α-凝血酶(α-Thrombin)是一種高度特異性的絲氨酸蛋白酶,由凝血酶原(Prothrombin,II因子)經(jīng)蛋白水解活化而來。它在凝血過程中起著非常重要的作用,不僅能夠促使纖維蛋白凝塊的產(chǎn)生,還負(fù)責(zé)提供反饋信號(hào)來尋找前輔因子:V因子和VIII因子。也可以用作血管收縮劑。在體內(nèi),活化的X因子(FactorXa)切割凝血酶原,釋放出活性肽并將凝血酶切割成具有催化活性的α-凝血酶。α-凝血酶由一條輕鏈(Achain)(Mw~6,000)和一條重鏈(Bchain)(Mw~31,000)通過二硫鍵連接而成。某些情況下,α-凝血酶會(huì)發(fā)生自溶生成β-凝血酶和γ-凝血酶。β-凝血酶由對(duì)α-凝血酶A鏈水解并切割含有B鏈糖基化位點(diǎn)的小片段(B1,B2)組合而成。除了用于凝血研究之外,α-凝血酶還常用來位點(diǎn)特異性切割融合蛋白。基因重組時(shí)將凝血酶識(shí)別位點(diǎn)插入在目的蛋白與利于后續(xù)純化和/或表達(dá)的多肽或者蛋白之間,通過凝血酶切割表達(dá)的重組子即可釋放目的蛋白。凝血酶本身可通過親和層析技術(shù)快速去除。本品是由勻質(zhì)化的人凝血酶原經(jīng)由Xa因子,Va因子和磷脂活化而得,經(jīng)SDS-PAGE檢測確保凝血酶原的完全活化,并以NIH凝血酶的標(biāo)準(zhǔn)品為參考,提供的酶活力不少于3091NIHU/mg。酵母重組表達(dá)N-糖苷酶F(PNGase F)是一種通過酵母重組表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的酶。Glycoprotein (276-286)
Enterokinase,Recombinant,ExpressedinE.coli大腸桿菌表達(dá)重組腸激酶(不帶標(biāo)簽)注意事項(xiàng)1.本產(chǎn)品所講述的緩沖體系需要自行配置。2.不建議37℃條件下酶切,可能會(huì)有非特異性酶切出現(xiàn)。3.在>200mM咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油,酶切會(huì)受到影響。如果樣品溶液中含有上述成分的一種或多種,為獲得理想的酶切結(jié)果,請(qǐng)先將樣品透析到25mMTris-HCl8.0緩沖液中,然后再進(jìn)行酶切實(shí)驗(yàn);若不方便透析,可將樣品稀釋到咪唑含量在100mM以下,NaCl濃度在50mM以下,甘油濃度小于5%以下進(jìn)行酶切,酶的用量與蛋白比例不變;若干擾因素很多,且不便去除,需要適當(dāng)增加酶量或延長酶切時(shí)間,有助于得到理想的酶切效果。4.磷酸鹽對(duì)Enterokinase有很強(qiáng)的抑制作用,痕量的磷酸鹽都會(huì)嚴(yán)重影響Enterokinase的活性,因此在酶切體系內(nèi)不能存在磷酸鹽。5.本品是具有高酶活力重組腸激酶,切割蛋白使用量少,可不考慮除去。后續(xù)如需去除重組腸激酶,可用陰離子交換樹脂(如DEAE-FF)對(duì)其進(jìn)行洗脫。推薦洗脫條件如下:平衡緩沖液:25mMTris-HClpH8.0洗脫緩沖液:25mMTris-HClpH8.0,含100mMNaCl6.蛋白酶切效果不好,可適當(dāng)增加酶量,或適當(dāng)延長酶切時(shí)間。Recombinant Mouse BST2 Protein,hFc TagCB1受體分布于大腦和外周神經(jīng)系統(tǒng)中,與多種生理功能有關(guān),包括疼痛感知、食欲調(diào)節(jié)、情緒調(diào)節(jié)。
牛纖維蛋白原:止血中的關(guān)鍵成分及生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用摘要牛纖維蛋白原(Fibrinogen,F(xiàn)g),也稱為凝血因子I,是一種在血液凝固過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的血漿糖蛋白。本文討論了牛纖維蛋白原的結(jié)構(gòu)特性、提取方法以及各種生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用,突出其在研究和中的重要性。引言牛纖維蛋白原是一種分子量較大的糖蛋白(約340 kDa),由肝臟的肝細(xì)胞合成。它在血液凝固的然后一步中起著主要作用,在那里它被轉(zhuǎn)化為不溶性的纖維蛋白網(wǎng),穩(wěn)定了血凝塊。該分子由兩個(gè)相同的半部分組成,每個(gè)半部分包含三個(gè)多肽鏈(α、β和γ),通過二硫鍵連接。結(jié)構(gòu)特性纖維蛋白原的結(jié)構(gòu)完整性對(duì)其功能至關(guān)重要。每個(gè)分子的一半包含三個(gè)鏈(α、β、γ),具有不同的分子量(α約63.5 kDa,β約56 kDa,γ約47 kDa)和大約4%的碳水化合物。這些鏈通過二硫鍵相互連接,這對(duì)于維持蛋白質(zhì)的構(gòu)象和活性至關(guān)重要。提取和純化已經(jīng)開發(fā)了各種方法來提取和純化血漿中的牛纖維蛋白原。傳統(tǒng)方法包括鹽析、色譜法和乙醇沉淀。鹽析,特別是使用硫酸銨,是一種常見的方法,因其簡單有效而受到青睞。然而,通過這些方法獲得的纖維蛋白原純度可能會(huì)有所不同,需要進(jìn)一步的純化步驟,如離子交換色譜法,以實(shí)現(xiàn)更高程度的純化。
大腸桿菌系統(tǒng)通常是小分子細(xì)胞質(zhì)蛋白或結(jié)構(gòu)域表達(dá)的宿主。用大腸桿菌生產(chǎn)蛋白質(zhì),由于只需要簡單的培養(yǎng)基和條件,因此費(fèi)用低且方便。此外,除了無細(xì)胞表達(dá),它是速度的系統(tǒng),大腸桿菌倍增時(shí)間(約20min)比酵母(2h)、昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞都快。一般來說,在大腸桿菌中表達(dá)重組蛋白包括:1.將一個(gè)編碼目標(biāo)蛋白的質(zhì)粒導(dǎo)入宿主菌;2.培養(yǎng)細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長期;3.誘導(dǎo)蛋白表達(dá)。選擇合適的表達(dá)載體合適的宿主選定后,相應(yīng)的有許多工程化克隆位點(diǎn)和用于驅(qū)動(dòng)蛋白表達(dá)的非編碼序列的載體可用。啟動(dòng)子通常是可誘導(dǎo)的,以在細(xì)胞生長到合適的密度前阻止目標(biāo)蛋白表達(dá)。大部分載體還提供目標(biāo)蛋白與一系列蛋白標(biāo)簽構(gòu)建融合蛋白的選擇。常用的大腸桿菌表達(dá)載體分為以下兩大類:E.coliRNA聚合酶轉(zhuǎn)錄的載體全長A2aR蛋白可應(yīng)用于免疫、ELISA、SPR(表面等離子共振)、BLI(生物層干涉)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)等場景。
糖生物學(xué)中的應(yīng)用糖基化分析Endo H常用于分析蛋白質(zhì)的糖基化狀態(tài)。通過Endo H處理,可以將蛋白質(zhì)上的高甘露糖型糖鏈去除,從而簡化糖鏈結(jié)構(gòu),便于進(jìn)一步分析。蛋白質(zhì)功能研究Endo H可用于研究糖基化對(duì)蛋白質(zhì)功能的影響。通過比較Endo H處理前后蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性,可以揭示糖基化在蛋白質(zhì)功能中的作用。藥物開發(fā)某些藥物的療效和藥代動(dòng)力學(xué)特性受其糖基化狀態(tài)影響。Endo H可用于研究藥物分子的糖基化修飾,為藥物設(shè)計(jì)提供重要信息。疾病診斷異常的蛋白質(zhì)糖基化與多種疾病相關(guān)。Endo H可用于檢測疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的糖基化改變,為疾病診斷提供新的思路。結(jié)論Endo H作為一種重要的工具酶,在糖生物學(xué)研究中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。深入理解Endo H的結(jié)構(gòu)與功能,將有助于揭示蛋白質(zhì)糖基化在生命過程中的作用,為相關(guān)疾病的診斷提供新策略。在蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域,泛素蛋白可以作為一種標(biāo)簽或融合蛋白,用于提高目標(biāo)蛋白的可溶性、穩(wěn)定性或功能性。Recombinant Cynomolgus NTS1 Protein,His Tag
全長A2aR蛋白具有天然完整構(gòu)象,VLP(病毒樣顆粒)固有特征可以帶來更高的免疫原性。Glycoprotein (276-286)
牙花(GPC)是硫酸肝素蛋白聚糖的一個(gè)家族,它是由糖磷酸肌醇(GPI)錨連接在細(xì)胞表面的。在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)了這個(gè)家族的六名成員(GPC-GPC6)。已經(jīng)研制出幾種抗gpc3抗體。產(chǎn)品性質(zhì)同義詞Gpc3;dgsx;gbs1;sgbs1;sgbs1;工會(huì)編號(hào)P51654-1來源重組人的Gpc3/葡萄糖3蛋白表達(dá)于C-端的HK293細(xì)胞和AVI標(biāo)記。里面有GLN-25-559。分子量該蛋白質(zhì)的預(yù)測兆瓦為63.6kda。由于糖基化,蛋白質(zhì)遷移到42kda,80-135kda基于三聯(lián)頁面結(jié)果。純潔根據(jù)三-BIS頁面確定的90%產(chǎn)品用Lal法測定每一種蛋白質(zhì)。公式化在PBS(PPS)中用0.22離子過濾溶液凍干(PH7.4)。通常在凍干前添加5%海藻糖作為保護(hù)劑。重建離心管打開前。建議將其重組為超過100克/毫升的濃度(凍干時(shí)通常使用1毫克/毫升的溶液)。在蒸餾水中溶解凍干蛋白。Glycoprotein (276-286)
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,...