pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的產(chǎn)品組分通常包括以下幾個(gè)部分:1.**pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶蛋白**:一種高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶突變體與ProteinA的融合蛋白,它是產(chǎn)品的主要組分,用于實(shí)現(xiàn)DNA片段化和接頭連接的功能。2.**儲(chǔ)存溶液**:碧云天的BeyoNGS?pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶產(chǎn)品含有特定的儲(chǔ)存溶液,其組成為50mMHEPES(pH7.2),100mMNaCl,0.1mMEDTA,1mMDTT,0.1%TritonX-100,50%(v/v)Glycerol,這種溶液有助于保持酶的穩(wěn)定性和活性。3.**測序接頭(Adapters)**:用于與pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶組裝形成pA-Tn5轉(zhuǎn)座體(pA-Tn5Transposome),這是進(jìn)行CUT&Tag實(shí)驗(yàn)的必需組分。4.**反應(yīng)緩沖液**:部分產(chǎn)品包含用于轉(zhuǎn)座酶反應(yīng)的緩沖液,例如5×TagmentBuffer,這種緩沖液含有Mg2+,對(duì)轉(zhuǎn)座酶的活性至關(guān)重要。5.**附件**:某些產(chǎn)品可能還包括附件,如說明書,提供產(chǎn)品使用和保存的詳細(xì)信息。6.**其他組分**:根據(jù)產(chǎn)品的不同,可能還包括CouplingBuffer、AnnealingBuffer等其他輔助組分,這些組分有助于轉(zhuǎn)座酶與DNA的結(jié)合和反應(yīng)的進(jìn)行。7.**包裝規(guī)格**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的包裝規(guī)格可能有所不同,例如碧云天提供的BeyoNGS?pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶有800pmol和4000pmol兩種包裝規(guī)格。酵母重組表達(dá)N-糖苷酶F(PNGase F)是一種通過酵母重組表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的酶。Recombinant Cynomolgus CDCP1 Protein,His Tag
Lambda核酸外切酶的生產(chǎn)和應(yīng)用涉及到多種生物技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù),主要包括:1.**基因克?。℅eneCloning)**:首先將Lambda核酸外切酶的基因從噬菌體λ的基因組中克隆出來,并插入到質(zhì)?;蚱渌d體中。2.**轉(zhuǎn)化(Transformation)**:將含有Lambda核酸外切酶基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞,通常是大腸桿菌(E.coli),以便于在這些細(xì)胞中表達(dá)Lambda核酸外切酶。3.**表達(dá)系統(tǒng)(ExpressionSystems)**:利用原核或真核表達(dá)系統(tǒng)在宿主細(xì)胞中表達(dá)Lambda核酸外切酶的蛋白。4.**蛋白質(zhì)純化(ProteinPurification)**:使用各種色譜技術(shù),如親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層析等,從宿主細(xì)胞的裂解物中分離和純化Lambda核酸外切酶。5.**PerfectProtein?技術(shù)平臺(tái)**:這是一種專有技術(shù),用于生產(chǎn)高質(zhì)量的重組蛋白,包括Lambda核酸外切酶。6.**熱失活(HeatInactivation)**:在某些應(yīng)用中,可能需要通過熱處理來失活Lambda核酸外切酶,以終止其催化活性。7.**熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FluorescenceResonanceEnergyTransfer,FRET)**:這是一種用于實(shí)時(shí)監(jiān)測酶活性和動(dòng)力學(xué)的技術(shù),可用于研究Lambda核酸外切酶降解核酸的機(jī)制。
脫氧腺苷三磷酸(Deoxyadenosinetriphosphate,dATP)是一種去氧核苷酸三磷酸,它是DNA合成和復(fù)制過程中必需的原料之一。dATP的結(jié)構(gòu)與腺苷三磷酸(ATP)相似,但dATP的五碳糖2號(hào)碳上缺少一個(gè)-OH基,取而代之的是一個(gè)氫原子。dATP是四種dNTPs(脫氧核糖核苷酸三磷酸)之一,四種dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP,它們分別對(duì)應(yīng)DNA中的腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤和胸腺嘧啶。dATP的化學(xué)式為C10H16N5O12P3,分子量為491.182,CAS登錄號(hào)為1927-31-7。在實(shí)驗(yàn)室中,dATP通常以100mM的濃度提供,用于各種分子生物學(xué)技術(shù),如PCR、DNA測序和分子克隆技術(shù)。dATP溶液需要在低溫條件下保存,通常是-20℃,以保持其穩(wěn)定性和活性。在DNA測序中,dATP與ddATP一起使用,ddATP是dATP的衍生物,它缺少3'-OH基團(tuán),用于Sanger測序中的鏈終止反應(yīng)。在PCR中,dATP作為DNA聚合酶的底物,用于合成新的DNA鏈。dNTPs的濃度在PCR反應(yīng)中非常重要,適當(dāng)?shù)臐舛扔兄跍p少錯(cuò)配和提高擴(kuò)增效率。通常,四種dNTPs以等濃度混合使用,以減少PCR過程中的錯(cuò)配誤差。在某些情況下,根據(jù)目標(biāo)序列的長度和組成,可能需要調(diào)整dNTPs的濃度,以優(yōu)化PCR反應(yīng)。
pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過改造的高活性Tn5轉(zhuǎn)座酶,與ProteinA融合,形成一種新型融合酶,應(yīng)用于CUT&Tag技術(shù)中,用于研究蛋白質(zhì)與基因組DNA的相互作用。這種融合酶具備以下特點(diǎn):1.**高活性**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是超高活性的突變形式,體外轉(zhuǎn)座效率比野生型高1000倍。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的N端結(jié)構(gòu)域?yàn)镻roteinA的一部分,可以與免疫球蛋白的Fc區(qū)相互作用,特別是與大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG結(jié)合。3.**Tn5轉(zhuǎn)座酶活性**:C端結(jié)構(gòu)域?yàn)門n5轉(zhuǎn)座酶,能夠特異性識(shí)別轉(zhuǎn)座子兩端反向重復(fù)的ME序列(MosaicEnd),并在形成轉(zhuǎn)座復(fù)合體后隨機(jī)插入靶DNA中。4.**應(yīng)用廣**:適用于CUT&Tag技術(shù)、高通量測序建庫、ATAC-seq等,特別適用于早期胚胎發(fā)育、干細(xì)胞、以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域。5.**操作簡便**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用簡化了實(shí)驗(yàn)步驟,可以在一步反應(yīng)中實(shí)現(xiàn)DNA片段化和接頭連接,從細(xì)胞到二代測序文庫的轉(zhuǎn)化過程需9小時(shí)。6.**低細(xì)胞投入量**:CUT&Tag技術(shù)允許從低至60個(gè)細(xì)胞的樣本中獲得結(jié)果,甚至可以應(yīng)用于單細(xì)胞水平的研究。7.**高質(zhì)量結(jié)果**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用可以保證DNA片段化,同時(shí)獲得的蛋白純度高、核酸殘留低。高親和力和選擇性A2AR抑制劑的開發(fā):研究者正在開發(fā)新型的A2AR小分子拮抗劑,以提高藥物的療效和選擇性。
磁珠本身并不直接參與電泳過程,但它們可以用于電泳后的樣品處理,特別是在核酸(DNA或RNA)的提取和純化過程中。以下是使用磁珠進(jìn)行電泳后樣品處理的一般步驟:1.**凝膠電泳**:-首先,將DNA或RNA樣品通過凝膠電泳進(jìn)行分離。凝膠通常是瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠,根據(jù)樣品的大小和類型選擇合適的凝膠濃度和緩沖體系。2.**觀察和切割**:-電泳完成后,使用紫外線照射凝膠并使用適當(dāng)?shù)娜玖希ㄈ鏓B或SYBRGreen)對(duì)DNA或RNA進(jìn)行染色,以在紫外光下觀察到DNA或RNA的條帶。3.**樣品提取**:-確定目標(biāo)DNA或RNA條帶后,使用干凈的工具(如切割器或移液槍)從凝膠中切割出含有目標(biāo)分子的凝膠片段。4.**磁珠準(zhǔn)備**:-根據(jù)磁珠試劑盒的說明書,準(zhǔn)備磁珠。通常包括磁珠的重懸和可能的表面修飾,以確保它們能夠特異性地結(jié)合目標(biāo)核酸。5.**樣品與磁珠混合**:-將切割出的凝膠片段轉(zhuǎn)移到含有磁珠的溶液中,溫和地混合以促進(jìn)磁珠與核酸的結(jié)合。6.**磁分離**:-將含有磁珠和核酸的混合物置于磁分離架上,利用磁場使磁珠快速聚集在管底,從而實(shí)現(xiàn)與溶液的分離。7.**洗滌**:-移除未結(jié)合的溶液,向磁珠上加入洗滌液,再次進(jìn)行磁分離以去除雜質(zhì)。跨膜蛋白的表達(dá)與制備需要采用合適的表達(dá)載體、宿主細(xì)胞、培養(yǎng)條件和純化工藝等方法,優(yōu)化表達(dá)和純化過程。Recombinant Human Nectin-4 Protein,His-Avi Tag
在蛋白質(zhì)的晶體學(xué)研究中,去除糖鏈可以幫助獲得去糖基化的蛋白質(zhì),這有助于更清晰地解析蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)。Recombinant Cynomolgus CDCP1 Protein,His Tag
SgMagBeads是一種磁性納米粒子,通常用于生物樣品的提取和純化過程,包括核酸(DNA或RNA)的提取。在磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒中,SgMagBeads或類似的磁珠產(chǎn)品作為組分之一,發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。以下是SgMagBeads與磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒之間的聯(lián)系:1.**純化介質(zhì)**:-SgMagBeads作為磁珠法質(zhì)粒抽提試劑盒中的一個(gè)關(guān)鍵組分,充當(dāng)核酸純化介質(zhì)的角色。2.**特異性吸附**:-在質(zhì)粒DNA的提取過程中,SgMagBeads能夠特異性地吸附裂解后的質(zhì)粒DNA,而其他雜質(zhì)如蛋白質(zhì)、RNA等則不被吸附。3.**快速分離**:-利用外部磁場,SgMagBeads可以迅速與溶液分離,從而實(shí)現(xiàn)快速的樣品純化。4.**洗滌和去除雜質(zhì)**:-在吸附了質(zhì)粒DNA后,SgMagBeads可以通過洗滌步驟去除吸附在其表面的雜質(zhì),提高DNA的純度。5.**洗脫**:-在洗滌去除雜質(zhì)后,SgMagBeads上的質(zhì)粒DNA可以通過適當(dāng)?shù)南疵撘合疵撓聛恚玫礁呒兌鹊馁|(zhì)粒DNA樣品。6.**操作簡便性**:-SgMagBeads的使用簡化了質(zhì)粒DNA的提取過程,減少了傳統(tǒng)方法中需要的離心步驟,使得操作更加簡便快捷。
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,...