糖生物學(xué)中的應(yīng)用糖基化分析Endo H常用于分析蛋白質(zhì)的糖基化狀態(tài)。通過Endo H處理，可以將蛋白質(zhì)上的高甘露糖型糖鏈去除，從而簡化糖鏈結(jié)構(gòu)，便于進(jìn)一步分析。蛋白質(zhì)功能研究Endo H可用于研究糖基化對蛋白質(zhì)功能的影響。通過比較Endo H處理前后蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性，可以揭示糖基化在蛋白質(zhì)功能中的作用。藥物開發(fā)某些藥物的療效和藥代動(dòng)力學(xué)特性受其糖基化狀態(tài)影響。Endo H可用于研究藥物分子的糖基化修飾，為藥物設(shè)計(jì)提供重要信息。疾病診斷異常的蛋白質(zhì)糖基化與多種疾病相關(guān)。Endo H可用于檢測疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的糖基化改變，為疾病診斷提供新的思路。結(jié)論Endo H作為一種重要的工具酶，在糖生物學(xué)研究中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。深入理解Endo H的結(jié)構(gòu)與功能，將有助于揭示蛋白質(zhì)糖基化在生命過程中的作用，為相關(guān)疾病的診斷提供新策略。透明質(zhì)酸的生產(chǎn)可以通過動(dòng)物組織提取、微生物發(fā)酵或化學(xué)合成等方法進(jìn)行。Recombinant Human PDGFD Protein,His Tag

ERBB3,又稱HH3(人表皮生長因子受體3),是一種I型膜糖蛋白,是酪氨酸激酶受體ERBC家族的成員。ERBP家族成員作為表皮生長因子(LU)家族的生長因子的受體。在ERBP家庭成員中,因?yàn)樗幸粋€(gè)缺陷的激酶域。ERBB3在角化細(xì)胞、黑色素細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、成肌細(xì)胞和雪旺細(xì)胞中都有表達(dá)。單體ERbb3是一種低親和性的受體。ERBB3與ERBB2的異聚反應(yīng)形成高親和性受體復(fù)合物。與此相反,ERBB3同向聚合或異向聚合形成了一個(gè)低親和性的結(jié)合物。因?yàn)镋RBB3含有一個(gè)有缺陷的激酶域,ERBB2的激酶域負(fù)責(zé)通過異二重瓣受體啟動(dòng)酪氨酸磷酸化信號。研究發(fā)現(xiàn),ERBB3細(xì)胞質(zhì)區(qū)內(nèi)的三個(gè)離散氨基酸信號對ERBB2的轉(zhuǎn)導(dǎo)至關(guān)重要。ERBB3的細(xì)胞質(zhì)域也包含6個(gè)一致的結(jié)合主題,用于調(diào)節(jié)P85磷酸酶3激酶(PI3K)的HS2領(lǐng)域,以及一個(gè)豐富的一致的結(jié)合主題。ERBB3的細(xì)胞質(zhì)域也包含6個(gè)一致的結(jié)合主題,用于調(diào)節(jié)P85磷酸酶3激酶(PI3K)的HS2領(lǐng)域,以及一個(gè)豐富的一致的結(jié)合主題。ERBB3的細(xì)胞質(zhì)域也包含6個(gè)一致的結(jié)合主題,用于調(diào)節(jié)P85磷酸酶3激酶(PI3K)的HS2領(lǐng)域,以及一個(gè)豐富的一致的結(jié)合主題。表達(dá)區(qū)間及表達(dá)系統(tǒng)重組的人HR3/ERBB3蛋白表達(dá)自于C-端的HK293細(xì)胞和AVI標(biāo)記。里面有血清20-Thr643。分子量大約71.6Recombinant Human FZD10/Frizzled-10 Protein-VLP隨著年齡的增長，人體合成透明質(zhì)酸的能力會(huì)逐漸下降，導(dǎo)致皮膚中透明質(zhì)酸的含量降低。

重組型TEV蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強(qiáng)的穩(wěn)定性和特異性。rTEV是一種用來切除融合蛋白上親和標(biāo)簽的常用工具酶，具有很強(qiáng)的位點(diǎn)特異性，嚴(yán)格識別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點(diǎn)在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。普遍應(yīng)用的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH7.0，30℃時(shí)可達(dá)活性，但在pH6.0-8.5和溫度4-30℃范圍內(nèi)皆有活性（見表1），使得反應(yīng)條件的選擇可根據(jù)目的蛋白的情況而靈活變動(dòng)。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His標(biāo)簽，通過Ni-NTA樹脂去除，以達(dá)到純化目的蛋白的目的。產(chǎn)品性質(zhì)來源（Source）大腸桿菌外觀（Appearance）無色透明液體比活力（SpecificActivity）5U/μL活性定義（UnitDefinition）在1×rTEVBuffer（50mMTris，pH8.0，0.1mMEDTA，1mMDTT）中，30℃反應(yīng)1h，剪切>85%的3μg底物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。純化（Purification）Ni柱親和純化純度（Purity）≥95%（bySDS-PAGE）產(chǎn)品組分運(yùn)輸與保存方法冰袋運(yùn)輸。

表達(dá)與純化：重組抑肽酶在大腸桿菌中得到了高效表達(dá)，并通過純化過程獲得了純度達(dá)到95%以上的產(chǎn)品。活性驗(yàn)證：重組抑肽酶展現(xiàn)出與天然抑肽酶相似的酶學(xué)性質(zhì)，能夠有效抑制胰蛋白酶的活性。穩(wěn)定性測試：重組抑肽酶在推薦的儲(chǔ)存條件下（-20oC至2-8oC）具有長達(dá)24個(gè)月的穩(wěn)定性。討論生產(chǎn)優(yōu)勢：大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)具有成本低、表達(dá)速度快、易于擴(kuò)大生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。此外，重組抑肽酶無動(dòng)物源性，減少了病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)，提高了產(chǎn)品的安全性?？蒲袘?yīng)用：重組抑肽酶可廣泛應(yīng)用于科研領(lǐng)域，如蛋白純化、細(xì)胞培養(yǎng)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)等，提供了一種穩(wěn)定且可靠的實(shí)驗(yàn)工具。工業(yè)生產(chǎn)：在工業(yè)生產(chǎn)中，重組抑肽酶可用于重組蛋白藥物的生產(chǎn)過程中，防止蛋白酶降解，提高產(chǎn)品純度和產(chǎn)量。結(jié)論大腸桿菌表達(dá)的重組抑肽酶具有高純度、高活性和良好的穩(wěn)定性，是一種理想的科研和工業(yè)用蛋白酶抑制劑。其無動(dòng)物源性和高生產(chǎn)效率的特點(diǎn)，為生物技術(shù)領(lǐng)域提供了一種安全、經(jīng)濟(jì)的替代品。腸激酶作為研究工具，用于探索蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系，以及在蛋白質(zhì)工程中進(jìn)行蛋白質(zhì)的定點(diǎn)突變。

3C-like蛋白酶是中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS-CoV）等其它冠狀病毒的繁殖過程中極為重要的蛋白酶。它已成為人類在抗冠狀病毒領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)。本文基于計(jì)算生物學(xué)方法對與MERS-CoV同屬的蝙蝠冠狀病毒HKU4（HKU4-CoV）的43個(gè)肽類3C-like蛋白酶抑制劑分子，建立三維定量構(gòu)效關(guān)系（3D-QSAR）模型。在基于配體疊合的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)比較分子相似性指數(shù)分析法（CoMSIA）中的四個(gè)場組合（位阻場、靜電場、氫鍵供體場與氫鍵受體場）為比較好的模型（Q2=0.522，Rncv2=0.996，Rpre2=0.904；Q2：交叉驗(yàn)證相關(guān)系數(shù)，Rncv2：非交叉驗(yàn)證相關(guān)系數(shù)，Rpre2：驗(yàn)證集分子的預(yù)測值相關(guān)系數(shù)），并借助該模型通過分子對接（docking）與分子動(dòng)力學(xué)（MD）方法闡明了配受體結(jié)合作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：（1）基于比較好的CoMSIA模型基礎(chǔ)上的三維等勢圖形象地說明了分子基團(tuán)的位阻作用、靜電作用、氫鍵供體與氫鍵受體作用對分子生物活性的影響；（2）分子對接研究結(jié)果顯示了疏水性以及結(jié)晶水、氨基酸His166和Glu169在配體和受體結(jié)合過程中產(chǎn)生重要作用；常用的跨膜蛋白表達(dá)系統(tǒng)包括大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)等。Recombinant Human IL25/hIL17E Protein

PNGase F是一種酰胺水解酶，能夠特異性地裂解糖蛋白中由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復(fù)雜型的寡糖。Recombinant Human PDGFD Protein,His Tag

利用PCR技術(shù)擴(kuò)增得到編碼土豆羧肽酶抑制劑(carboxypeptidaseinhibitorfrompotato，CPI)活性多肽基因，克隆于表達(dá)載體pGEX一4T一1的多克隆位點(diǎn)中，得到重組質(zhì)粒pGCPI，測序后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到受體茵EscherichiacoliBL21中。重組茵經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，超聲波破茵后，通過谷胱甘肽sepheroseFF親和層析柱一步純化得到融合蛋白，純度大于97％。融合蛋白經(jīng)凝血酶切割并分離除去谷胱甘肽一S一轉(zhuǎn)移酶后得到純度大于98％的重組CPI，ELISA鑒定產(chǎn)物具有免疫原性，體外檢測表明其促進(jìn)纖溶的生物功能與天然CPI無明顯差異。Recombinant Human PDGFD Protein,His Tag