qPCR(定量聚合酶鏈式反應)檢測結果的準確性可能受到多種因素的影響,以下是一些關鍵因素:1.**引物和探針設計**:引物和探針的設計質量對qPCR的成功至關重要。不合適的引物設計可能導致低特異性或效率低的PCR反應。引物的選擇應考慮引物的長度、Tm值(解離溫度)和GC含量,以確保其適用于特定的核酸模板。2.**模板質量和純度**:模板的質量和純度直接影響qPCR的結果。污染或降解的模板可能導致偏差或虛假陽性結果。使用質量高、純度高的DNA或RNA樣本是確保準確和可靠的qPCR結果的關鍵。3.**反應條件和緩沖液**:PCR反應條件,包括溫度、離子濃度和緩沖液成分,必須嚴格控制。溫度梯度、離子濃度的變化或緩沖液成分的誤配可能會影響PCR效率。4.**反應容器和耗材**:反應管、微孔板、封閉膜等反應容器和耗材的質量也會影響qPCR結果。低質量的材料可能導致樣本丟失或反應失效。5.**標準曲線和校準**:標準曲線的準備和校準非常重要。不正確的標準曲線可能導致定量結果的不準確性。確保標準曲線中包含適當的對照樣品,并使用線性擬合來生成準確的定量數據。6.**環(huán)境條件**:實驗室溫度、濕度和空氣質量都可以影響qPCR實驗的結果。不穩(wěn)定的環(huán)境條件可能導致實驗結果的不穩(wěn)定性。將Cas9/sgRNA復合物轉染到目標細胞中??梢允褂弥|體介導轉染、電穿孔或其他轉染技術 。Recombinant Human IFN alpha/beta R2 Protein,His Tag
耐高鹽全能核酸酶(SaltActiveUltraNuclease)是一種重組非特異性核酸內切酶,具有以下特點和應用:1.**來源與表達**:耐高鹽全能核酸酶來源于海洋微生物,通過基因工程改造在大腸桿菌(_Escherichiacoli_)中表達純化。2.**活性條件**:在0.5MNaCl條件下具有比較好活性,這使得它在高鹽環(huán)境下也能保持高效。3.**應用領域**:-**病毒純化、疫苗生產**:作為宿主殘留核酸去除試劑,將宿主殘留核酸降至皮克(pg)級別,提高生物制品功效和安全性。-**蛋白和多糖類制藥工業(yè)**:用于去除核酸污染,降低細胞上清和細胞裂解液的粘度,提高蛋白純化效率及功能研究。-**防止細胞結團**:有效防止細胞和疫苗研究中外周血單核細胞(PBMC)的結團。4.**產品性質**:-分子量:24.7kDa。-等電點:9.61。-純度:≥99%。-酶活:250-300U/μL。-適溫度:37℃(工作范圍0-42℃)。-輔助因子:1-10mMMg2+。5.**儲存條件**:以無菌液體酶的形式提供,儲存于緩沖液(25mMTris-HCl,5mMMgCl2,500mMNaCl,50%Glycerol,pH7.5)中,無色透明液體。干冰運輸,-15℃~-25℃保存,有效期2年。Recombinant Human IFN alpha/beta R2 Protein,His TagFnCas12a特異性識別并剪切帶PAM序列的雙鏈DNA(dsDNA)靶標,其PAM序列為5'-TTN-3',與Cas9的PAM序列不同。
T7EndonucleaseI(T7EI)是一種特殊的DNA內切酶,具有以下特點:1.**識別錯配DNA**:T7EI能夠識別并切割不完全配對的DNA、十字型結構DNA、Holliday結構或交叉DNA以及異源雙鏈DNA。2.**切割位點**:T7EI切割錯配位點5'端的、第二或第三個磷酸二酯鍵。3.**靈敏度**:T7EI對錯配DNA的識別非常靈敏,能夠檢測并切割單堿基和多堿基的錯配。4.**應用**:T7EI常用于CRISPR/Cas9等基因編輯技術導致的基因突變的鑒定。它通過識別錯配DNA來幫助鑒定基因編輯是否成功以及是否有非目標效應。5.**直接電泳檢測**:T7EI的產物可以直接通過電泳進行檢測,這使得它在實驗操作中更為方便。6.**來源**:T7EI來源于大腸桿菌菌株,是一種麥芽糖結合蛋白(MBP)和T7核酸內切酶I(T7EI)的融合蛋白。7.**成本效益**:盡管T7EI在商業(yè)上使用時成本較高,但它在大規(guī)模樣本測試中,尤其是在基因突變鑒定方面,提供了一種有效的篩選方法。8.**特殊注意事項**:T7EI能夠識別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導致的錯配DNA,但不能識別1bp的插入、缺失或突變。這些特點使得T7EndonucleaseI成為基因突變鑒定中一個非常有用的工具,尤其是在CRISPR/Cas9等基因編輯技術的應用中。
磁珠法DNA凝膠回收試劑盒是一種用于從DNA瓊脂糖凝膠中回收特定DNA片段的實驗室工具。與傳統(tǒng)的柱純化方法相比,磁珠法具有多個優(yōu)勢:1.**操作簡便快捷**:磁珠法DNA凝膠回收試劑盒的操作步驟通常包括凝膠的融化、DNA的結合、磁珠的洗滌和DNA的洗脫,整個過程可以在20分鐘內完成。2.**高純度和高回收率**:磁珠法能夠穩(wěn)定、高效地從凝膠中回收DNA,純化所得的DNA可直接用于酶切、連接、轉化細菌、測序、PCR、雜交等后續(xù)操作。通?;厥章蔬_到60-80%,對于200bp以下小片段和10kb以上大片段的回收率有所下降。3.**適用性廣**:適用于100bp以上DNA片段的純化,對達到10kb片段DNA的純化也能保持較好的效果。4.**安全性高**:操作過程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,更加環(huán)保和安全。5.**靈活性**:可以根據實際狀況靈活調節(jié)磁珠用量,適應不同體積和濃度的樣品處理。6.**自動化和高通量**:磁珠法純化試劑盒適合手工操作,也可用于自動化工作站或核酸自動提取儀,實現高通量操作。Uracil-DNA Glycosylase (UDG) 是一種在DNA修復過程中起作用的酶,其主要功能是識別并去除DNA中的尿嘧啶堿基。
T5核酸外切酶在基因克隆中的優(yōu)勢主要體現在以下幾個方面:1.**高效性**:T5核酸外切酶依賴性組裝(TEDA)方法在常規(guī)克隆中的效率與使用專有DNA聚合酶的商業(yè)In-Fusion方法相似,但高于使用T5核酸外切酶、PhusionDNA聚合酶和DNA連接酶的Gibson方法。2.**低成本**:TEDA方法每個反應使用0.04U的T5核酸外切酶,價格為0.25美分,具有很高的成本效益。3.**簡單性**:TEDA方法的反應混合物非常簡單,易于操作,這使得它在預算有限的實驗室中尤其有用。4.**靈活性**:TEDA方法能夠組裝多個DNA片段,并在多個位點同時進行定點誘變,提供了一種靈活的克隆和突變方法。5.**陽性克隆率**:使用T5核酸外切酶的無縫克隆技術可以確保100%的陽性克隆率,這提高了實驗的成功率。6.**協(xié)同作用**:在無縫克隆中,T5核酸外切酶與Phusion高保真DNA聚合酶和TaqDNA連接酶協(xié)同作用,通過切割、填補和連接三個步驟,高效地完成DNA片段的連接。7.**減少污染**:T5核酸外切酶可以降解堿裂解提取質粒中的變性DNA,減少超螺旋DNA的污染,提高DNA克隆和轉染效率。這些優(yōu)勢使得T5核酸外切酶成為基因克隆中一個非常有價值的工具,尤其是在需要高效、低成本和操作簡便的實驗環(huán)境中。在cDNA末端快速擴增(RACE)技術中,Ultra-Long Master Mix 可以用來擴增5'和3'末端的長片段cDNA。Recombinant Cynomolgus MFAP4 Protein,His Tag
在50 μL的反應體系中,建議使用1.5 μL的5× PCR Enhancer(如果需要)和0.5 μL的Phusion DNA Polymerase。Recombinant Human IFN alpha/beta R2 Protein,His Tag
磁珠法在基因克隆中的應用主要體現在以下幾個方面:1.**質粒DNA的提取**:磁珠法可以用于從細菌細胞中提取質粒DNA,這對于質粒的克隆和表達至關重要。通過磁珠法提取的質粒DNA純度高,適合用于后續(xù)的酶切、連接、轉化等分子克隆步驟。2.**基因組DNA的提取**:磁珠法可以用于從各種生物樣本中提取基因組DNA,這對于基因組的克隆和分析非常重要。提取的基因組DNA可以用于PCR擴增、基因表達分析、基因突變檢測等。3.**mRNA的提取和純化**:在mRNA克隆中,磁珠法可以用于提取和純化mRNA,這對于cDNA的合成和基因表達分析非常關鍵。磁珠法提取的mRNA純度高,可以用于后續(xù)的cDNA合成和RT-PCR等實驗。4.**PCR產物的純化**:磁珠法可以用于純化PCR產物,去除反應中的酶、dNTPs和其他雜質,為克隆PCR產物提供高純度的DNA模板。5.**DNA片段的篩選和回收**:在基因克隆過程中,可能需要從多個DNA片段中篩選出特定大小或序列的片段。磁珠法可以用于DNA片段的篩選和回收,提高克隆效率。6.**自動化和高通量操作**:磁珠法易于與自動化設備結合,適合高通量樣本處理,這對于大規(guī)模基因克隆項目尤為重要。自動化操作減少了人為操作誤差,提高了實驗的重復性和可靠性。Recombinant Human IFN alpha/beta R2 Protein,His Tag
在分子生物學實驗中,PCR技術是基因擴增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實驗提供了更直觀的監(jiān)測手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應緩沖液以及用于實時監(jiān)測的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯誤摻入的堿基,提高擴增產物的準確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯誤率更低,...