利用鈣成像技術(shù)記錄大腦活動(dòng),隨著功能光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展,神經(jīng)學(xué)家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況。功能鈣成像技術(shù)就是其中之一,其主要原理是將外源性熒光信號(hào)和生理現(xiàn)象耦合起來(lái)——通過(guò)熒光染料信號(hào)的改變反映細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度,以此細(xì)胞的功能狀態(tài)。目前它被廣泛應(yīng)用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)一群相關(guān)神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,從而判斷其功能活動(dòng)。該技術(shù)的出現(xiàn)使得科學(xué)家可以親眼目睹神經(jīng)信號(hào)在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)之中時(shí)間和空間上的傳遞穿梭。細(xì)胞內(nèi)鈣成像技術(shù)是通過(guò)向細(xì)胞內(nèi)載入鈣指示劑。美國(guó)鈣成像動(dòng)物行為學(xué)
解決鈣離子信號(hào)和BOLD信號(hào)轉(zhuǎn)換:功能核磁共振成像主要依賴于神經(jīng)元興奮后局部耗氧與血流振幅的不一致,通過(guò)測(cè)定血氧水平依賴性(BOLD)信號(hào)間接反映神經(jīng)元活動(dòng)。而鈣成像技術(shù)則是直接通過(guò)鈣離子濃度變化反映神經(jīng)元活動(dòng)。將這兩種技術(shù)聯(lián)用,需要考慮BOLD信號(hào)和鈣離子濃度變化之間的轉(zhuǎn)換。研究人員通過(guò)卷積函數(shù)比較好化的將鈣離子信號(hào)轉(zhuǎn)換為BOLD信號(hào),實(shí)現(xiàn)這兩者之間比較大的關(guān)聯(lián)。研究人員利用鈣離子指示劑工具小鼠發(fā)現(xiàn)在低頻刺激下(0.009–0.08赫茲),小鼠皮層鈣離子活動(dòng)變化與BOLD信號(hào)的一致性比較好。此外,鈣離子活動(dòng)變化與BOLD功能連接的關(guān)聯(lián)存在區(qū)域的依賴性:鈣離子和BOLD連接強(qiáng)度相關(guān)性在桶狀皮層與同側(cè)半球內(nèi)的腦區(qū)呈正相關(guān)關(guān)系(同步化),但與對(duì)側(cè)半球內(nèi)的腦區(qū)呈負(fù)相關(guān)。這種區(qū)域功能依賴性表明BOLD的連接來(lái)自于不同細(xì)胞群的協(xié)同神經(jīng)活動(dòng)。北京inscopix鈣成像參考價(jià)鈣成像顯微鏡由軟件控制的電子對(duì)焦方式,讓成像更加穩(wěn)定清晰。
nVista神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)是可以在自由活動(dòng)的動(dòng)物上進(jìn)行大范圍的動(dòng)態(tài)熒光成像的設(shè)備。通過(guò)nVist,您可以視覺(jué)化細(xì)胞活動(dòng),同步行為學(xué),以及長(zhǎng)期追蹤神經(jīng)環(huán)路的活動(dòng)。nVista被應(yīng)用于全球的研究機(jī)構(gòu)中,產(chǎn)生了影響力的大數(shù)據(jù)庫(kù)。主要特征:利用GCamp鈣離子探針進(jìn)行成像功能完整的數(shù)據(jù)采集軟件,實(shí)現(xiàn)對(duì)焦,調(diào)焦,行為同步化單細(xì)胞分辨率下,可同時(shí)捕獲成百上千神經(jīng)元活動(dòng)長(zhǎng)時(shí)間追蹤細(xì)胞,追蹤時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)數(shù)月電子對(duì)焦,保證視野范圍的恒定自由動(dòng)物行為學(xué):可運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)行為學(xué)測(cè)量方法,行為操作箱,迷宮,曠場(chǎng)等可進(jìn)行皮層,深部核團(tuán),以及腦干,中腦等區(qū)域的成像記錄動(dòng)物無(wú)需進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練鈣離子成像+自由活動(dòng)行為學(xué)1.錨定特殊細(xì)胞類(lèi)型,例如特定的receptor/promotor/geneticmarker2.單細(xì)胞的空間分辨率,可以分析細(xì)胞在空間內(nèi)的mapping和編碼信息3.動(dòng)物可在大范圍的曠場(chǎng)內(nèi)自由活動(dòng)4.長(zhǎng)時(shí)程追蹤同一細(xì)胞的放電規(guī)律變化:用于學(xué)習(xí),記憶,藥物成癮等研究。5.可對(duì)腦內(nèi)的深部核團(tuán)進(jìn)行記錄nVista神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)成像效果好。神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)技術(shù)參數(shù)專業(yè)的數(shù)據(jù)采集軟件Inscopix數(shù)據(jù)采集軟件可記錄成百上千個(gè)神經(jīng)元細(xì)胞。電子調(diào)焦功能,可通過(guò)軟件實(shí)現(xiàn)物理調(diào)焦。
指示劑是如何負(fù)載細(xì)胞,目前有三種在神經(jīng)元上填充鈣離子指示劑的方法,且都可以用于體內(nèi)和體外研究。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個(gè)神經(jīng)元中。此方法方便實(shí)驗(yàn)者控制單個(gè)神經(jīng)元內(nèi)的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負(fù)載神經(jīng)元,觀察對(duì)象為一群神經(jīng)元。盡管此方法可能導(dǎo)致一些膠質(zhì)細(xì)胞也被指示劑所標(biāo)記,但明顯提高了整體神經(jīng)元的標(biāo)記百分比,使研究者得以觀察到一群神經(jīng)元內(nèi)動(dòng)作電位相關(guān)性的活動(dòng)。第三種也較為常用,通過(guò)病毒轉(zhuǎn)染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑。鈣成像技術(shù)能直接測(cè)量神經(jīng)元和神經(jīng)元組織中動(dòng)態(tài)的鈣流動(dòng)。
細(xì)胞內(nèi)鈣離子作為重要的信號(hào)分子其作用具有時(shí)間性和空間性。當(dāng)個(gè)細(xì)胞興奮時(shí),產(chǎn)生了一個(gè)電沖動(dòng),此時(shí),細(xì)胞外的鈣離子流入該細(xì)胞內(nèi),促使該細(xì)胞分泌神經(jīng)遞質(zhì),神經(jīng)遞質(zhì)與相鄰的下一級(jí)神經(jīng)細(xì)胞膜上的蛋白分子結(jié)合,促使這一級(jí)神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生新的電沖動(dòng)。以此類(lèi)推,神經(jīng)信號(hào)便一級(jí)一級(jí)地傳遞下去,從而構(gòu)成復(fù)雜的信號(hào)體系,較終形成學(xué)習(xí)、記憶等大腦的高級(jí)功能。在哺乳動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)中,鈣離子同樣扮演著重要的信號(hào)分子的角色。靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度約為50-100nM,而細(xì)胞興奮時(shí)鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍,增加的鈣離子對(duì)于突觸囊泡胞吐釋放神經(jīng)遞質(zhì)的過(guò)程必不可少。眾所周知,只有游離鈣才具有生物學(xué)活性,而細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定,同時(shí)也受鈣結(jié)合蛋白的影響。細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種,其中包括電壓門(mén)控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體、煙堿型膽堿能受體(nAChR)和瞬時(shí)受體電位C型通道(TRPC)等。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過(guò)熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來(lái),以反映神經(jīng)元活性。該方法可以同時(shí)觀察多個(gè)功能或位置相關(guān)的腦細(xì)胞。鈣成像技術(shù)(calcium imaging)是指利用鈣離子指示劑或指示監(jiān)測(cè)組織內(nèi)鈣離子濃度的方法。美國(guó)鈣成像動(dòng)物行為學(xué)
可以對(duì)深部腦區(qū)、皮層區(qū)域等大部分腦區(qū)進(jìn)行鈣成像使用鈣離子指示蛋白。美國(guó)鈣成像動(dòng)物行為學(xué)
鈣成像技術(shù)(calciumimaging)是指利用鈣離子指示劑監(jiān)測(cè)組織內(nèi)鈣離子濃度的方法。在神經(jīng)系統(tǒng)研究方面,在在體(invivo)或者離體(invitro)實(shí)驗(yàn)中,鈣成像技術(shù)被廣泛應(yīng)用于同時(shí)監(jiān)測(cè)成百上千個(gè)神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,從而檢測(cè)神經(jīng)元的活動(dòng)情況)。有了鈣成像技術(shù),原本悄無(wú)聲息的神經(jīng)活動(dòng)就變成了一幅斑斕閃爍的壯觀影像,科學(xué)家終于可以親眼看著神經(jīng)信號(hào)在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)之中往來(lái)穿梭。因此,這種技術(shù)一出現(xiàn),就受到了全世界神經(jīng)科學(xué)家們的追捧,至今依然是人們觀測(cè)神經(jīng)活動(dòng)直接的手段。美國(guó)鈣成像動(dòng)物行為學(xué)