EndoS糖苷內(nèi)切酶S(Endo-S)的特異性主要體現(xiàn)在其對(duì)糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)的識(shí)別和切割能力上。以下是Endo-S的一些關(guān)鍵特異性特點(diǎn):1.**糖鏈識(shí)別**:Endo-S能夠特異性識(shí)別糖鏈結(jié)構(gòu)中的某些特定序列或結(jié)構(gòu),尤其是N-連接糖鏈的殼二糖重要結(jié)構(gòu)。2.**切割位點(diǎn)**:Endo-S在糖鏈的特定位點(diǎn)進(jìn)行切割,通常是在N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺之間的β-N-糖苷鍵。3.**不影響抗原性**:Endo-S的切割位點(diǎn)選擇性高,不會(huì)破壞糖蛋白的抗原決定簇,因此在某些應(yīng)用中可以保持糖蛋白的免疫原性。4.**應(yīng)用多樣性**:Endo-S可以用于多種糖蛋白的去糖基化,包括抗體和其他具有N-連接糖鏈的蛋白質(zhì)。5.**研究和藥物開(kāi)發(fā)**:在研究糖蛋白的結(jié)構(gòu)和功能時(shí),Endo-S提供了一種工具來(lái)研究糖鏈對(duì)蛋白質(zhì)性質(zhì)的影響。此外,在藥物開(kāi)發(fā)中,Endo-S用于制備糖鏈定點(diǎn)ADC化合物,通過(guò)精確控制藥物與抗體的連接點(diǎn),提高藥物的療效和減少副作用。6.**兼容性**:Endo-S對(duì)多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,可以接受不同生物正交基團(tuán)、熒光基團(tuán)等衍生物作為底物,實(shí)現(xiàn)抗體糖基化修飾。7.**高效性**:Endo-S在催化糖鏈轉(zhuǎn)移或切割反應(yīng)中表現(xiàn)出高效性,有助于實(shí)現(xiàn)高效獲得功能修飾的糖工程抗體。Recombinant Biotinylated Human MAGE-A3 (HLA-A*24:02) Protein, His-Avi Tag 是一種通過(guò)重組DNA技術(shù)。Recombinant Human S100A8 Protein,His Tag
SpCas9蛋白(來(lái)自化膿性鏈球菌的Cas9蛋白)在基因編輯中的主要作用是作為核酸酶,能夠精確地切割目標(biāo)DNA序列。以下是SpCas9在基因編輯中的幾個(gè)關(guān)鍵步驟和作用:1.**識(shí)別和結(jié)合**:SpCas9蛋白與一個(gè)單導(dǎo)向RNA(sgRNA)結(jié)合,形成RNP復(fù)合物。這個(gè)復(fù)合物能夠識(shí)別并結(jié)合到基因組中與sgRNA互補(bǔ)的特定DNA序列。2.**PAM序列識(shí)別**:SpCas9需要一個(gè)稱為原間隔子相鄰基序(PAM)的特定序列作為識(shí)別目標(biāo)DNA的先決條件。對(duì)于SpCas9,這個(gè)PAM序列通常是5'-NGG-3'。3.**DNA切割**:一旦RNP復(fù)合物與目標(biāo)DNA結(jié)合,SpCas9就會(huì)在PAM序列的3個(gè)堿基對(duì)的上游位置切割DNA雙鏈,產(chǎn)生一個(gè)雙鏈斷裂(DSB)。4.**引發(fā)DNA修復(fù)**:DNA雙鏈斷裂觸發(fā)細(xì)胞的DNA修復(fù)機(jī)制,包括同源定向修復(fù)(HDR)和非同源末端連接(NHEJ)。研究人員可以利用這些修復(fù)機(jī)制來(lái)插入、刪除或替換特定的DNA序列。5.**基因修改**:通過(guò)HDR,可以在斷裂的DNA兩端引入特定的DNA模板,從而實(shí)現(xiàn)精確的基因編輯。而NHEJ通常會(huì)導(dǎo)致小的插入或缺失(indel),這可以用來(lái)產(chǎn)生基因的敲除或敲入。6.**提高編輯效率**:為了提高SpCas9的編輯效率,研究人員可能會(huì)使用優(yōu)化的sgRNA設(shè)計(jì)、蛋白質(zhì)工程或嵌合融合蛋白等策略。
EndoS,即糖苷內(nèi)切酶S(Endo-S),是一種具有高度特異性的酶,它在生物化學(xué)研究中有著重要應(yīng)用,尤其是在糖蛋白和抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)的研究中。以下是EndoS的一些關(guān)鍵特點(diǎn):1.**特異性**:EndoS能夠特異性地識(shí)別并切割N-連接糖鏈的殼二糖結(jié)構(gòu),即在N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺之間的連接處進(jìn)行切割。2.**應(yīng)用**:在制備糖鏈定點(diǎn)ADC化合物中,EndoS被用于將小分子細(xì)胞毒藥物“一步”定點(diǎn)連接到抗體糖基化位點(diǎn),提供了一種重要的技術(shù)方法。3.**兼容性**:EndoS對(duì)多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,可以接受不同生物正交基團(tuán)、熒光基團(tuán)等衍生物作為底物,實(shí)現(xiàn)抗體糖基化修飾。4.**活性**:EndoS的活性對(duì)多肽沒(méi)有嚴(yán)格的要求,可以接受蛋白質(zhì)、肽、天門(mén)冬酰胺或游離聚糖作為底物。但是,對(duì)于具有三、四個(gè)支鏈的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖,EndoS沒(méi)有活性。5.**產(chǎn)品形式**:EndoS通常以帶有His標(biāo)簽的形式存在,便于從反應(yīng)中去除,這在實(shí)驗(yàn)操作中提供了便利。6.**研究進(jìn)展**:EndoS在去糖基化方法研究中是一個(gè)重要的工具,特別是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的結(jié)構(gòu)和功能時(shí)。
N末端His標(biāo)簽的泛素蛋白(RecombinantHumanUbiquitinProteinTagged-HisTag,UB)是一種經(jīng)過(guò)遺傳工程改造,在其N末端融合了His標(biāo)簽的泛素蛋白。以下是這種蛋白的一些特點(diǎn):1.**His標(biāo)簽**:N末端His標(biāo)簽是一種常見(jiàn)的融合標(biāo)簽,用于提高蛋白質(zhì)的可溶性和便于通過(guò)親和層析進(jìn)行純化。His標(biāo)簽通常由6到10個(gè)組氨酸(His)組成。2.**重組表達(dá)**:這種泛素蛋白通常在大腸桿菌(E.coli)或其他宿主細(xì)胞中通過(guò)重組DNA技術(shù)表達(dá)。3.**高度保守**:泛素蛋白是一個(gè)76個(gè)氨基酸殘基的多肽,在真核生物中高度保守。4.**分子量**:由于N末端添加了His標(biāo)簽,重組泛素蛋白的分子量會(huì)略大于天然泛素(約8.5kDa)。5.**純度**:重組泛素蛋白通常具有高純度(>95%bySDS-PAGE),適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。6.**溶解性**:His標(biāo)簽的添加可以提高蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解性,便于實(shí)驗(yàn)操作。7.**穩(wěn)定性**:凍干粉形式的重組泛素蛋白在-25~-15℃保存,具有較長(zhǎng)的有效期,通常為一年。8.**應(yīng)用廣**:N末端His標(biāo)簽的泛素蛋白可用于多種實(shí)驗(yàn),包括蛋白質(zhì)泛素化、E3泛素連接酶活性測(cè)定、蛋白質(zhì)相互作用研究等。利用His標(biāo)簽通過(guò)親和層析從細(xì)胞裂解物中純化目標(biāo)蛋白,然后可能通過(guò)離子交換層析、等方法進(jìn)一步提純。
重組人血清白蛋白(rHSA)是通過(guò)植物表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)產(chǎn)品,在科研領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。以下是rHSA在科研中的一些主要應(yīng)用:1.**細(xì)胞培養(yǎng)**:rHSA是細(xì)胞培養(yǎng)中的重要成分,它可以作為血清替代品,促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和維持細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性。由于其無(wú)動(dòng)物源成分,可以減少血清中可能存在的病毒污染風(fēng)險(xiǎn),適用于需要高生物安全性的細(xì)胞培養(yǎng)研究。2.**藥物載體**:rHSA因其良好的生物相容性和藥物結(jié)合能力,被用作藥物載體,有助于提高藥物的穩(wěn)定性、延長(zhǎng)藥物的半衰期,并可能改善藥物的靶向性。3.**疫苗保護(hù)劑**:在疫苗開(kāi)發(fā)中,rHSA可以用作保護(hù)劑,有助于提高疫苗的穩(wěn)定性和有效性。4.**細(xì)胞凍存保護(hù)劑**:rHSA在細(xì)胞凍存過(guò)程中起到保護(hù)作用,有助于提高細(xì)胞復(fù)蘇后的存活率。5.**醫(yī)療器械包埋劑**:在醫(yī)療器械領(lǐng)域,rHSA可以作為包埋劑,用于藥物洗脫支架或其他植入式醫(yī)療設(shè)備。6.**生物制藥**:rHSA在生物制藥生產(chǎn)中作為穩(wěn)定劑和保護(hù)劑,有助于提高蛋白質(zhì)藥物的穩(wěn)定性和療效。7.**基因**:在基因領(lǐng)域,rHSA可能被用作基因載體,幫助基因傳遞至目標(biāo)細(xì)胞。8.**化妝品添加劑**:在化妝品行業(yè),rHSA可能因其保濕和修復(fù)特性而被用作添加劑。泛素化蛋白隨后被靶向到26S蛋白酶體進(jìn)行降解,或出現(xiàn)蛋白位置或活性變化。Recombinant Human SLPI Protein,hFc Tag
TBE (Thymine base editor):這是一種新型的堿基編輯工具,不依賴脫氨酶,能夠通過(guò)人源化尿嘧啶DNA-糖基化酶。Recombinant Human S100A8 Protein,His Tag
為確保大腸桿菌表達(dá)的重組抑肽酶的純度和活性,需要考慮以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟:1.**高質(zhì)量的細(xì)胞培養(yǎng)**:在GMP法規(guī)下生產(chǎn),確保無(wú)動(dòng)物源成分,從而避免動(dòng)物源性的病毒污染。2.**蛋白純化技術(shù)**:通過(guò)多次柱純化過(guò)程來(lái)獲得高純度的重組抑肽酶,通常純度達(dá)到≥95%(HPLC)。3.**活性測(cè)定**:使用標(biāo)準(zhǔn)化的生物活性測(cè)定方法來(lái)確保每毫克蛋白質(zhì)的活性單位(EPU),通?!?.0EPU/mgpro。4.**質(zhì)量控制**:通過(guò)高效液相色譜(HPLC)等技術(shù)進(jìn)行質(zhì)量控制,確保蛋白含量和純度符合標(biāo)準(zhǔn)。5.**穩(wěn)定性和儲(chǔ)存條件**:凍干粉在2~8℃條件下保存,有效期為2年,確保了長(zhǎng)期穩(wěn)定性。6.**使用建議**:提供明確的使用方法,包括推薦的結(jié)合pH值和溶解介質(zhì),例如使用0.9%NaCl溶解,并建議在pH<3.0條件下不結(jié)合,以保證活性。7.**法規(guī)符合性**:生產(chǎn)設(shè)備和環(huán)境符合相關(guān)法規(guī)要求,遵循NSFISO9001:2015質(zhì)量體系,并符合GMP指導(dǎo)原則,確保產(chǎn)品質(zhì)量和安全性。通過(guò)這些步驟,可以確保重組抑肽酶的純度和活性,從而在科研和生物技術(shù)應(yīng)用中發(fā)揮其作用。Recombinant Human S100A8 Protein,His Tag
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過(guò)添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測(cè)手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過(guò)程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,...