1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中的逆轉錄酶(ReverseTranscriptase,RT)具有一個關鍵特性:它們通過特定的突變消除了RNaseH活性。RNaseH是一種通常與某些逆轉錄酶相關的酶活性,它能夠降解RNA。然而,在1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中,逆轉錄酶被設計成不具有這種降解RNA的能力,從而在合成cDNA的鏈時保護RNA模板不被降解。以下是1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中逆轉錄過程的一般步驟,以及如何避免RNA降解:1.**RNA模板準備**:首先確保RNA模板的純度和完整性,避免DNA污染??梢酝ㄟ^DNaseI處理去除RNA樣品中的DNA污染。2.**混合反應組分**:將RNA模板、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)、逆轉錄引物(如oligo(dT)或隨機引物)和緩沖液混合。3.**逆轉錄酶添加**:加入經(jīng)過突變處理的逆轉錄酶,這種酶缺乏RNaseH活性,因此不會在合成過程中降解RNA。4.**逆轉錄反應**:在適宜的溫度下進行逆轉錄反應,逆轉錄酶根據(jù)RNA模板合成cDNA鏈。5.**終止反應**:通過加熱至一定溫度來終止逆轉錄反應。通過測序或基于PCR的方法(如T7E1酶切和測序)來驗證gRNA的編輯效率,篩選出效率高的gRNA序列 。Recombinant Human GPC3/Glypican 3 Protein,His Tag
脫氧腺苷三磷酸(Deoxyadenosinetriphosphate,dATP)是一種去氧核苷酸三磷酸,它是DNA合成和復制過程中必需的原料之一。dATP的結構與腺苷三磷酸(ATP)相似,但dATP的五碳糖2號碳上缺少一個-OH基,取而代之的是一個氫原子。dATP是四種dNTPs(脫氧核糖核苷酸三磷酸)之一,四種dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP,它們分別對應DNA中的腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤和胸腺嘧啶。dATP的化學式為C10H16N5O12P3,分子量為491.182,CAS登錄號為1927-31-7。在實驗室中,dATP通常以100mM的濃度提供,用于各種分子生物學技術,如PCR、DNA測序和分子克隆技術。dATP溶液需要在低溫條件下保存,通常是-20℃,以保持其穩(wěn)定性和活性。在DNA測序中,dATP與ddATP一起使用,ddATP是dATP的衍生物,它缺少3'-OH基團,用于Sanger測序中的鏈終止反應。在PCR中,dATP作為DNA聚合酶的底物,用于合成新的DNA鏈。dNTPs的濃度在PCR反應中非常重要,適當?shù)臐舛扔兄跍p少錯配和提高擴增效率。通常,四種dNTPs以等濃度混合使用,以減少PCR過程中的錯配誤差。在某些情況下,根據(jù)目標序列的長度和組成,可能需要調整dNTPs的濃度,以優(yōu)化PCR反應。Recombinant FITC-Labeled Human FOLR1 Protein,His-Avi Tag在某些疾病中,特定蛋白質的泛素化水平可能發(fā)生變化,因此,泛素化蛋白質可以作為疾病的生物標志物。
合成互補DNA(cDNA)的試劑盒是一種實驗室工具,用于從RNA模板通過逆轉錄過程合成DNA。逆轉錄是一種酶促反應,其中RNA模板被逆轉錄酶(一種特殊的DNA聚合酶)讀取,并根據(jù)RNA序列合成一條互補的DNA鏈。這個過程在分子生物學研究中非常重要,因為它允許科學家從RNA樣品中獲取遺傳信息,并進行進一步的分析和應用。cDNA合成試劑盒通常包含以下關鍵組分:1.**逆轉錄酶**:一種特殊的酶,能夠以RNA為模板合成DNA鏈。例如,M-MuLV反轉錄酶是一種常用的逆轉錄酶。2.**RNase抑制劑**:一種蛋白質,可以防止RNA樣品在實驗過程中被環(huán)境中的RNase酶降解。3.**緩沖液**:提供適宜的化學環(huán)境,保證逆轉錄酶的活性和反應的順利進行。4.**dNTPs**:四種去氧核苷酸三磷酸(dATP、dCTP、dGTP和dTTP),是合成DNA鏈的原料。5.**引物**:短的單鏈DNA或RNA基礎片段,用于啟動cDNA的合成。常見的引物類型包括oligo(dT)引物(針對mRNA的poly(A)尾)、隨機引物或特異性引物。6.**水**:通常是無核酸酶的水,以避免樣品被污染。
1st Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)的逆轉錄過程是將RNA模板轉換成cDNA的過程。這個過程通常包括以下幾個步驟:模板RNA的準備:確保RNA模板的質量和純度,可能需要使用DNase I來去除RNA樣品中的DNA污染。逆轉錄反應體系的配制:根據(jù)試劑盒的說明,將RNA模板、引物(如Oligo(dT)、隨機六聚體或基因特異性引物)、dNTPs、逆轉錄酶和緩沖液等組分混合在一起。逆轉錄酶的啟用:如果需要,可能要將反應體系預熱到一定溫度以達到逆轉錄酶。逆轉錄反應:在適宜的條件下,逆轉錄酶會根據(jù)RNA模板合成一條互補的DNA鏈。這個過程通常在一定的溫度范圍內進行,以保證酶的活性和反應的效率。反應的終止:逆轉錄反應完成后,通常通過加熱到較高溫度來終止反應,以防止cDNA的進一步合成。產(chǎn)物的純化:合成的cDNA可能需要通過某些方法(如柱層析或沉淀)進行純化,以去除未反應的dNTPs、RNA模板和酶等。cDNA的檢測和應用:合成的cDNA可以用于后續(xù)的PCR、qPCR、克隆、測序等實驗。泛素蛋白在細胞內發(fā)揮著調節(jié)蛋白質降解的作用,通過泛素-蛋白酶體途徑標記蛋白質,被蛋白酶體識別并降解。
5'DNA腺苷?;噭┖械倪m用性非常廣,主要包括以下幾個方面:1.**miRNA克隆**:該試劑盒可用于miRNA等3'端為羥基的RNA或單鏈DNA在克隆時,3'端添加接頭的制備。2.**高通量測序建庫**:在高通量測序中,該試劑盒可用于制備5'端腺苷?;揎椀膯捂淒NA,這些DNA可以用于測序文庫的構建。3.**PCR檢測**:在PCR檢測中,該試劑盒可以幫助制備具有特定5'端修飾的DNA片段,以適應某些PCR應用的需求。4.**單鏈DNA或RNA的5'端腺苷酰化**:試劑盒可以催化5'端磷酸化的單鏈DNA或單鏈RNA轉換成5'端腺苷?;疍NA或RNA,無論3'端是否進行了氨基化等封閉。5.**環(huán)狀DNA生成**:在不存在ATP的條件下,5'DNA/RNAAdenylase可以催化5'端磷酸化的單鏈DNA生成環(huán)狀DNA。6.**RNALigation**:該試劑盒包含的MthRNA連接酶,可以用于RNA的連接反應,尤其是在需要5'端腺苷?;疍NA作為連接接頭時。7.**科研實驗**:所有提到的產(chǎn)品信息都明確指出,5'DNA腺苷?;噭┖杏糜诳蒲袑嶒?,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途。全長跨膜蛋白A2AR,也就是腺苷受體A2aR(ADORA2A),是一種七次跨膜蛋白,屬于G蛋白偶聯(lián)受體。Recombinant Mouse IGFBP-3R Protein,hFc Tag
重組人泛素是一種蛋白質,它是一種含有76個氨基酸的高度保守的蛋白質,存在于細胞核和細胞質中。Recombinant Human GPC3/Glypican 3 Protein,His Tag
重組酶是一類能夠促進DNA分子之間同源或非同源序列的重組的酶。它們在分子生物學、遺傳工程和細胞生物學中扮演著重要角色。重組酶的作用機制通常涉及識別特定的DNA序列,催化DNA鏈的斷裂和重新連接,從而實現(xiàn)遺傳物質的重組。重組酶的主要類型和功能包括:1.限制性內切酶**(RestrictionEnzymes):這些酶可以識別特定的DNA序列并在這些序列處切割DNA鏈。它們是基因工程中常用的工具,用于DNA片段的精確切割和克隆。2.連接酶(Ligases):連接酶可以將兩個DNA片段連接在一起,形成穩(wěn)定的DNA分子。在DNA克隆和修復過程中,連接酶用于封閉切割位點產(chǎn)生的缺口。3.整合酶(Integrases):整合酶能夠將一段DNA序列插入到宿主基因組的特定位置。它們在基因和遺傳工程中具有應用。4.轉座酶(Transposase):轉座酶可以催化DNA片段從一個位置移動到另一個位置,這種機制在基因組中存在,并且在遺傳多樣性和進化中起著作用。5.**重組酶**(Recombinases):如RecA蛋白和Rad51蛋白,它們在同源重組中發(fā)揮作用,促進DNA雙鏈斷裂的修復和遺傳物質的重組。6.DNA聚合酶:這類酶在DNA復制和修復中添加新的核苷酸,以現(xiàn)有DNA鏈為模板合成新的DNA鏈。
在分子生物學實驗中,PCR技術是基因擴增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實驗提供了更直觀的監(jiān)測手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應緩沖液以及用于實時監(jiān)測的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯誤摻入的堿基,提高擴增產(chǎn)物的準確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯誤率更低,...