedHumanOX40/TNFRSF4/CD134Protein(PrimaryAmineLabeling)isexpressedfromHEK293withhFctagattheC-Terminus.ItcontainsLeu29-Ala216.[Accession|P43489]分子量大?。∕olecularWeight）TheproteinhasapredictedMWof46.8kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto72-75kDabasedonSDS-PAGEresult.（Endotoxin）Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.純度（Purity）>95%asdeterminedbySDS-PAGE制劑（Formulation）Suppliedas0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).儲(chǔ)存條件Theproductshouldbestoredat-85~-65℃for1yearfromdateofreceipt.Recommendtoaliquottheproteinintosmallerquantitieswhenfirstusedandavoidrepeatedfreeze-thawcycles.

3C-like蛋白酶是中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS-CoV）等其它冠狀病毒的繁殖過(guò)程中極為重要的蛋白酶。它已成為人類(lèi)在抗冠狀病毒領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)。本文基于計(jì)算生物學(xué)方法對(duì)與MERS-CoV同屬的蝙蝠冠狀病毒HKU4（HKU4-CoV）的43個(gè)肽類(lèi)3C-like蛋白酶抑制劑分子，建立三維定量構(gòu)效關(guān)系（3D-QSAR）模型。在基于配體疊合的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)比較分子相似性指數(shù)分析法（CoMSIA）中的四個(gè)場(chǎng)組合（位阻場(chǎng)、靜電場(chǎng)、氫鍵供體場(chǎng)與氫鍵受體場(chǎng)）為比較好的模型（Q2=0.522，Rncv2=0.996，Rpre2=0.904；Q2：交叉驗(yàn)證相關(guān)系數(shù)，Rncv2：非交叉驗(yàn)證相關(guān)系數(shù)，Rpre2：驗(yàn)證集分子的預(yù)測(cè)值相關(guān)系數(shù)），并借助該模型通過(guò)分子對(duì)接（docking）與分子動(dòng)力學(xué)（MD）方法闡明了配受體結(jié)合作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：（1）基于比較好的CoMSIA模型基礎(chǔ)上的三維等勢(shì)圖形象地說(shuō)明了分子基團(tuán)的位阻作用、靜電作用、氫鍵供體與氫鍵受體作用對(duì)分子生物活性的影響；（2）分子對(duì)接研究結(jié)果顯示了疏水性以及結(jié)晶水、氨基酸His166和Glu169在配體和受體結(jié)合過(guò)程中產(chǎn)生重要作用；N-糖苷酶 F (PNGase F)在酵母中重組表達(dá)，可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復(fù)雜的寡糖糖蛋白。

Cas9核酸酶是一種引導(dǎo)RNA引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，可以催化雙鏈DNA的裂解。這種靶向核酸酶是一種高精度的基因組編輯的有力工具。Cas9蛋白與CRISPR/Cas9系統(tǒng)的引導(dǎo)RNA（gRNA）成分形成一個(gè)非常穩(wěn)定的核糖白（RNP）復(fù)合物。Cas9RNP復(fù)合物可以在進(jìn)入細(xì)胞后，通過(guò)添加一個(gè)N端核定位信號(hào)（NLS），增加入核效率。YEASEN開(kāi)發(fā)的NLS-Cas9核酸酶在蛋白的N端包含一個(gè)核定位序列（NLS），以增加入核切割效率。產(chǎn)品特點(diǎn)如下：無(wú)DNA：沒(méi)有外部DNA添加。安全性好：野生型Cas9蛋白，無(wú)標(biāo)簽?？蓱?yīng)用于：通過(guò)體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA。產(chǎn)品信息貨號(hào)11366ES60/11366ES76規(guī)格100μg/500μg來(lái)源重組Cas9來(lái)源于大腸桿菌物種化膿性鏈球菌標(biāo)簽無(wú)分子量160KDa濃度10mg/mL（50μg）；10mg/mL（100μg）lag-1是通過(guò)CCR5受體發(fā)出信號(hào)的CC趨化因子。 LAG-1與MIP-1β（ACT II同種型）相同，但兩個(gè)氨基酸取代。Recombinant Human Epiregulin

LAG-1與MIP-1β（ACT II同種型）相同，Lag-1趨化吸引力單核細(xì)胞，并表現(xiàn)出活性作為HIV抑制因子。Recombinant Mouse TNFRSF11A/Rank Protein,hFc Tag

利用PCR技術(shù)擴(kuò)增得到編碼土豆羧肽酶抑制劑(carboxypeptidaseinhibitorfrompotato，CPI)活性多肽基因，克隆于表達(dá)載體pGEX一4T一1的多克隆位點(diǎn)中，得到重組質(zhì)粒pGCPI，測(cè)序后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到受體茵EscherichiacoliBL21中。重組茵經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，超聲波破茵后，通過(guò)谷胱甘肽sepheroseFF親和層析柱一步純化得到融合蛋白，純度大于97％。融合蛋白經(jīng)凝血酶切割并分離除去谷胱甘肽一S一轉(zhuǎn)移酶后得到純度大于98％的重組CPI，ELISA鑒定產(chǎn)物具有免疫原性，體外檢測(cè)表明其促進(jìn)纖溶的生物功能與天然CPI無(wú)明顯差異。Recombinant Mouse TNFRSF11A/Rank Protein,hFc Tag