EB分子生物學(xué)通常指的是溴化乙錠(EthidiumBromide,EB)在分子生物學(xué)中的應(yīng)用。溴化乙錠是一種常用的熒光染料,主要用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA或RNA。它通過插入核酸的堿基對之間,在紫外光照射下發(fā)出橙紅色的熒光,從而實現(xiàn)對核酸的可視化。溴化乙錠與DNA的結(jié)合幾乎沒有堿基序列特異性,并且在高離子強度的飽和溶液中,大約每2.5個堿基插入一個EB分子。然而,值得注意的是,溴化乙錠具有一定的毒性,它是一種強誘變劑,具有高致病性。在實驗結(jié)束后,需要對含EB的溶液進行凈化處理,以避免對環(huán)境和人體健康造成危害。處理方法包括稀釋EB溶液至低于0.5mg/ml的濃度,然后加入化學(xué)物質(zhì)進行中和,廢棄。除了作為染色劑外,溴化乙錠還可用于凝膠阻滯分析中檢測蛋白與DNA復(fù)合物,以及在凝膠電泳過程中觀察單個DNA分子。盡管EB具有這些應(yīng)用,但由于其潛在的毒性和誘變性,使用時必須格外謹慎,并采取適當?shù)陌踩胧?。在實驗操作中,EB可以加入到凝膠中進行染色,也可以在電泳完成后加入進行染色。先加EB可以節(jié)省時間,但可能會導(dǎo)致背景稍微高且信號強度下降,不宜用于核酸分子大小的確定和定量。后加EB可以減少污染,圖譜更清晰,但相對耗時。在目標蛋白的C末端添加His標簽和Avi標簽。有助于通過親和層析進行蛋白純化,而Avi標簽則可以用于生物素。Recombinant Human NUDT5 Protein,His Tag
5'DNA腺苷?;噭┖兄惺褂玫拿竿ǔ1环Q為腺苷?;?Adenylase),這種酶能夠催化5'端磷酸化的單鏈DNA或RNA(pDNA或pRNA)轉(zhuǎn)換成5'端腺苷?;疍NA或RNA(AppDNA或AppRNA)。根據(jù)搜索結(jié)果,該酶的來源是嗜熱古細菌,在大腸桿菌中進行表達并純化而獲得。這種酶在反應(yīng)中將ATP分解成AMP和PPi,然后將AMP轉(zhuǎn)移到單鏈DNA的5'磷酸基團上,形成腺苷?;瘑捂淒NA,從而制備出腺苷?;宇^(linker)。此外,一些5'DNA腺苷酰化試劑盒中使用的酶是MthRNA連接酶(例如NEB#M2611A),這種酶也用于生成高產(chǎn)量的5'腺苷?;疍NA,并且操作簡便,具有超過95%的效率,無需凝膠純化即可完成單步反應(yīng)。MthRNA連接酶是一種已知能夠在65℃下有效工作的酶,有助于避免DNA的二級結(jié)構(gòu)對腺苷?;磻?yīng)的干擾。這些酶的高效率和特異性使得5'DNA腺苷酰化試劑盒在單鏈DNA的5'端腺苷?;揎椫蟹浅S行?,常用于miRNA等3'端為羥基的RNA或單鏈DNA在克隆、高通量測序建庫或PCR檢測等應(yīng)用中。Recombinant Human NSE牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I具有解超螺旋的活性,可以解開雙鏈閉合環(huán)狀DNA的超螺旋結(jié)構(gòu),便于后續(xù)的酶切反應(yīng)。
Blood Direct PCR Master Mix (2×)的組分通常包括以下幾類:高保真DNA聚合酶:例如,NEB的Q5 Blood Direct 2X Master Mix中包含的Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase,這是一種熱穩(wěn)定性DNA聚合酶,具有3'→5'核酸外切酶活性,并與Sso7d結(jié)構(gòu)域融合以增強過程性3940。dNTPs:提供DNA合成所需的四種脫氧核苷三磷酸。優(yōu)化的緩沖體系:包含適合于血液樣本PCR擴增的pH和離子強度,以及能夠抵抗血液樣本中抑制劑的特殊成分。穩(wěn)定劑:保證預(yù)混合溶液在儲存和使用過程中的穩(wěn)定性。抗抑制劑成分:一些Blood Direct PCR Master Mix含有能夠抵抗血液樣本中可能存在的PCR抑制劑的成分??蛇x的染料:某些產(chǎn)品可能含有用于電泳的染料,允許PCR產(chǎn)物直接上樣進行電泳分析,無需額外的上樣緩沖液。其他可選組分:根據(jù)需要,可能包括MgCl2、EDTA、DMSO等,用于優(yōu)化特定樣本或反應(yīng)條件42。
pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的產(chǎn)品組分通常包括以下幾個部分:1.**pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶蛋白**:一種高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶突變體與ProteinA的融合蛋白,它是產(chǎn)品的主要組分,用于實現(xiàn)DNA片段化和接頭連接的功能。2.**儲存溶液**:碧云天的BeyoNGS?pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶產(chǎn)品含有特定的儲存溶液,其組成為50mMHEPES(pH7.2),100mMNaCl,0.1mMEDTA,1mMDTT,0.1%TritonX-100,50%(v/v)Glycerol,這種溶液有助于保持酶的穩(wěn)定性和活性。3.**測序接頭(Adapters)**:用于與pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶組裝形成pA-Tn5轉(zhuǎn)座體(pA-Tn5Transposome),這是進行CUT&Tag實驗的必需組分。4.**反應(yīng)緩沖液**:部分產(chǎn)品包含用于轉(zhuǎn)座酶反應(yīng)的緩沖液,例如5×TagmentBuffer,這種緩沖液含有Mg2+,對轉(zhuǎn)座酶的活性至關(guān)重要。5.**附件**:某些產(chǎn)品可能還包括附件,如說明書,提供產(chǎn)品使用和保存的詳細信息。6.**其他組分**:根據(jù)產(chǎn)品的不同,可能還包括CouplingBuffer、AnnealingBuffer等其他輔助組分,這些組分有助于轉(zhuǎn)座酶與DNA的結(jié)合和反應(yīng)的進行。7.**包裝規(guī)格**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的包裝規(guī)格可能有所不同,例如碧云天提供的BeyoNGS?pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶有800pmol和4000pmol兩種包裝規(guī)格。在CRISPR-Cas9等基因編輯技術(shù)中,使用Pfu DNA Polymerase進行修復(fù)模板的合成。
磁珠法DNA凝膠回收試劑盒是一種用于從DNA瓊脂糖凝膠中快速、高效地回收DNA片段的實驗工具。它通常包含特異性吸附核酸分子的納米磁珠和相應(yīng)的緩沖液系統(tǒng),能夠去除雜質(zhì),得到高質(zhì)量的DNA回收產(chǎn)物。這種試劑盒適用于從TAE和TBE瓊脂糖凝膠中回收大小在100bp到30kb之間的DNA片段,回收效率通??蛇_70%左右。使用磁珠法DNA凝膠回收試劑盒的主要優(yōu)勢包括:1.操作簡便快速,整個回收過程大約只需30分鐘。2.無需離心,方便實現(xiàn)高通量和自動化的DNA回收。3.與柱式法相比,磁珠法對于長片段DNA的回收效率更高,可高出約20%。4.純化得到的DNA可以直接用于酶切、連接、測序等后續(xù)分子生物學(xué)實驗。磁珠法的操作過程通常包括以下步驟:1.將瓊脂糖凝膠在融膠液中迅速融解,使DNA充分釋放。2.DNA與磁珠特異性結(jié)合,通過磁分離快速高效地分離磁珠與溶液。3.經(jīng)過洗滌去除雜質(zhì)。4.使用洗脫液將DNA從磁珠上洗脫,獲得高純度的DNA樣品。此外,一些試劑盒的說明書還會提供具體的操作步驟和所需材料的清單,包括磁珠、融膠液、洗滌液、洗脫液等組分,以及可能需要自備的無水乙醇和磁分離裝置。在使用過程中,需要注意產(chǎn)品的保存條件和有效期,以及操作時的個人安全防護措施。使用體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)合成gRNA,確保gRNA的質(zhì)量和純度,這對后續(xù)實驗的成功至關(guān)重要 。Recombinant Cynomolgus IL-9 Protein,His Tag
在基因編輯中,Pfu DNA Polymerase 可用于目的基因或編輯工具的克隆,減少克隆過程中的非目標突變。Recombinant Human NUDT5 Protein,His Tag
1st Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)的逆轉(zhuǎn)錄過程是將RNA模板轉(zhuǎn)換成cDNA的過程。這個過程通常包括以下幾個步驟:模板RNA的準備:確保RNA模板的質(zhì)量和純度,可能需要使用DNase I來去除RNA樣品中的DNA污染。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系的配制:根據(jù)試劑盒的說明,將RNA模板、引物(如Oligo(dT)、隨機六聚體或基因特異性引物)、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶和緩沖液等組分混合在一起。逆轉(zhuǎn)錄酶的啟用:如果需要,可能要將反應(yīng)體系預(yù)熱到一定溫度以達到逆轉(zhuǎn)錄酶。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng):在適宜的條件下,逆轉(zhuǎn)錄酶會根據(jù)RNA模板合成一條互補的DNA鏈。這個過程通常在一定的溫度范圍內(nèi)進行,以保證酶的活性和反應(yīng)的效率。反應(yīng)的終止:逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)完成后,通常通過加熱到較高溫度來終止反應(yīng),以防止cDNA的進一步合成。產(chǎn)物的純化:合成的cDNA可能需要通過某些方法(如柱層析或沉淀)進行純化,以去除未反應(yīng)的dNTPs、RNA模板和酶等。cDNA的檢測和應(yīng)用:合成的cDNA可以用于后續(xù)的PCR、qPCR、克隆、測序等實驗。Recombinant Human NUDT5 Protein,His Tag
在分子生物學(xué)實驗中,PCR技術(shù)是基因擴增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實驗提供了更直觀的監(jiān)測手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實時監(jiān)測的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯誤摻入的堿基,提高擴增產(chǎn)物的準確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯誤率更低,...