與IdeS不同，融合蛋白是通過將兩種或多種蛋白質(zhì)或肽的功能組合成一個(gè)量身定制的分子來創(chuàng)造的，以專門應(yīng)對挑戰(zhàn)。連接此類蛋白質(zhì)或肽結(jié)構(gòu)域的常見方法是包含柔性連接子。這些連接子通常富含甘氨酸，例如甘氨酸殘基（G），或甘氨酸殘基散布絲氨酸殘基（GS）以形成重復(fù)序列。這為連接子提供了足夠的靈活性，不會干擾連接蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域的功能。然而，這些新模式帶來了新的分析挑戰(zhàn)，需要新的工具來促進(jìn)表征和產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測。中級分析已成為分析單克隆抗體療法的標(biāo)準(zhǔn)方法，涉及將分子消化成幾個(gè)定義的亞基。它們足夠小，可以獲得高質(zhì)量的質(zhì)譜圖，并為產(chǎn)品質(zhì)量屬性提供特定領(lǐng)域的信息。由于G和GS連接子對常見蛋白酶的降解具有抗性，因此很難分離結(jié)構(gòu)域以進(jìn)行深入分析。因此，Genovis開發(fā)了GlySERIAS，不同于IdeS酶，一種消化柔性富含甘氨酸的連接子的酶。GlySERIAS可以分離不同的功能域，并實(shí)現(xiàn)對融合蛋白、多特異性抗體和含有富含甘氨酸的連接子的各種mAb片段進(jìn)行詳細(xì)表征的中級方法。FabRICATOR MagIC在mAb中級分析功能強(qiáng)大，可精確定位特定的修飾。青海FabRICATORIdeS蛋白酶抗體酶切

與IdeS不同，Genovis的GlySERIAS是一種獨(dú)特的酶，可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白連接子，例如Gly4Ser和GlyxSery（GS）以及聚甘氨酸（G）接頭。該酶能夠分離多功能融合蛋白的各個(gè)結(jié)構(gòu)域，以促進(jìn)表征并增加對這些分子的理解。融合蛋白的中級分析既可以降低整體樣品的復(fù)雜性，又可以對翻譯后修飾進(jìn)行結(jié)構(gòu)域特異性鑒定和監(jiān)測。為了改善連接子的去除，Genovis建議使用GlySERIASImmobilized。對于連接子表征，我們推薦GlySERIAS凍干。具有柔性接頭的獨(dú)特酶消化融合蛋白；中級方法可降低融合蛋白表征的復(fù)雜性；復(fù)雜融合蛋白的可靠且可重復(fù)的消化。Genovis的GlySERIAS酶切由甘氨酸或甘氨酸和絲氨酸殘基的重復(fù)序列組成的柔性連接子。該酶在天然反應(yīng)條件下具有活性，能夠?qū)?fù)雜的融合蛋白進(jìn)行中級表征。連接子區(qū)域同時(shí)在多個(gè)位點(diǎn)被消化，導(dǎo)致先前連接的組分分離?；钚园l(fā)生在pH7.6下，孵育時(shí)間可以根據(jù)所需的產(chǎn)物而變化。GlySERIAS是從噬菌體K克隆而來的，在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為18kDa。安徽IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)通過將酶偶聯(lián)到樹脂上，可以增加酶與蛋白質(zhì)的比率，從而可以進(jìn)一步加速反應(yīng)，以獲得更完整的蛋白質(zhì)的消化。

Genovis提供色譜柱形式的FabRICATOR（IdeS）酶，是在鉸鏈下方對IgG進(jìn)行柱上消化的固定化酶。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。酶解后，可以使用反相HPLC、質(zhì)譜或其他分析方法分析片段?？贵w消化和亞基生成的自動(dòng)化使生物反應(yīng)器的在線監(jiān)測應(yīng)用成為可能，例如，作為2D-LC-MS設(shè)置的一部分，將反應(yīng)器直接耦合到MS。這種自動(dòng)化的抗體亞基分析方法減少了操作人員的時(shí)間、樣品處理時(shí)間并提高了通量。

抗體由于其大小和復(fù)雜性，是一種難以表征的分子。偶聯(lián)藥物有效載荷是對抗Ai癥等疾病的一種有吸引力的方法，但進(jìn)一步增加了異質(zhì)性的復(fù)雜性和風(fēng)險(xiǎn)?？贵w藥物偶聯(lián)物 （ADC） 需要像任何其他基于 IgG 的生物制藥一樣進(jìn)行仔細(xì)和詳細(xì)的表征，并且需要適當(dāng)?shù)姆治龉ぷ髁鞒?。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶將ADC消化成其亞基，可以詳細(xì)表征這類復(fù)雜的藥物。Genovis的內(nèi)切糖苷酶 IgGZERO和 GlycINATOR 還可以研究完整的 ADC，但降低復(fù)雜性并提高分辨率。幾乎完全消化了Fc結(jié)構(gòu)域中的連接子，留下了接近均質(zhì)的Fc/2產(chǎn)物。

與IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶，可在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgA1，產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小時(shí)內(nèi)完成，并且由于酶的特異性，如果孵育時(shí)間延長，則不存在過度消化的風(fēng)險(xiǎn)。該酶在pH值6.5至8.0下具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可發(fā)揮活性?；钚允窃?7°C下，但也可以在室溫下使用增加孵育時(shí)間進(jìn)行消化。IgASAPSub1是從口腔鏈球菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為148kDa。IgASAPSub1凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個(gè)單位的小瓶中，用于消化1mgIgA1。該酶對具有突變鉸鏈區(qū)域的抗體（如 LALA 突變）具有活性。河北GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切

孵育時(shí)間為過夜（16-18小時(shí)），并且由于酶的特異性，沒有過度消化的風(fēng)險(xiǎn)。青海FabRICATORIdeS蛋白酶抗體酶切

與IdeS不同，Genovis的FabULOUS（SpeB）是一種半胱氨酸蛋白酶，可在來自多個(gè)不同物種和亞類的IgG的鉸鏈區(qū)域消化，產(chǎn)生Fab和Fc片段。人、小鼠、大鼠、山羊和綿羊的IgG被FabULOUS消化，產(chǎn)生Fab和Fc片段。人IgG1的主要消化位點(diǎn)是......KTHT...例如，制備的Fab片段可用于親和力研究、Fab糖基化研究和結(jié)構(gòu)研究。對來自多個(gè)物種和亞類的IgG有活性–上鉸鏈區(qū)域的消化物；快速-在一小時(shí)內(nèi)生成Fab和Fc片段；有效消化小鼠IgG1。FabULOUS來源于化膿性鏈球菌，在大腸桿菌中表達(dá)。FabULOUS的分子量為29kDa，該酶含有His標(biāo)簽。青海FabRICATORIdeS蛋白酶抗體酶切