在現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）已成為基因表達(dá)分析、病毒檢測(cè)和基因定量的重要工具。其中，One Step RT-qPCR SYBR Green Kit憑借其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，成為眾多科研工作者的優(yōu)先試劑盒。簡(jiǎn)化操作流程，降低污染風(fēng)險(xiǎn)One Step RT-qPCR SYBR Green Kit采用一步法反應(yīng)體系，將逆轉(zhuǎn)錄（RT）和qPCR反應(yīng)集成在同一反應(yīng)管中完成。這種設(shè)計(jì)不僅簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作步驟，減少了人為誤差，還有效降低了因反復(fù)開蓋導(dǎo)致的樣品污染風(fēng)險(xiǎn)。例如，傳統(tǒng)的兩步法需要分別進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和qPCR反應(yīng)，操作復(fù)雜且污染風(fēng)險(xiǎn)較高，而一步法試劑盒則避免了這些問題。高靈敏度與高特異性該試劑盒使用高效的逆轉(zhuǎn)錄酶和熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶，結(jié)合優(yōu)化的反應(yīng)緩沖體系，能夠顯著提高反應(yīng)的靈敏度和特異性。其檢測(cè)靈敏度可達(dá)極低濃度的RNA樣本，例如在某些實(shí)驗(yàn)中，即使RNA濃度低至0.1 pg，也能實(shí)現(xiàn)精細(xì)檢測(cè)。此外，試劑盒中添加了抑制非特異性擴(kuò)增的組分，確保熔解曲線呈現(xiàn)單峰，進(jìn)一步提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。Cas9 NLS與CRISPR/Cas9系統(tǒng)中的gRNA兼容，可以進(jìn)行位點(diǎn)特異性的DNA切割 。Recombinant Mouse Hepcidin/HAMP Protein,GST Tag

在分子生物學(xué)研究中，核酸染料是檢測(cè)DNA和RNA的重要工具。然而，傳統(tǒng)的溴化乙錠（EB）染料因其劇毒性和致病，逐漸被更安全的替代品所取代。GoldenView 吖啶橙核酸染料作為一種新型的核酸染料，憑借其性能和安全性，成為科研工作者的理想選擇。GoldenView 吖啶橙核酸染料的成分是吖啶橙，這是一種細(xì)胞滲透性熒光染料，能夠與核酸結(jié)合并發(fā)出熒光信號(hào)。其獨(dú)特的熒光特性使其在檢測(cè)雙鏈DNA（dsDNA）時(shí)呈現(xiàn)綠色熒光（530 nm），而在與單鏈DNA（ssDNA）或RNA結(jié)合時(shí)則發(fā)出紅色熒光（640 nm）。這種雙重?zé)晒馓匦圆粌H提高了檢測(cè)的靈敏度，還為研究人員提供了更豐富的信息。在瓊脂糖凝膠電泳中，GoldenView 吖啶橙核酸染料表現(xiàn)出與EB相當(dāng)?shù)撵`敏度，能夠清晰地檢測(cè)到大片段（>1 kb）的DNA。此外，該染料的使用方法與EB完全相同，無(wú)需改變現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)流程，即可輕松替換傳統(tǒng)染料。安全性是GoldenView 吖啶橙核酸染料的另一大優(yōu)勢(shì)。與EB不同，GoldenView 經(jīng)過(guò)多項(xiàng)致突變性試驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果均為陰性，表明其對(duì)細(xì)胞和環(huán)境更為安全。這種低毒性特性使其在實(shí)驗(yàn)室中使用更為便捷，同時(shí)降低了對(duì)研究人員健康的潛在風(fēng)險(xiǎn)。Recombinant Mouse Lungkine/CXCL15Ultra-Long Master Mix (2×)(With Dye)含有經(jīng)過(guò)配體修飾的熱穩(wěn)定Taq DNA聚合酶，并配備優(yōu)化的緩沖體系。

在分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究中，核酸染料是不可或缺的工具，用于檢測(cè)和分析DNA和RNA。RcView吖啶橙核酸染料是一種新型的熒光染料，以其性能和安全性，逐漸成為實(shí)驗(yàn)室中理想的核酸染色選擇。一、產(chǎn)品特點(diǎn)高靈敏度與特異性RcView吖啶橙核酸染料能夠與核酸結(jié)合后產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光信號(hào)，其靈敏度與傳統(tǒng)的溴化乙錠（EB）相當(dāng)，但安全性更高。在紫外透射光下，雙鏈DNA呈現(xiàn)綠色熒光，而單鏈DNA和RNA則呈現(xiàn)紅色熒光，這種獨(dú)特的雙色特性使其能夠區(qū)分不同形式的核酸。安全性傳統(tǒng)的EB染料具有強(qiáng)致病性，而RcView吖啶橙核酸染料通過(guò)多項(xiàng)致突變性試驗(yàn)（如Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)等），結(jié)果均為陰性，是一種安全的替代品。操作簡(jiǎn)便RcView的使用方法與EB完全相同，適用于瓊脂糖凝膠電泳中的核酸染色。用戶只需在融化的瓊脂糖凝膠溶液中加入RcView，輕輕搖勻后倒膠即可。

T5核酸外切酶在基因編輯中確實(shí)有應(yīng)用，并且具有一些優(yōu)勢(shì)：1.**提高編輯效率**：根據(jù)一篇研究文章，T5核酸外切酶可以與CRISPR/Cas系統(tǒng)共表達(dá)或融合，以提高基因編輯的效率。這種共表達(dá)或融合可以增加indel（插入和缺失）頻率，盡管增加的幅度可能不大。2.**增強(qiáng)基因編輯效果**：在另一項(xiàng)研究中，通過(guò)使用螺旋-螺旋二聚體肽（coiled-coilpeptides）將T5核酸外切酶招募到Cas9或Cas12a蛋白上，可以提高基因編輯的效率，這種方法被稱為CCExo（CRISPR-Coiled-coil-Exonuclease）。這種招募方式優(yōu)于共表達(dá)和直接融合，其中強(qiáng)的親和力CC對(duì)顯示出高的突變頻率和刪除長(zhǎng)度。3.**應(yīng)用于多種細(xì)胞類型**：CCExo系統(tǒng)在多種細(xì)胞系和原代細(xì)胞中都能有效地提高基因失活效率，并且在慢性髓性白血?。–ML）患者的原代細(xì)胞以及異種移植動(dòng)物模型中展示了其應(yīng)用潛力，這表明CCExo方法可能成為CML和其他遺傳性疾病的潛在選擇。T5核酸外切酶與CRISPR核酸酶蛋白進(jìn)行融合，并引入了核定位信號(hào)（NLS）序列以構(gòu)建表達(dá)載體，用于基因編輯。綜上所述，T5核酸外切酶在基因編輯中的應(yīng)用可以增強(qiáng)編輯效率和效果，尤其是在與CRISPR/Cas系統(tǒng)結(jié)合使用時(shí)。One Step RT-qPCR SYBR Green Kit 是一種用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的試劑盒，它結(jié)合了反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增步驟。

T7EndonucleaseI(T7EI)在CRISPR/Cas9基因編輯中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在突變體檢測(cè)和基因編輯效率評(píng)估上。以下是T7EI在CRISPR/Cas9中的具體應(yīng)用步驟和特點(diǎn)：1.**基因編輯效率評(píng)估**：-T7EI用于評(píng)估CRISPR-Cas9在給定的導(dǎo)向RNA靶位點(diǎn)上對(duì)細(xì)胞群體進(jìn)行基因編輯的效率。-通過(guò)PCR擴(kuò)增圍繞CRISPR導(dǎo)向RNA靶位點(diǎn)的基因組DNA，如果CRISPR-Cas9介導(dǎo)的非同源末端連接（NHEJ）修復(fù)事件引入了突變，變性和退火將形成突變型和野生型PCR擴(kuò)增子的異源雙鏈DNA。2.**突變體檢測(cè)**：-如果CRISPR/Cas9編輯成功在DNA上引入突變，則可與野生型DNA片段退火產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。T7EI可以識(shí)別該DNA上的不完全配對(duì)的DNA位點(diǎn)然后進(jìn)行雙鏈切割，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳即可顯示酶切后的條帶，從而半定量判定基因編輯效果。-T7EI能識(shí)別長(zhǎng)度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導(dǎo)致的錯(cuò)配DNA，不能識(shí)別1bp的插入、缺失或突變。3.**實(shí)驗(yàn)步驟**：-收集細(xì)胞并提取基因組DNA，然后使用PCR擴(kuò)增期望編輯的基因組區(qū)域。擴(kuò)增子的長(zhǎng)度建議為0.5-1kb。-對(duì)擴(kuò)增的DNA進(jìn)行變性和退火復(fù)性，以產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。-使用T7EI酶處理退火后的DNA產(chǎn)物，在37℃孵育15分鐘。

可以利用現(xiàn)有的計(jì)算工具，如CRISPR design tools，預(yù)測(cè)gRNA的活性和特異性，以輔助實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 。Recombinant Mouse Hepcidin/HAMP Protein,GST Tag

蛋白A-微球菌核酸酶（pA-MNase）是一種特殊的融合蛋白，它結(jié)合了蛋白A和微球菌核酸酶（MNase，MicrococcalNuclease）的特性。以下是pA-MNase的一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用：1.**融合表達(dá)產(chǎn)物**：pA-MNase是蛋白A與微球菌核酸酶MNase的融合表達(dá)產(chǎn)物，因此它同時(shí)具有ProteinA的抗體結(jié)合活性和MNase的核酸內(nèi)切酶活性。2.**雙重功能**：由于其雙重功能，pA-MNase常用于蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究，特別是在ChIC（ChromatinImmunocleavage）和CUT&RUN（CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease）技術(shù)中。3.**ProteinA的特性**：ProteinA是一種發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）的細(xì)胞壁表面蛋白，分子量為42kDa，能特異性地與哺乳動(dòng)物免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）結(jié)合，通常結(jié)合部位為免疫球蛋白的Fc區(qū)。4.**微球菌核酸酶（MNase）的特性**：MNase是一種核酸內(nèi)切酶，能夠降解核酸，常用于降解蛋白質(zhì)制備中存在的核酸，減少細(xì)胞裂解液的粘度，以及用于染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析和快速RNA測(cè)序。5.**反應(yīng)條件**：MNase的反應(yīng)條件包括1XMicrococcalNucleaseReactionBuffer，需要補(bǔ)充100μg/ml重組白蛋白，分子生物學(xué)級(jí)，并在37°C下孵化。Recombinant Mouse Hepcidin/HAMP Protein,GST Tag