磁珠法PCR/DNA純化試劑盒在科研中的應(yīng)用非常廣,主要包括以下幾個(gè)方面:1.**PCR產(chǎn)物的純化**:磁珠法試劑盒可以從PCR反應(yīng)液中回收不同片段大小的DNA,有效去除酶、dNTP、鹽類等雜質(zhì),回收率高,產(chǎn)物純度好,可以直接應(yīng)用于PCR、連接、測(cè)序、NGS建庫(kù)等下游實(shí)驗(yàn)。2.**基因組DNA的提取**:適用于從血液、唾液、口腔拭子和動(dòng)物組織等樣品中分離純化高質(zhì)量基因組DNA,提取的DNA片段大,純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠,適合高通量工作站的自動(dòng)化提取。3.**質(zhì)粒DNA的提取**:磁珠用于從粗制的提取物中分離質(zhì)粒DNA,通過(guò)精心優(yōu)化的溶液將質(zhì)粒DNA從基因組DNA和蛋白質(zhì)中分離出來(lái)。4.**DNA片段的分離**:有許多類型的DNA分離試劑盒可供選擇,包括DNA片段的分離。DNA片段可能需要為下一代測(cè)序協(xié)議進(jìn)行分離,在這種情況下,可以用能選擇分子大小的磁珠來(lái)分離片段。5.**自動(dòng)化和高通量操作**:磁珠法試劑盒適合手工操作,也可用于自動(dòng)化工作站或核酸自動(dòng)提取儀,實(shí)現(xiàn)高通量操作。6.**分子生物學(xué)研究**:磁珠法試劑盒在基因組研究、分子進(jìn)化研究等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用,為遺傳病研究、篩查等提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支持。Hifair? Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit :適用于從總RNA或mRNA模板合成鏈cDNA,具有高熱穩(wěn)定性。Recombinant Human CNTF
磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米顆粒固相核酸富集技術(shù)來(lái)純化質(zhì)粒DNA的產(chǎn)品。它通常包括高性能納米磁珠和獨(dú)特的緩沖體系組合,通過(guò)裂解菌體后釋放的DNA,能夠有效地結(jié)合于磁珠表面,漂洗除雜后獲得高質(zhì)量的目的質(zhì)粒。以下是磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒的一些主要特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**快速簡(jiǎn)便**:操作步驟簡(jiǎn)單,無(wú)需多次離心,整個(gè)抽提過(guò)程通常只需20-25分鐘。2.**高得率和純度**:可以從1-5ml新鮮大腸桿菌菌液中分離純化2-20μg高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。純化得到的DNA質(zhì)量高,完整性好,OD260/280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/230比值大于2.0。3.**適用性廣**:適用于1-5mL小體積高通量菌液質(zhì)粒抽提,且抽提所得的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、測(cè)序、文庫(kù)篩選、連接和轉(zhuǎn)化等各種下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。4.**自動(dòng)化兼容**:可整合移液法自動(dòng)化儀器和磁棒法自動(dòng)化儀器進(jìn)行高通量提取實(shí)驗(yàn)。5.**安全性高**:操作過(guò)程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,更加環(huán)保和安全。6.**成本效益**:相比傳統(tǒng)的離心柱法,磁珠法可以減少離心次數(shù),獲得完整性更好的質(zhì)粒,且操作更為簡(jiǎn)便快捷。7.**操作靈活**:磁珠的使用量可靈活調(diào)節(jié),適合不同體積和濃度的樣品處理。Recombinant Cynomolgus BDCA-2 Protein,His Tag利用His標(biāo)簽通過(guò)親和層析從細(xì)胞裂解物中純化目標(biāo)蛋白,然后可能通過(guò)離子交換層析、等方法進(jìn)一步提純。
牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)與細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的主要區(qū)別如下:1.**來(lái)源不同**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I來(lái)源于牛痘病毒,是一種真核生物病毒中的酶。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶則來(lái)源于原核生物,如大腸桿菌的ω蛋白等。2.**功能特性**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I能夠解旋DNA的超螺旋結(jié)構(gòu),并且識(shí)別并切割雙鏈DNA末端[5’C(T)CCTT],與DNA形成共價(jià)連接形成穩(wěn)定復(fù)合物,遇到DNA的5’-OH基團(tuán)后,重新連接形成完整DNA鏈。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶,如大腸桿菌的ω蛋白,主要功能是催化DNA鏈斷開(kāi)和結(jié)合的偶聯(lián)反應(yīng),以改變DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。3.**活性條件**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I即使在Mg2+不存在的條件下也顯示活性。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶可能需要Mg2+等金屬離子作為輔因子來(lái)發(fā)揮活性。4.**作用的DNA鏈**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I能使正負(fù)兩方的超螺旋分子均形成松散型。-原核生物由來(lái)的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I只作用負(fù)鏈的超螺旋分子。5.**共價(jià)鍵形成**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I與DNA形成共價(jià)連接,此酯鍵中所貯存的能量可能在切斷端的再結(jié)合上起著作用。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶在原核生物中是游離型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端與酶形成共價(jià)鍵。
為了確保PCR實(shí)驗(yàn)中BstDNAPolymeraseI的活性比較大化,以下是一些關(guān)鍵的優(yōu)化措施:1.**反應(yīng)緩沖液**:使用適合BstDNAPolymeraseI的反應(yīng)緩沖液,如NEB提供的IsothermalAmplificationBufferIIPack,該緩沖液包含Tris-HCl、(NH4)2SO4、KCl、MgSO4和Tween®20,pH值為8.8,專為等溫?cái)U(kuò)增設(shè)計(jì)。2.**反應(yīng)條件**:BstDNAPolymeraseI的比較好反應(yīng)溫度通常在65°C左右。確保PCR儀能夠精確控制并保持這一溫度,以保證酶的活性和穩(wěn)定性。3.**酶的濃度**:根據(jù)反應(yīng)體系的需要調(diào)整BstDNAPolymeraseI的用量。過(guò)多的酶可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增,而過(guò)少則可能降低擴(kuò)增效率。通常,一個(gè)單位的酶能夠在65°C下,30分鐘內(nèi)將25nmol的dNTP摻入酸不溶性物質(zhì)。4.**Mg2+濃度**:Mg2+是DNA聚合酶活性的關(guān)鍵輔因子。其濃度對(duì)PCR反應(yīng)有影響,需要根據(jù)具體情況調(diào)整Mg2+濃度,以獲得比較好的擴(kuò)增效果。5.**dNTPs濃度**:dNTPs是DNA合成的基礎(chǔ)原料,其濃度約為200-300μM較為適宜。過(guò)高會(huì)增加非特異性擴(kuò)增。6.**引物設(shè)計(jì)**:設(shè)計(jì)特異性引物,通常長(zhǎng)度為18-30個(gè)堿基,Tm(熔解溫度)相近,以保證同時(shí)退火。7.**模板DNA的質(zhì)量和純度**:確保模板DNA無(wú)蛋白質(zhì)、RNA和其他雜質(zhì)的污染,這些雜質(zhì)可能會(huì)抑制酶的活性。在一項(xiàng)研究中,比較了具有不同NLS融合的Cas9蛋白和Cas9 mRNA在斑馬魚(yú)基因組編輯中的效率。
BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads是一種利用磁珠技術(shù)從血液中提取基因組DNA的試劑盒。以下是一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**高效提取**:該試劑盒采用特殊的磁珠和緩沖體系,能夠快速且高效地從100μl至1ml的血液中分離和純化高質(zhì)量的基因組DNA。2.**磁珠特性**:獨(dú)特的磁珠具有很強(qiáng)的核酸親和力,在特定條件下可以快速分離和純化核酸。這些磁珠對(duì)磁場(chǎng)響應(yīng)迅速,使得提取過(guò)程既安全又便捷。3.**提取過(guò)程**:血液樣本在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解,釋放出的基因組DNA與磁珠特異性結(jié)合。通過(guò)磁分離架的作用,磁珠與溶液快速分離,經(jīng)過(guò)洗滌去除雜質(zhì),用洗脫液將基因組DNA從磁珠上洗脫下來(lái)。4.**應(yīng)用廣**:提取的基因組DNA可用于多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),如PCR擴(kuò)增、酶切、基因分型、Southern雜交、高通量測(cè)序、基因組DNA文庫(kù)構(gòu)建等。5.**操作簡(jiǎn)便**:整個(gè)抽提過(guò)程大約需要50分鐘,操作簡(jiǎn)便,無(wú)需使用有毒有害的有機(jī)試劑,如酚或氯仿,提高了實(shí)驗(yàn)的安全性。6.**高純度和高回收率**:提取的DNA純度高,A260/A280通常在1.7-1.9之間,表明蛋白和RNA的污染低?;厥章释ǔ3^(guò)80%。
Cas9 NLS在Cas9蛋白的N端和C端都含有SV40 T抗原的核定位序列,這使得Cas9與gRNA形成的復(fù)合物。Recombinant Human CNTF
BstDNA聚合酶在等溫?cái)U(kuò)增中的優(yōu)勢(shì)主要包括以下幾點(diǎn):1.**高靈敏度和擴(kuò)增效率**:BstDNA聚合酶具有鏈置換能力,能夠在恒溫條件下快速、高效、特異性地?cái)U(kuò)增模板。翌圣生物的BstPlusDNAPolymerase靈敏度超高,低至5copies目的基因可測(cè),且始終能比競(jìng)品更快達(dá)到閾值,擴(kuò)增速率更快。2.**高dUTP耐受性**:BstPlusDNAPolymerase具有較高的dUTP耐受性,在反應(yīng)體系中添加dUTP對(duì)BstPlusDNAPolymerase的靈敏度及擴(kuò)增效率無(wú)影響,這使得它在防污染系統(tǒng)中表現(xiàn)出色。3.**快速擴(kuò)增**:使用BstDNA聚合酶的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如LAMP,可以在15-60分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)109-1010倍的擴(kuò)增,顯示出快速的擴(kuò)增能力。4.**熱穩(wěn)定性**:BstDNA聚合酶具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性,能在60-65℃的恒溫條件下保持活性,這使得它非常適合于不需要溫度循環(huán)的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。5.**簡(jiǎn)化的反應(yīng)設(shè)置**:Bst3.0DNAPolymerase優(yōu)化了Loop-MediatedIsothermalDNAAmplification(LAMP)反應(yīng),簡(jiǎn)化了反應(yīng)設(shè)置,可以實(shí)現(xiàn)單酶RT-LAMP反應(yīng)。6.**抗抑制劑能力強(qiáng)**:Bst3.0DNAPolymerase即使在高濃度的擴(kuò)增抑制劑中,包括dUTP,也能展現(xiàn)出強(qiáng)大的性能。
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過(guò)添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測(cè)手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過(guò)程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,...