N末端His標(biāo)簽的泛素蛋白（RecombinantHumanUbiquitinProteinTagged-HisTag,UB）是一種經(jīng)過遺傳工程改造，在其N末端融合了His標(biāo)簽的泛素蛋白。以下是這種蛋白的一些特點(diǎn)：1.**His標(biāo)簽**：N末端His標(biāo)簽是一種常見的融合標(biāo)簽，用于提高蛋白質(zhì)的可溶性和便于通過親和層析進(jìn)行純化。His標(biāo)簽通常由6到10個(gè)組氨酸（His）組成。2.**重組表達(dá)**：這種泛素蛋白通常在大腸桿菌（E.coli）或其他宿主細(xì)胞中通過重組DNA技術(shù)表達(dá)。3.**高度保守**：泛素蛋白是一個(gè)76個(gè)氨基酸殘基的多肽，在真核生物中高度保守。4.**分子量**：由于N末端添加了His標(biāo)簽，重組泛素蛋白的分子量會(huì)略大于天然泛素（約8.5kDa）。5.**純度**：重組泛素蛋白通常具有高純度（>95%bySDS-PAGE），適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。6.**溶解性**：His標(biāo)簽的添加可以提高蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解性，便于實(shí)驗(yàn)操作。7.**穩(wěn)定性**：凍干粉形式的重組泛素蛋白在-25~-15℃保存，具有較長(zhǎng)的有效期，通常為一年。8.**應(yīng)用廣**：N末端His標(biāo)簽的泛素蛋白可用于多種實(shí)驗(yàn)，包括蛋白質(zhì)泛素化、E3泛素連接酶活性測(cè)定、蛋白質(zhì)相互作用研究等。在基因編輯過程中，Pfu DNA Polymerase 可用于合成高質(zhì)量的單鏈或雙鏈DNA修復(fù)模板。Cas9 NLS (SpCas9-NLS)

為確保大腸桿菌表達(dá)的重組抑肽酶的純度和活性，需要考慮以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟：1.**高質(zhì)量的細(xì)胞培養(yǎng)**：在GMP法規(guī)下生產(chǎn)，確保無動(dòng)物源成分，從而避免動(dòng)物源性的病毒污染。2.**蛋白純化技術(shù)**：通過多次柱純化過程來獲得高純度的重組抑肽酶，通常純度達(dá)到≥95%（HPLC）。3.**活性測(cè)定**：使用標(biāo)準(zhǔn)化的生物活性測(cè)定方法來確保每毫克蛋白質(zhì)的活性單位（EPU），通?！?.0EPU/mgpro。4.**質(zhì)量控制**：通過高效液相色譜（HPLC）等技術(shù)進(jìn)行質(zhì)量控制，確保蛋白含量和純度符合標(biāo)準(zhǔn)。5.**穩(wěn)定性和儲(chǔ)存條件**：凍干粉在2~8℃條件下保存，有效期為2年，確保了長(zhǎng)期穩(wěn)定性。6.**使用建議**：提供明確的使用方法，包括推薦的結(jié)合pH值和溶解介質(zhì)，例如使用0.9%NaCl溶解，并建議在pH<3.0條件下不結(jié)合，以保證活性。7.**法規(guī)符合性**：生產(chǎn)設(shè)備和環(huán)境符合相關(guān)法規(guī)要求，遵循NSFISO9001:2015質(zhì)量體系，并符合GMP指導(dǎo)原則，確保產(chǎn)品質(zhì)量和安全性。通過這些步驟，可以確保重組抑肽酶的純度和活性，從而在科研和生物技術(shù)應(yīng)用中發(fā)揮其作用。Recombinant Mouse CADM1/IGSF4A Protein,His Tag在CRISPR-Cas9等基因編輯技術(shù)中，使用Pfu DNA Polymerase進(jìn)行修復(fù)模板的合成。

PreScissionProtease（PSP）在去除融合蛋白標(biāo)簽時(shí)，對(duì)目的蛋白的純度和活性的影響通常是積極的，具體表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：1.**小化污染**：由于PSP具有高度的特異性，它在特定的肽鍵處切割，從而減少了非特異性切割可能導(dǎo)致的蛋白質(zhì)片段，這有助于保持目的蛋白的純度。2.**減少蛋白質(zhì)修飾**：PSP的特異性切割有助于避免在切割過程中對(duì)目的蛋白引入額外的修飾，如磷酸化或糖基化，這些修飾可能會(huì)影響蛋白質(zhì)的活性和穩(wěn)定性。3.**保持活性**：如果融合蛋白標(biāo)簽的設(shè)計(jì)和切割位點(diǎn)選擇得當(dāng)，PSP切割后的目的蛋白通常能夠保持其原有的生物活性。切割位點(diǎn)通常位于標(biāo)簽和目的蛋白之間，這樣切割后不會(huì)在目的蛋白上留下額外的氨基酸，從而減少了對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的影響。4.**提高純度**：PSP切割后，可以通過親和層析等方法將標(biāo)簽、PSP以及未切割的融合蛋白分離，從而獲得高純度的目的蛋白。5.**便于后續(xù)分析**：去除標(biāo)簽后的目的蛋白更易于進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)譜分析、晶體學(xué)研究或其他生物化學(xué)分析，因?yàn)槿コ丝赡芨蓴_分析的標(biāo)簽部分。6.**穩(wěn)定性**：在某些情況下，融合蛋白的標(biāo)簽可能有助于穩(wěn)定目的蛋白的構(gòu)象，因此在去除標(biāo)簽后，需要適當(dāng)處理以維持目的蛋白的穩(wěn)定性。

通過SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）和Westernblot（西方印跡）可以有效地檢測(cè)帶有His標(biāo)簽的泛素蛋白的純度和完整性。以下是進(jìn)行這些檢測(cè)的步驟：###SDS-PAGE步驟：1.**樣品準(zhǔn)備**：-將重組泛素蛋白溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中，通常含有還原劑（如DTT或β-巰基乙醇）以斷裂二硫鍵。-將樣品在95-100°C下加熱5分鐘以變性蛋白質(zhì)。2.**凝膠準(zhǔn)備**：-根據(jù)需要的分辨率選擇合適的凝膠濃度（例如，12%或15%凝膠用于檢測(cè)20-100kDa的蛋白質(zhì)）。3.**上樣**：-將變性后的樣品加入到凝膠的相應(yīng)孔中，同時(shí)加入分子量標(biāo)記物作為參照。4.**電泳**：-在恒定電壓或恒定電流下進(jìn)行電泳，直到樣品在凝膠中充分分離。5.**染色**：-使用考馬斯亮藍(lán)或其他蛋白質(zhì)染色劑對(duì)凝膠進(jìn)行染色，以可視化蛋白質(zhì)條帶。6.**分析**：-通過比較樣品條帶與分子量標(biāo)記物，評(píng)估蛋白質(zhì)的分子量和純度。###Westernblot步驟：1.**轉(zhuǎn)膜**：-將SDS-PAGE分離的蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到PVDF或硝酸纖維素膜上。2.**封閉**：-使用封閉液（如5%脫脂奶粉或1%BSA溶液）封閉膜上未被蛋白占據(jù)的部分，以減少非特異性結(jié)合。3.**一抗孵育**：-使用特異性識(shí)別His標(biāo)簽的抗體（一抗）與膜上的蛋白質(zhì)孵育，通常在4°C過夜。來源于Francisella tularensis：FnCas12a是一種來源于Francisella tularensis菌株的核酸內(nèi)切酶。

1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)通常提供幾種不同類型的引物用于啟動(dòng)cDNA的合成。這些引物包括：1.**Oligo(dT)引物**：這種引物通常與mRNA的poly(A)尾部互補(bǔ)配對(duì)，適用于從真核生物的mRNA中合成cDNA。它能夠產(chǎn)生大量全長(zhǎng)cDNA，特別是當(dāng)模板來源于真核生物時(shí)。2.**隨機(jī)六聚體引物（RandomHexamers）**：這些引物是一組隨機(jī)的六核苷酸序列，可以與RNA模板的任何部分結(jié)合，從而啟動(dòng)cDNA的合成。它們適用于mRNA、rRNA、tRNA和長(zhǎng)非編碼RNA等多種類型的RNA模板。3.**基因特異性引物（GeneSpecificPrimers）**：這些引物是針對(duì)特定基因序列設(shè)計(jì)的，可以用于從總RNA或mRNA中合成特定基因的cDNA。它們通常用于當(dāng)需要選擇性地?cái)U(kuò)增特定基因或基因家族時(shí)。在選擇引物時(shí)，需要考慮RNA模板的來源、RNA的質(zhì)量和特性以及后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需求。例如，如果RNA模板具有復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)或較高的GC含量，可能需要使用隨機(jī)引物以提高cDNA合成的效率。另外，如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)是qPCR，可以將Oligo(dT)與隨機(jī)引物混合使用，以提高qPCR結(jié)果的真實(shí)性和重復(fù)性。Pfu DNA Polymerase 具有3'-5'外切酶活性，能夠識(shí)別并切除錯(cuò)配的核苷酸，進(jìn)一步提高擴(kuò)增的準(zhǔn)確性。FliC,Serotype a (427-441) S.paratyphi A

牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C的環(huán)境中，這有助于保持其活性。在這種條件下，該酶可以保存長(zhǎng)達(dá)3年。Cas9 NLS (SpCas9-NLS)

RNaseH-（RNaseH缺乏）通常是指在某些逆轉(zhuǎn)錄酶中通過突變消除了RNaseH活性的酶。這種酶在合成cDNA鏈時(shí)不會(huì)降解RNA模板，因此可以用于生成更高產(chǎn)量的全長(zhǎng)cDNA，尤其是在使用較長(zhǎng)的RNA模板時(shí)。RNaseH-的應(yīng)用主要包括：1.**全長(zhǎng)cDNA合成**：由于RNaseH-不會(huì)在逆轉(zhuǎn)錄過程中降解RNA模板，因此可以合成更長(zhǎng)的cDNA片段。2.**提高cDNA產(chǎn)量**：在某些情況下，使用RNaseH-可以提高cDNA的產(chǎn)量，特別是當(dāng)RNA模板質(zhì)量較高時(shí)。3.**避免RNA降解**：在逆轉(zhuǎn)錄過程中，RNaseH-有助于保護(hù)RNA模板不被降解，這對(duì)于后續(xù)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)非常重要。4.**特定基因表達(dá)分析**：RNaseH-可用于合成特定基因的cDNA，進(jìn)而進(jìn)行基因表達(dá)分析。5.**RNA病毒研究**：在研究RNA病毒時(shí)，RNaseH-可用于合成病毒RNA的cDNA，以便進(jìn)一步研究病毒的基因組。6.**基因克隆和功能研究**：合成的全長(zhǎng)cDNA可以用于克隆和研究基因的功能。7.**提高qPCR和RT-qPCR的效率**：使用RNaseH-合成的cDNA作為模板，可以提高定量PCR的效率和準(zhǔn)確性。8.**RNA干擾和基因沉默研究**：RNaseH-有助于合成siRNA或shRNA，進(jìn)而研究基因沉默的效果。