dATPSolution(脫氧腺苷三磷酸溶液)是一種常用的分子生物學(xué)試劑,通常以100mM的濃度提供。這種溶液主要用于支持DNA的合成過程,如聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、DNA測序、填入反應(yīng)、切口平移、cDNA合成和TdT加尾反應(yīng)等。dATP的化學(xué)結(jié)構(gòu)是2'-脫氧腺苷-5'-三磷酸,它是DNA聚合酶在DNA復(fù)制過程中用來合成DNA鏈的原料之一。在Sanger測序中,dATP與ddATP(雙脫氧腺苷三磷酸)一起使用,后者是dATP的一種衍生物,缺少3'-OH基團(tuán),用于鏈終止反應(yīng)。dATP溶液應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C的條件下以保持其穩(wěn)定性和活性,有效期通常為兩年。在生產(chǎn)過程中,dATP通常按照ISO9001標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行,并在D級(jí)清潔室中進(jìn)行以確保高質(zhì)量和純度。HPLC確認(rèn)的純度通常大于99%。dATP溶液不含qPCR、PCR、逆轉(zhuǎn)錄抑制劑,也不含DNase、RNase以及人類和大腸桿菌DNA,以避免實(shí)驗(yàn)過程中的污染。牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I是一種來源于牛痘病毒的酶,有多種作用于DNA分子的能力。Recombinant Human CB1 Protein-VLP
pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過特殊改造的融合蛋白,由ProteinA和高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶組成,具有以下主要應(yīng)用:1.**高通量測序建庫**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶可以用于快速構(gòu)建用于高通量測序的DNA文庫,通過其轉(zhuǎn)座酶活性實(shí)現(xiàn)DNA片段化,同時(shí)加上測序接頭,簡化了傳統(tǒng)DNA測序建庫的多步過程。2.**CUT&Tag技術(shù)**:這是一種新興的蛋白質(zhì)與DNA相互作用研究方法,pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶利用ProteinA與特定抗體結(jié)合,將轉(zhuǎn)座酶帶到目標(biāo)蛋白附近進(jìn)行DNA切割和標(biāo)簽添加,實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的高通量測序分析。CUT&Tag技術(shù)具有高特異性、低背景噪音、高靈敏度、良好重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn),適用于表觀遺傳學(xué)、干細(xì)胞等領(lǐng)域的研究。3.**ATAC-seq**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶也可用于ATAC-seq實(shí)驗(yàn),這是一種研究染色質(zhì)可及性的方法,通過轉(zhuǎn)座酶在沒有核酸酶消化的情況下切割染色質(zhì)DNA,然后在切割位點(diǎn)加上測序接頭,進(jìn)行后續(xù)的測序分析。4.**轉(zhuǎn)錄組測序快速建庫**:有研究開發(fā)了基于Tn5轉(zhuǎn)座酶的轉(zhuǎn)錄組測序快速建庫方法,例如SHERRY方法,它利用Tn5轉(zhuǎn)座酶直接作用于RNA/DNA雜交鏈,簡化了建庫過程,適用于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序,提高了樣本的利用率和測序速度。
N末端His標(biāo)簽的泛素蛋白(RecombinantHumanUbiquitinProteinTagged-HisTag,UB)是一種經(jīng)過遺傳工程改造,在其N末端融合了His標(biāo)簽的泛素蛋白。以下是這種蛋白的一些特點(diǎn):1.**His標(biāo)簽**:N末端His標(biāo)簽是一種常見的融合標(biāo)簽,用于提高蛋白質(zhì)的可溶性和便于通過親和層析進(jìn)行純化。His標(biāo)簽通常由6到10個(gè)組氨酸(His)組成。2.**重組表達(dá)**:這種泛素蛋白通常在大腸桿菌(E.coli)或其他宿主細(xì)胞中通過重組DNA技術(shù)表達(dá)。3.**高度保守**:泛素蛋白是一個(gè)76個(gè)氨基酸殘基的多肽,在真核生物中高度保守。4.**分子量**:由于N末端添加了His標(biāo)簽,重組泛素蛋白的分子量會(huì)略大于天然泛素(約8.5kDa)。5.**純度**:重組泛素蛋白通常具有高純度(>95%bySDS-PAGE),適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。6.**溶解性**:His標(biāo)簽的添加可以提高蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解性,便于實(shí)驗(yàn)操作。7.**穩(wěn)定性**:凍干粉形式的重組泛素蛋白在-25~-15℃保存,具有較長的有效期,通常為一年。8.**應(yīng)用廣**:N末端His標(biāo)簽的泛素蛋白可用于多種實(shí)驗(yàn),包括蛋白質(zhì)泛素化、E3泛素連接酶活性測定、蛋白質(zhì)相互作用研究等。
酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F(PNGaseF)在實(shí)際應(yīng)用中具有以下優(yōu)勢:1.**高比活性**:具有高達(dá)750,000U/mL的比活性,這表明該酶在催化反應(yīng)中具有很高的效率。2.**快速反應(yīng)**:新型的FastPNGaseF能在數(shù)分鐘內(nèi)完成徹底且無偏好性的去糖基化,縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。3.適用性:PNGaseF可以用于天然或變性條件下的糖蛋白或糖多肽的去N-糖基化修飾。4.**無其他糖苷酶活性**:該酶專一性高,無其他糖苷酶活性,確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。5.**His標(biāo)簽**:帶有His標(biāo)簽,便于通過親和層析進(jìn)行純化和檢測。6.**穩(wěn)定性和儲(chǔ)存條件**:在含有50%甘油的儲(chǔ)存緩沖液中,-15~-25℃保存,有效期長達(dá)1年。7.**簡化的實(shí)驗(yàn)流程**:FastPNGaseF簡化了實(shí)驗(yàn)流程,減少了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,同時(shí)保持了靈敏度和重復(fù)性。8.**兼容性好**:去糖基化后的產(chǎn)物可以直接用于下游的色譜或質(zhì)譜分析,無需額外的純化步驟。9.**無偏好性**:能夠迅速且無偏好性地去除所有的N-糖鏈,確保了獲得的糖鏈分布能夠表示抗體的正確組成。由于Pfu DNA Polymerase 對(duì)引物的質(zhì)量要求較高,使用純度高的引物可以減少由于引物錯(cuò)誤導(dǎo)致的非目標(biāo)突變。
IdeSProtease的分子改造技術(shù)主要通過以下幾個(gè)方面提高其穩(wěn)定性和比活性:1.**定向進(jìn)化**:利用定向進(jìn)化方法,通過多輪的突變和篩選,獲得具有改善特性的酶變體。定向進(jìn)化不依賴于大規(guī)模突變文庫的構(gòu)建,而是通過定點(diǎn)突變操作,顯著提高酶分子的穩(wěn)定性。2.**半理性設(shè)計(jì)與理性設(shè)計(jì)**:結(jié)合半理性設(shè)計(jì)和理性設(shè)計(jì)的方法,通過計(jì)算模擬和結(jié)構(gòu)分析,對(duì)酶的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化,以提高其在各種環(huán)境條件下的穩(wěn)定性。3.**糖基化修飾**:作為一種新的酶分子穩(wěn)定性改造技術(shù),糖基化可以提高酶的穩(wěn)定性,防止酶在逆境中的失活,從而提高其在實(shí)際應(yīng)用中的催化活性。4.**消除蛋白質(zhì)中的不穩(wěn)定性弱點(diǎn)**:通過分析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的穩(wěn)定性弱點(diǎn),進(jìn)行定點(diǎn)突變,以增強(qiáng)蛋白質(zhì)的整體穩(wěn)定性。5.**提高比活性**:通過分子改造,提高IdeSProtease的比活性,使其在更低的濃度下就能有效地催化反應(yīng),從而提高整體的催化效率。6.**增加底物特異性**:改造后的IdeSProtease除了可以切割人IgG1~4、猴、羊、兔IgG外,還對(duì)小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性。。
利用His標(biāo)簽通過親和層析從細(xì)胞裂解物中純化目標(biāo)蛋白,然后可能通過離子交換層析、等方法進(jìn)一步提純。Recombinant Human CB1 Protein-VLP
Benzonase核酸酶是一種來自粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratiamarcescens)的非特異性核酸內(nèi)切酶,它能夠高效降解所有形式的DNA和RNA,包括單鏈、雙鏈、線性和環(huán)狀核酸,將其消化成2至5個(gè)堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸。這種酶在生物技術(shù)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,包括:1.**降低粘度**:在蛋白樣品制備過程中,Benzonase核酸酶可以降低由于核酸引起的高粘度,從而便于樣品處理和提高蛋白產(chǎn)量。2.**去除核酸污染**:在蛋白提取、疫苗生產(chǎn)、生物制藥等領(lǐng)域,Benzonase核酸酶用于去除樣品中的核酸污染,確保產(chǎn)品質(zhì)量。3.**提高蛋白質(zhì)分離效果**:在雙向SDS-PAGE蛋白樣品制備中,Benzonase核酸酶可以去除帶負(fù)電荷的核酸,改善蛋白質(zhì)的分離效果,增強(qiáng)2-DE分辨率。4.**促進(jìn)蛋白質(zhì)復(fù)性**:在高質(zhì)量包涵體制備中,Benzonase核酸酶有助于降解核酸,從而促進(jìn)不可溶性蛋白的復(fù)性。5.**穩(wěn)定性和兼容性**:Benzonase核酸酶在多種條件下穩(wěn)定,包括高濃度的尿素,且與蛋白酶抑制劑兼容,但需注意EDTA對(duì)其活性的抑制作用。此外,Benzonase核酸酶的活性單位定義為在30分鐘內(nèi)使△A260值降低1.0的酶量,相當(dāng)于完全消化37μgDNA。Recombinant Human CB1 Protein-VLP
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,...