抑肽酶（Aprotinin），一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域。本研究探討了利用大腸桿菌（E. coli）表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)重組抑肽酶的方法，及其在科研和工業(yè)生產(chǎn)中的優(yōu)勢(shì)。引言抑肽酶，又稱胰蛋白酶抑制劑，是一種小分子蛋白，能有效抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶等絲氨酸蛋白酶的活性。在生物制藥、細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)研究中，抑肽酶的使用對(duì)于防止非特異性蛋白水解至關(guān)重要。傳統(tǒng)的抑肽酶主要來源于動(dòng)物，如牛肺，但存在外源病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)。因此，利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行重組抑肽酶的生產(chǎn)，可以提供一種無動(dòng)物源、高純度、質(zhì)量穩(wěn)定的替代品。材料與方法基因克隆與表達(dá)載體構(gòu)建：人源Ⅲ型膠原蛋白基因被克隆并構(gòu)建到適合大腸桿菌表達(dá)的質(zhì)粒載體中。大腸桿菌表達(dá)菌株的構(gòu)建：通過轉(zhuǎn)化，將構(gòu)建好的質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌宿主菌中，構(gòu)建表達(dá)菌株。發(fā)酵培養(yǎng)：利用發(fā)酵罐進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng)，以提升重組抑肽酶的產(chǎn)量。蛋白純化：通過多次柱純化獲得高純度的重組抑肽酶。PNGase F可以用于釋放糖鏈，進(jìn)而通過質(zhì)譜等技術(shù)進(jìn)行糖鏈的詳細(xì)結(jié)構(gòu)分析。Recombinant Cynomolgus IL-17A/CTLA-8 Protein,His-Avi Tag

PE-labeledHumanHLA-A*02:01&B2M&P53R175H(HMTEVVRHC)TetramerProtein,His-AviTag性能參數(shù)表達(dá)區(qū)間及表達(dá)系統(tǒng)（Source）PE-labeledHumanHLA-A*02:01&B2M&P53R175H(HMTEVVRHC)TetramerProteinisexpressedfromHEK293withHistagandAvitagattheC-Terminus.PE-labeledHumanHLA-A*02:01&B2M&P53R175H(HMTEVVRHC)TetramerisassembledbybiotinylatedmonomerandPE-labeledstreptavidin.ItcontainsGly25-Thr305(HLA-A*02:01),Ile21-Met119(B2M)andHMTEVVRHCpeptide.（Endotoxin）Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.制劑（Formulation）Suppliedas0.22μmfilteredsolutionin20mMPB,500mMNaCl,0.2%BSA(pH8.0).儲(chǔ)存條件Theproductshouldbestoredat-85~-65℃for3monthfromdateofreceipt.Recommendtoaliquottheproteinintosmallerquantitieswhenfirstusedandavoidrepeatedfreeze-thawcycles.Recombinant Human IL-18在生物制藥工業(yè)中，腸激酶用于生產(chǎn)重組蛋白質(zhì)藥物，通過專一性切割去除不需要的序列，提高藥物純度和活性。

分子特性：牛凝血酶的分子特性符合高比活度酶的標(biāo)準(zhǔn)，純度達(dá)到SDS-PAGE電泳無雜蛋白條帶的要求。穩(wěn)定性：牛凝血酶在室溫下運(yùn)輸穩(wěn)定，在2~8℃條件下可保存3年而酶活力未有變化。應(yīng)用效果：在1:2000的質(zhì)量比下，牛凝血酶能有效切割蛋白，適用于科研和工業(yè)生產(chǎn)中的重組融合蛋白特異性斷裂。討論科研應(yīng)用：牛凝血酶因其高比活度和專一性，在分子生物學(xué)、生物化學(xué)和生物工程制藥研究中作為工具酶具有重要價(jià)值。臨床：作為止血藥物，牛凝血酶在外科手術(shù)中的應(yīng)用超過100年，因其簡(jiǎn)便和高效而受到青睞6。生產(chǎn)優(yōu)勢(shì)：牛凝血酶的生產(chǎn)穩(wěn)定性好，純度高，不含有其他蛋白酶活性，適合大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用。

透明質(zhì)酸酶，英文名稱Hyaluronidase，一類能夠降低體內(nèi)透明質(zhì)酸活性的酶的總稱，結(jié)構(gòu)上由4個(gè)相同亞基構(gòu)成，每個(gè)亞基分子量接近14kDa，該酶是一種糖蛋白，包含5%的甘露糖和2.2%的葡萄糖胺。功能上該酶可隨機(jī)裂解透明質(zhì)酸、軟骨素和硫酸軟骨素中的β-N-乙酰己糖胺-[1→4]糖苷鍵。常與膠原酶聯(lián)合使用于降解細(xì)胞外基質(zhì)，從而從組織中分離活細(xì)胞。本品來源于牛睪丸，活力值為400–1,000units/mg，合適的pH值為4.5–6.0。產(chǎn)品性質(zhì)中文別名（ChineseSynonym）玻璃糖醛酸酶；玻璃酸酶英文別名（EnglishSynonym）Hyaluronoglucosaminidase；Hyaluronate4-glycanohydrolaseCAS號(hào)（CASNO.）37326-33-3來源（Source）牛睪丸分子量（MolecularWeight）~55kDa類型（Type）I-S外觀（Appearance）淡黃色至米黃色至褐色粉末通過使用PNGase F去除糖蛋白上的糖鏈，可以確定蛋白質(zhì)是否發(fā)生糖基化，以及糖基化位點(diǎn)。

α-凝血酶（α-Thrombin）產(chǎn)品性質(zhì)中文別名（Chinesesynonym）α-凝血酶；IIa因子；英文別名（Englishsynonym）α-Thrombin；FactorIIaCAS號(hào)（CASNO.）9002-04-4分子量（Molecularweight）37000daltons活力（Activity）≥3091.00NIHU/mg緩沖液組分（Buffer）50mMSodiumCitrate/0.2MNaCl/0.1%PEG-8000/pH6.5含量（Totalprotein）0.324mg運(yùn)輸和保存方法粉末冰袋運(yùn)輸，2-8℃保存；配好的液體，請(qǐng)于≤-60℃保存。使用方法（酶切體系）產(chǎn)品溶于水，配成的1000U/ml儲(chǔ)存液，根據(jù)使用量分配于不同的離心管中，凍存于?20℃保存，凝血酶對(duì)不同的融合蛋白切割效率是不一樣的，首先要進(jìn)行小量切割試驗(yàn)。比如固定融合蛋白10ug，加不同量的凝血酶（如0.1U,0.2U,0.5U,1U等),在不同的溫度(如4度,16度,室溫或37度等)下進(jìn)行試驗(yàn)。透明質(zhì)酸由D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺組成的雙糖單位構(gòu)成，分子量可以從數(shù)千到數(shù)千萬道爾頓不等。Recombinant Biotinylated Human KIR3DL3 Protein,His-Avi Tag

研究泛素-蛋白酶體途徑：重組人泛素可用于研究泛素化修飾和蛋白降解過程。Recombinant Cynomolgus IL-17A/CTLA-8 Protein,His-Avi Tag

性能參數(shù)表達(dá)區(qū)間及表達(dá)系統(tǒng)（Source）CynomolgusCD27Ligand/CD70ProteinisexpressedfromHEK293withHistagattheN-terminal.ItcontainsGln39-Pro194.[Accession|G7PYU6-1]分子量大?。∕olecularWeight）TheproteinhasapredictedMWof18.4kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto60-90kDabasedonTris-BisPAGEresult.（Endotoxin）Lessthan1EUperugbytheLALmethod.純度（Purity）>95%asdeterminedbyTris-BisPAGE活性（Activity）ELISAData:ImmobilizedCynomolgusCD27Ligand,HisTagat2μg/ml(100μl/well)ontheplate.DoseresponsecurveforCynomolgus/RhesusmacaqueCD27,hFcTagwiththeEC50of70.8ng/mldeterminedbyELISA.制劑（Formulation）Lyophilizedfrom0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).Normally8%trehaloseisaddedasprotectantbeforelyophilization.重構(gòu)方法（Reconstitution）Centrifugetubesbeforeopening.Reconstitutingtoaconcentrationmorethan100μg/mlisrecommended.Dissolvethelyophilizedproteinindistilledwater.Recombinant Cynomolgus IL-17A/CTLA-8 Protein,His-Avi Tag