蛋白A-微球菌核酸酶(pA-MNase)是一種特殊的融合蛋白,它結(jié)合了蛋白A和微球菌核酸酶(MNase,MicrococcalNuclease)的特性。以下是pA-MNase的一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**融合表達(dá)產(chǎn)物**:pA-MNase是蛋白A與微球菌核酸酶MNase的融合表達(dá)產(chǎn)物,因此它同時具有ProteinA的抗體結(jié)合活性和MNase的核酸內(nèi)切酶活性。2.**雙重功能**:由于其雙重功能,pA-MNase常用于蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究,特別是在ChIC(ChromatinImmunocleavage)和CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)技術(shù)中。3.**ProteinA的特性**:ProteinA是一種發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的細(xì)胞壁表面蛋白,分子量為42kDa,能特異性地與哺乳動物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)結(jié)合,通常結(jié)合部位為免疫球蛋白的Fc區(qū)。4.**微球菌核酸酶(MNase)的特性**:MNase是一種核酸內(nèi)切酶,能夠降解核酸,常用于降解蛋白質(zhì)制備中存在的核酸,減少細(xì)胞裂解液的粘度,以及用于染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析和快速RNA測序。5.**反應(yīng)條件**:MNase的反應(yīng)條件包括1XMicrococcalNucleaseReactionBuffer,需要補(bǔ)充100μg/ml重組白蛋白,分子生物學(xué)級,并在37°C下孵化。來源于Francisella tularensis:FnCas12a是一種來源于Francisella tularensis菌株的核酸內(nèi)切酶。Recombinant Canine MCP-2/CCL8
在DNA提取過程中避免RNA污染的關(guān)鍵在于采取一系列措施來確保RNA被有效去除或降解,同時保護(hù)DNA的完整性和純度。以下是一些確保DNA提取過程中避免RNA污染的策略:1.**使用專門的DNA提取試劑盒**:選擇高質(zhì)量的DNA提取試劑盒,這些試劑盒通常已經(jīng)包含了防止RNA污染的措施,如特定的裂解液和純化步驟,能夠有效去除RNA。2.**加入RNA酶(RNase)處理**:在DNA提取過程中加入RNase處理步驟,可以有效地去除殘留的RNA污染。RNase是一種能夠特異性降解RNA的酶,可以在不影響DNA完整性的前提下去除RNA污染。3.**優(yōu)化實(shí)驗(yàn)操作步驟**:在破碎細(xì)胞時,選擇合適的破碎方法和破碎時間,避免過度破碎導(dǎo)致RNA的釋放;在DNA純化階段,控制好離心速度和時間,避免RNA的沉淀。4.**使用無RNase的試劑和耗材**:使用經(jīng)過RNase-free處理的實(shí)驗(yàn)器材和試劑,確保實(shí)驗(yàn)過程中不會引入外源性RNA污染。5.**嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)環(huán)境**:保持實(shí)驗(yàn)室臺面和工作區(qū)域干凈無塵,定期對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行消殺,避免RNA酶污染。6.**個人防護(hù)和操作規(guī)范**:在處理DNA樣品時,佩戴無菌手套和口罩,以減少呼吸道和皮膚污染的風(fēng)險。使用不同的工具處理不同的樣品,或者在處理前后徹底清洗工具,避免交叉污染。Recombinant Cynomolgus FGL2 Protein,His-Avi and Flag Tag由于Cas9 NLS系統(tǒng)不涉及DNA的整合,因此降低了外源DNA整合至細(xì)胞基因組的風(fēng)險 。
Lambda核酸外切酶(λExonuclease)在PCR產(chǎn)物的克隆中主要應(yīng)用在以下幾個方面:1.**單鏈DNA的生成**:-Lambda核酸外切酶可以用于從雙鏈DNA中生成單鏈DNA。由于該酶沿5'→3'方向逐步切去5'單核苷酸,底物是5'磷酸化的雙鏈DNA,因此可以用來消化PCR產(chǎn)物中的一條鏈,從而生成單鏈DNA,這對于某些克隆技術(shù)來說是必要的步驟。2.**PCR產(chǎn)物的克隆**:-在克隆過程中,有時需要將PCR產(chǎn)物的5'端磷酸化,以便與載體連接。Lambda核酸外切酶可以消化非磷酸化的DNA,從而在一定程度上幫助準(zhǔn)備適合克隆的PCR產(chǎn)物。3.**減少自身環(huán)化和非特異性連接**:-在連接反應(yīng)中,為了減少質(zhì)粒載體的自身環(huán)化,可以使用堿性磷酸酶處理質(zhì)粒DNA以去除5'磷酸基團(tuán)。而Lambda核酸外切酶可以消化5'端磷酸化的DNA,因此在某些情況下,它可以輔助減少PCR產(chǎn)物的自身環(huán)化,尤其是在PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)中。4.**提高克隆效率**:-通過消化PCR產(chǎn)物中的一條鏈,Lambda核酸外切酶可以幫助減少PCR產(chǎn)物的非特異性連接,從而提高克隆的效率和準(zhǔn)確性。綜上所述,Lambda核酸外切酶在PCR產(chǎn)物的克隆中主要通過生成單鏈DNA、準(zhǔn)備適合克隆的PCR產(chǎn)物、減少自身環(huán)化和非特異性連接以及提高克隆效率等方面發(fā)揮作用。
磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米顆粒固相核酸富集技術(shù)來純化質(zhì)粒DNA的產(chǎn)品。它通常包括高性能納米磁珠和獨(dú)特的緩沖體系組合,通過裂解菌體后釋放的DNA,能夠有效地結(jié)合于磁珠表面,漂洗除雜后獲得高質(zhì)量的目的質(zhì)粒。以下是磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒的一些主要特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**快速簡便**:操作步驟簡單,無需多次離心,整個抽提過程通常只需20-25分鐘。2.**高得率和純度**:可以從1-5ml新鮮大腸桿菌菌液中分離純化2-20μg高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。純化得到的DNA質(zhì)量高,完整性好,OD260/280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/230比值大于2.0。3.**適用性廣**:適用于1-5mL小體積高通量菌液質(zhì)粒抽提,且抽提所得的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、測序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化等各種下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。4.**自動化兼容**:可整合移液法自動化儀器和磁棒法自動化儀器進(jìn)行高通量提取實(shí)驗(yàn)。5.**安全性高**:操作過程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,更加環(huán)保和安全。6.**成本效益**:相比傳統(tǒng)的離心柱法,磁珠法可以減少離心次數(shù),獲得完整性更好的質(zhì)粒,且操作更為簡便快捷。7.**操作靈活**:磁珠的使用量可靈活調(diào)節(jié),適合不同體積和濃度的樣品處理。盡管Ultra-Long Master Mix設(shè)計用于長片段擴(kuò)增,但在某些情況下,可能出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增,需要通過優(yōu)化引物。
Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌(Thermophilic Geobacillus sp)DNA聚合酶I衍生的酶,缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是關(guān)于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關(guān)鍵信息:來源和特性:Bst Plus DNA Polymerase 具有更強(qiáng)的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性,適合用于抗污染的等溫擴(kuò)增反應(yīng),如LAMP和CPA等。應(yīng)用:主要應(yīng)用于等溫DNA擴(kuò)增,包括環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(LAMP)和其他等溫擴(kuò)增技術(shù)。規(guī)格:活性定義:1 U指的是在65°C下30分鐘內(nèi)將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質(zhì)中的酶的量。溶液成分:包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油,pH 7.5 @ 25℃。產(chǎn)品形式:提供的產(chǎn)品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL),貨號14402ES,以及凍干粉形式的產(chǎn)品,貨號14405ES,不含甘油。靈敏度和穩(wěn)定性:Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度,低至5copies目的基因可測,且在飛克(fg)級別的模板量下也能快速達(dá)到閾值。在37°C下,該酶可以保持相對穩(wěn)定的效應(yīng)長達(dá)5天,并且在-20℃下可以穩(wěn)定保存2年。儲存條件:建議在-25℃至-15℃下儲存,以保持產(chǎn)品活性,并避免反復(fù)凍融。T4 DNA 聚合酶是一種模板依賴的 DNA 聚合酶,需要特定的 DNA 模板才能進(jìn)行 DNA 合成反應(yīng)。Rat Eotaxin-2/CCL24
Recombinant Biotinylated Human MAGE-A3 (HLA-A*24:02) Protein, His-Avi Tag 是一種通過重組DNA技術(shù)。Recombinant Canine MCP-2/CCL8
質(zhì)粒DNA提取后的儲存條件對于保持其活性至關(guān)重要。以下是一些推薦的儲存方法:1.**干燥保存**:質(zhì)粒DNA以干粉狀態(tài)保存是比較好的方法。如果總DNA以溶液形式保存,可以使用1×TE緩沖液稀釋,且TE緩沖液的pH值應(yīng)為8.0-8.5之間。2.**低溫保存**:植物總DNA低溫保存比較好在-80℃以下或液氮保存。如果沒有條件,也可以在-20℃保存??侱NA應(yīng)避免經(jīng)常凍融,同時建議每份樣品保存3-5個樣本??侱NA提取后保存的時限通常較組織要長(>兩年),但若長期保存,每隔兩年應(yīng)抽測,對不符合使用要求的DNA進(jìn)行更新。3.**避免反復(fù)凍融**:反復(fù)凍融會破壞DNA的完整性和活性,因此應(yīng)盡量避免。4.**使用保護(hù)劑**:化學(xué)添加劑如二甲基亞砜(DMSO)可以防止DNA單鏈斷裂,但因其毒性和使用量的問題,并不是理想的保護(hù)劑。5.**封裝技術(shù)**:通過封裝技術(shù)保存DNA,可以隔絕外界水、氧氣和光等可能影響DNA穩(wěn)定的因素。例如,DNAshell®技術(shù)基于密封的不銹鋼微型膠囊,在惰性氣氛下,給予DNA干粉保護(hù)。6.**使用穩(wěn)定劑**:一些天然的雙糖,如海藻糖,被認(rèn)為是一種多功能的保護(hù)劑,可以保護(hù)生物體免受冷凍、加熱等不利條件的影響。Recombinant Canine MCP-2/CCL8
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時監(jiān)測的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯誤率更低,...