Cas9核酸酶是一種向?qū)NA(guideRNA,gRNA)引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶,可催化雙鏈DNA的裂解。NLS-Cas9-EGFP在Cas9核酸酶的基礎(chǔ)上進(jìn)行改造,它在N端包含一個(gè)核定位信號(hào)(NLS),在C端包含一個(gè)EGFP和一個(gè)6X(His)序列。當(dāng)Cas9以NLS序列表達(dá)時(shí),Cas9RNP復(fù)合物在進(jìn)入細(xì)胞后立即定位到細(xì)胞核。不需要體內(nèi)轉(zhuǎn)錄或翻譯,提高了效率。此外,與其他系統(tǒng)相比,EGFP標(biāo)簽可作為追蹤或分類轉(zhuǎn)染細(xì)胞的報(bào)告器,通過熒光細(xì)胞分選(FACS)富集所需基因組編輯的細(xì)胞群。它降低了在基因組編輯應(yīng)用中與單細(xì)胞克隆和基因分型相關(guān)的人工和成本。產(chǎn)品特點(diǎn)如下:無DNA:沒有外部DNA添加;高切割效率:NLS確保Cas9蛋白高效進(jìn)入細(xì)胞核;低脫靶效應(yīng):Cas9核酸酶的瞬時(shí)表達(dá)提高了切割的特異性;節(jié)省時(shí)間:無需轉(zhuǎn)錄和翻譯;減少勞動(dòng)力:通過基于EGFP的FACS富集細(xì)胞群以進(jìn)行所需的基因組編輯。C端His標(biāo)簽增加了融合蛋白檢測(cè)方法的選擇??蓱?yīng)用于:通過體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA。通過電穿孔或注射與特定gRNA結(jié)合時(shí)的體內(nèi)基因編輯。通過基于EGFP的FACS富集細(xì)胞群以進(jìn)行所需的基因組編輯。儲(chǔ)存條件-25~-15℃保存,有效期1年。全長(zhǎng)A2aR蛋白可應(yīng)用于免疫、ELISA、SPR(表面等離子共振)、BLI(生物層干涉)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)等場(chǎng)景。Recombinant Cynomolgus IL-33 Protein,His Tag
性能參數(shù)表達(dá)區(qū)間及表達(dá)系統(tǒng)(Source)CynomolgusCD27Ligand/CD70ProteinisexpressedfromHEK293withHistagattheN-terminal.ItcontainsGln39-Pro194.[Accession|G7PYU6-1]分子量大?。∕olecularWeight)TheproteinhasapredictedMWof18.4kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto60-90kDabasedonTris-BisPAGEresult.(Endotoxin)Lessthan1EUperugbytheLALmethod.純度(Purity)>95%asdeterminedbyTris-BisPAGE活性(Activity)ELISAData:ImmobilizedCynomolgusCD27Ligand,HisTagat2μg/ml(100μl/well)ontheplate.DoseresponsecurveforCynomolgus/RhesusmacaqueCD27,hFcTagwiththeEC50of70.8ng/mldeterminedbyELISA.制劑(Formulation)Lyophilizedfrom0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).Normally8%trehaloseisaddedasprotectantbeforelyophilization.重構(gòu)方法(Reconstitution)Centrifugetubesbeforeopening.Reconstitutingtoaconcentrationmorethan100μg/mlisrecommended.Dissolvethelyophilizedproteinindistilledwater.Recombinant Human TLT-1/TREML1 Protein,hFc Tag研究泛素-蛋白酶體途徑:重組人泛素可用于研究泛素化修飾和蛋白降解過程。
3C-like蛋白酶是中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)等其它冠狀病毒的繁殖過程中極為重要的蛋白酶。它已成為人類在抗冠狀病毒領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)。本文基于計(jì)算生物學(xué)方法對(duì)與MERS-CoV同屬的蝙蝠冠狀病毒HKU4(HKU4-CoV)的43個(gè)肽類3C-like蛋白酶抑制劑分子,建立三維定量構(gòu)效關(guān)系(3D-QSAR)模型。在基于配體疊合的基礎(chǔ)上,發(fā)現(xiàn)比較分子相似性指數(shù)分析法(CoMSIA)中的四個(gè)場(chǎng)組合(位阻場(chǎng)、靜電場(chǎng)、氫鍵供體場(chǎng)與氫鍵受體場(chǎng))為比較好的模型(Q2=0.522,Rncv2=0.996,Rpre2=0.904;Q2:交叉驗(yàn)證相關(guān)系數(shù),Rncv2:非交叉驗(yàn)證相關(guān)系數(shù),Rpre2:驗(yàn)證集分子的預(yù)測(cè)值相關(guān)系數(shù)),并借助該模型通過分子對(duì)接(docking)與分子動(dòng)力學(xué)(MD)方法闡明了配受體結(jié)合作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:(1)基于比較好的CoMSIA模型基礎(chǔ)上的三維等勢(shì)圖形象地說明了分子基團(tuán)的位阻作用、靜電作用、氫鍵供體與氫鍵受體作用對(duì)分子生物活性的影響;(2)分子對(duì)接研究結(jié)果顯示了疏水性以及結(jié)晶水、氨基酸His166和Glu169在配體和受體結(jié)合過程中產(chǎn)生重要作用;
抑肽酶(Aprotinin),一種絲氨酸蛋白酶抑制劑,廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域。本研究探討了利用大腸桿菌(E. coli)表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)重組抑肽酶的方法,及其在科研和工業(yè)生產(chǎn)中的優(yōu)勢(shì)。引言抑肽酶,又稱胰蛋白酶抑制劑,是一種小分子蛋白,能有效抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶等絲氨酸蛋白酶的活性。在生物制藥、細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)研究中,抑肽酶的使用對(duì)于防止非特異性蛋白水解至關(guān)重要。傳統(tǒng)的抑肽酶主要來源于動(dòng)物,如牛肺,但存在外源病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)。因此,利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行重組抑肽酶的生產(chǎn),可以提供一種無動(dòng)物源、高純度、質(zhì)量穩(wěn)定的替代品。材料與方法基因克隆與表達(dá)載體構(gòu)建:人源Ⅲ型膠原蛋白基因被克隆并構(gòu)建到適合大腸桿菌表達(dá)的質(zhì)粒載體中。大腸桿菌表達(dá)菌株的構(gòu)建:通過轉(zhuǎn)化,將構(gòu)建好的質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌宿主菌中,構(gòu)建表達(dá)菌株。發(fā)酵培養(yǎng):利用發(fā)酵罐進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng),以提升重組抑肽酶的產(chǎn)量。蛋白純化:通過多次柱純化獲得高純度的重組抑肽酶。跨膜蛋白在宿主細(xì)胞中的表達(dá)水平通常有點(diǎn)低,研發(fā)困難,對(duì)蛋白表達(dá)生產(chǎn)平臺(tái)技術(shù)要求極高。
牛纖維蛋白原(Bovine Fibrinogen, BFg)作為一種多功能的凝血蛋白,在血液凝固和傷口愈合過程中扮演著關(guān)鍵角色。本綜述旨在探討牛纖維蛋白原的分子結(jié)構(gòu)、生物學(xué)功能以及其在生物醫(yī)學(xué)研究中的潛在應(yīng)用。引言纖維蛋白原是血液中的一種重要糖蛋白,它參與血液凝固的階段,通過轉(zhuǎn)化為纖維蛋白來形成穩(wěn)定的血栓。牛纖維蛋白原因其與人類纖維蛋白原的高同源性,常被用作研究模型,以深入理解纖維蛋白原的功能及其在疾病中的作用。材料與方法蛋白提取與純化:從牛血中提取纖維蛋白原,并通過多次沉淀和層析技術(shù)進(jìn)行純化。分子結(jié)構(gòu)分析:利用質(zhì)譜、X射線晶體學(xué)等技術(shù)解析牛纖維蛋白原的分子結(jié)構(gòu)。功能研究:通過體外實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型研究牛纖維蛋白原在血液凝固和細(xì)胞黏附中的作用。由于其在細(xì)胞信號(hào)傳遞中的重要性,A2aR成為了藥物開發(fā)的重要靶點(diǎn)之一。Recombinant Cynomolgus IGF1R/CD221 Protein,His Tag
透明質(zhì)酸(Hyaluronic Acid,簡(jiǎn)稱HA)是一種存在于人體和動(dòng)物組織中的天然高分子多糖,稱為糖醛酸或玻尿酸。Recombinant Cynomolgus IL-33 Protein,His Tag
標(biāo)題:牛凝血酶(Bovine Thrombin)的高比活應(yīng)用及其在生物醫(yī)學(xué)研究中的重要性摘要牛凝血酶(Bovine Thrombin),一種高比活度的絲氨酸蛋白水解酶,具有>2000 IU/mg的特異性活性,廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床,本文綜述了牛凝血酶的分子特性、在血液凝固中的作用機(jī)制以及其在科研和工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用。引言牛凝血酶是從牛血漿中提取的酶,分子量為37KD,由兩條肽鏈(31KD和6KD)通過二硫鍵組成。作為凝血過程中的關(guān)鍵酶,牛凝血酶催化纖維蛋白原(fibrinogen)水解,形成纖維蛋白單體,進(jìn)而促進(jìn)血凝塊的形成。由于其高度的序列專一性和水解效率,牛凝血酶不僅在生理止血中發(fā)揮作用,也作為分子生物學(xué)研究中的工具酶。材料與方法產(chǎn)品性質(zhì)分析:分析牛凝血酶的CAS號(hào)、分子量、比活度、外觀和純度等物理化學(xué)性質(zhì)。運(yùn)輸和保存方法:評(píng)估牛凝血酶的運(yùn)輸條件和長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性。使用方法:探討牛凝血酶在不同實(shí)驗(yàn)條件下的溶解、復(fù)溶和消化條件。Recombinant Cynomolgus IL-33 Protein,His Tag
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測(cè)手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,...