Blood Direct PCR Master Mix (2×)的組分通常包括以下幾類:高保真DNA聚合酶:例如,NEB的Q5 Blood Direct 2X Master Mix中包含的Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase,這是一種熱穩(wěn)定性DNA聚合酶,具有3'→5'核酸外切酶活性,并與Sso7d結(jié)構(gòu)域融合以增強(qiáng)過程性3940。dNTPs:提供DNA合成所需的四種脫氧核苷三磷酸。優(yōu)化的緩沖體系:包含適合于血液樣本PCR擴(kuò)增的pH和離子強(qiáng)度,以及能夠抵抗血液樣本中抑制劑的特殊成分。穩(wěn)定劑:保證預(yù)混合溶液在儲(chǔ)存和使用過程中的穩(wěn)定性??挂种苿┏煞郑阂恍〣lood Direct PCR Master Mix含有能夠抵抗血液樣本中可能存在的PCR抑制劑的成分??蛇x的染料:某些產(chǎn)品可能含有用于電泳的染料,允許PCR產(chǎn)物直接上樣進(jìn)行電泳分析,無需額外的上樣緩沖液。其他可選組分:根據(jù)需要,可能包括MgCl2、EDTA、DMSO等,用于優(yōu)化特定樣本或反應(yīng)條件42。牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I是一種來源于牛痘病毒的酶,有多種作用于DNA分子的能力。Recombinant Mouse MCEMP1 Protein,hFc Tag
pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的產(chǎn)品組分通常包括以下幾個(gè)部分:1.**pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶蛋白**:一種高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶突變體與ProteinA的融合蛋白,它是產(chǎn)品的主要組分,用于實(shí)現(xiàn)DNA片段化和接頭連接的功能。2.**儲(chǔ)存溶液**:碧云天的BeyoNGS?pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶產(chǎn)品含有特定的儲(chǔ)存溶液,其組成為50mMHEPES(pH7.2),100mMNaCl,0.1mMEDTA,1mMDTT,0.1%TritonX-100,50%(v/v)Glycerol,這種溶液有助于保持酶的穩(wěn)定性和活性。3.**測(cè)序接頭(Adapters)**:用于與pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶組裝形成pA-Tn5轉(zhuǎn)座體(pA-Tn5Transposome),這是進(jìn)行CUT&Tag實(shí)驗(yàn)的必需組分。4.**反應(yīng)緩沖液**:部分產(chǎn)品包含用于轉(zhuǎn)座酶反應(yīng)的緩沖液,例如5×TagmentBuffer,這種緩沖液含有Mg2+,對(duì)轉(zhuǎn)座酶的活性至關(guān)重要。5.**附件**:某些產(chǎn)品可能還包括附件,如說明書,提供產(chǎn)品使用和保存的詳細(xì)信息。6.**其他組分**:根據(jù)產(chǎn)品的不同,可能還包括CouplingBuffer、AnnealingBuffer等其他輔助組分,這些組分有助于轉(zhuǎn)座酶與DNA的結(jié)合和反應(yīng)的進(jìn)行。7.**包裝規(guī)格**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的包裝規(guī)格可能有所不同,例如碧云天提供的BeyoNGS?pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶有800pmol和4000pmol兩種包裝規(guī)格。NLS-Cas9-BPNLS Nuclease由于Pfu DNA Polymerase 對(duì)引物的質(zhì)量要求較高,使用純度高的引物可以減少由于引物錯(cuò)誤導(dǎo)致的非目標(biāo)突變。
Benzonase核酸酶是一種來自粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratiamarcescens)的非特異性核酸內(nèi)切酶,它能夠高效降解所有形式的DNA和RNA,包括單鏈、雙鏈、線性和環(huán)狀核酸,將其消化成2至5個(gè)堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸。這種酶在生物技術(shù)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,包括:1.**降低粘度**:在蛋白樣品制備過程中,Benzonase核酸酶可以降低由于核酸引起的高粘度,從而便于樣品處理和提高蛋白產(chǎn)量。2.**去除核酸污染**:在蛋白提取、疫苗生產(chǎn)、生物制藥等領(lǐng)域,Benzonase核酸酶用于去除樣品中的核酸污染,確保產(chǎn)品質(zhì)量。3.**提高蛋白質(zhì)分離效果**:在雙向SDS-PAGE蛋白樣品制備中,Benzonase核酸酶可以去除帶負(fù)電荷的核酸,改善蛋白質(zhì)的分離效果,增強(qiáng)2-DE分辨率。4.**促進(jìn)蛋白質(zhì)復(fù)性**:在高質(zhì)量包涵體制備中,Benzonase核酸酶有助于降解核酸,從而促進(jìn)不可溶性蛋白的復(fù)性。5.**穩(wěn)定性和兼容性**:Benzonase核酸酶在多種條件下穩(wěn)定,包括高濃度的尿素,且與蛋白酶抑制劑兼容,但需注意EDTA對(duì)其活性的抑制作用。此外,Benzonase核酸酶的活性單位定義為在30分鐘內(nèi)使△A260值降低1.0的酶量,相當(dāng)于完全消化37μgDNA。
染料預(yù)混合的PCRMasterMix是一種特殊的PCR反應(yīng)液,它在配方中已經(jīng)預(yù)先加入了適合電泳分析的染料。這種設(shè)計(jì)使得PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物可以直接用于凝膠電泳,無需額外添加上樣緩沖液,從而簡(jiǎn)化了操作流程并減少了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。以下是一些關(guān)于染料預(yù)混合PCRMasterMix的特點(diǎn):1.**方便性**:由于省去了擴(kuò)增后添加上樣緩沖液的步驟,使得PCR到電泳的過渡更為簡(jiǎn)便快捷。2.**一致性**:預(yù)混合的染料確保了每次PCR實(shí)驗(yàn)中使用的染料濃度一致,有助于提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。3.**可視化**:一些染料預(yù)混合PCRMasterMix使用的染料在紫外光下具有明顯的熒光或顏色變化,有助于在電泳過程中實(shí)時(shí)監(jiān)控DNA條帶的形成。4.**兼容性**:預(yù)混合的染料通常與各種類型的PCR儀器和電泳設(shè)備兼容。5.**穩(wěn)定性**:預(yù)混合的染料在MasterMix中保持穩(wěn)定,直到使用時(shí)才與DNA樣本接觸,減少了染料降解或失效的風(fēng)險(xiǎn)。6.**靈敏度**:某些染料具有較高的靈敏度,可以檢測(cè)到極少量的DNA,有助于提高PCR檢測(cè)的靈敏度。7.**安全性**:預(yù)混合的染料減少了操作過程中的接觸次數(shù),降低了樣品交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。
DNaseI是一種使用的酶,它能夠水解單鏈或雙鏈DNA,產(chǎn)生5'端為磷酸基團(tuán)的二核苷酸、三核苷酸或更短的寡核苷酸片段。這種酶的活性依賴于鈣離子,并且可以被鎂離子或二價(jià)錳離子啟動(dòng)。在鎂離子存在的情況下,DNaseI可以隨機(jī)剪切雙鏈DNA的任意位點(diǎn);而在二價(jià)錳離子存在時(shí),它可以在同一位點(diǎn)剪切DNA雙鏈,形成平末端或1-2個(gè)核苷酸突出的粘末端。DNaseI的一個(gè)特點(diǎn)是它不含RNase活性,因此可以用于處理各種RNA樣品,而不會(huì)對(duì)RNA造成降解。DNaseI的應(yīng)用非常廣,包括但不限于:-制備不含DNA的RNA樣品;-在RT-PCR反應(yīng)前去除RNA樣品中可能的DNA污染;-體外RNA聚合酶催化的RNA轉(zhuǎn)錄后去除DNA模板;-進(jìn)行DNaseI足跡實(shí)驗(yàn)研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用;-缺口平移(nicktranslation);-產(chǎn)生DNA隨機(jī)片段文庫;-在細(xì)胞凋亡TUNEL檢測(cè)中部分剪切基因組DNA作為陽性對(duì)照。DNaseI通常從牛胰腺中純化得到,其分子量約為32kDa(單體)。活性定義為在37℃、10分鐘內(nèi),能夠完全降解1μgpBR322質(zhì)粒DNA所需的酶量。在實(shí)驗(yàn)中,DNaseI的活性單位通常以Kunitz單位來表示,該單位是基于特定條件下酶降解DNA的能力來定義的。在gRNA的引導(dǎo)下,Cas9 NLS可以對(duì)特定DNA序列進(jìn)行剪切,適用于研究基因功能或進(jìn)行基因編輯 。T4 RNA連接酶2截短型
His-Avi Tag包含了特定肽段,分子量預(yù)測(cè)為50.20 kDa,但由于糖基化,其在Tris-Bis PAGE結(jié)果上遷移至55-60 kDa。Recombinant Mouse MCEMP1 Protein,hFc Tag
1st Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)的逆轉(zhuǎn)錄過程是將RNA模板轉(zhuǎn)換成cDNA的過程。這個(gè)過程通常包括以下幾個(gè)步驟:模板RNA的準(zhǔn)備:確保RNA模板的質(zhì)量和純度,可能需要使用DNase I來去除RNA樣品中的DNA污染。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系的配制:根據(jù)試劑盒的說明,將RNA模板、引物(如Oligo(dT)、隨機(jī)六聚體或基因特異性引物)、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶和緩沖液等組分混合在一起。逆轉(zhuǎn)錄酶的啟用:如果需要,可能要將反應(yīng)體系預(yù)熱到一定溫度以達(dá)到逆轉(zhuǎn)錄酶。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng):在適宜的條件下,逆轉(zhuǎn)錄酶會(huì)根據(jù)RNA模板合成一條互補(bǔ)的DNA鏈。這個(gè)過程通常在一定的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行,以保證酶的活性和反應(yīng)的效率。反應(yīng)的終止:逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)完成后,通常通過加熱到較高溫度來終止反應(yīng),以防止cDNA的進(jìn)一步合成。產(chǎn)物的純化:合成的cDNA可能需要通過某些方法(如柱層析或沉淀)進(jìn)行純化,以去除未反應(yīng)的dNTPs、RNA模板和酶等。cDNA的檢測(cè)和應(yīng)用:合成的cDNA可以用于后續(xù)的PCR、qPCR、克隆、測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。Recombinant Mouse MCEMP1 Protein,hFc Tag
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測(cè)手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,...