與IdeS不同,Genovis的GingisREX(RgpB)是一種精氨酸特異性蛋白酶,可消化精氨酸殘基的C末端蛋白質(zhì),包括難以與其他酶消化的Arg-Pro鍵。該酶可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析。精氨酸殘基的特異性C-末端消化;在其他困難的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化;產(chǎn)生更長的肽-提高序列覆蓋率。GingisREX是一種半胱氨酸蛋白酶,可特異性地消化肽鍵C末端到精氨酸殘基,包括與脯氨酸相連的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。與胰蛋白酶消化相比,可生成更長的肽,胰蛋白酶消化可以通過高分辨率質(zhì)譜進(jìn)行分離和鑒定。這為自下而上方法的樣品制備提供了更多選擇,以實(shí)現(xiàn)替代的酶解曲線和更高的序列覆蓋率。GingisREX在賴氨酸上沒有活性,通常使用Arg-C觀察到。該酶在5.0-9.0的寬pH值范圍內(nèi)具有活性,它需要半胱氨酸并被鹽酸胍抑制。該酶是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。Genovis的GingisREX (RgpB) 是一種精氨酸特異性蛋白酶。江蘇FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)
Genovis提供FabRICATOR(IdeS)驗(yàn)證包。三種不同批次的凍干酶,用于驗(yàn)證基于FabRICATOR的分析方法。FabRICATOR(IdeS)是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶,可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體,產(chǎn)生均質(zhì)的F(ab')2和Fc片段。FabRICATOR酶已成為生物制藥行業(yè)中使用的工具,用于表征用于zhiliao用途的單克隆抗體、Fc融合蛋白、ADC和生物仿制藥。每批FabRICATOR酶在釋放前都經(jīng)過嚴(yán)格的酶活性、特性和純度測試。FabRICATOR驗(yàn)證試劑盒由三批凍干酶組成,使方法驗(yàn)證更容易。每批都附有一份分析證書。QC應(yīng)用的簡化方法驗(yàn)證;批次間變異性評估的理想形式;提高批量放行檢測性能的可信度。陜西FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)高特異性也意味著相同的消化方案可以作為平臺方法應(yīng)用于許多不同的抗體。
Genovis的FabRICATOR Fab2 (IdeS)試劑盒可消化兔 IgG,但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段,您需要另一種填料,而不是試劑盒中通常包含的 CaptureSelect? Fc。如果您對處理兔IgG感興趣,請聯(lián)系Genovis團(tuán)隊(duì),我們將在FabRICATOR Fab2試劑盒中提供與兔Fc相容的樹脂色譜柱。使用FabRICATOR的抗體消化的簡單性、速度和可重復(fù)性也意味著這種酶可以被用于質(zhì)量控制應(yīng)用。 QC方法需要執(zhí)行簡單,易于訓(xùn)練,高度可重復(fù),數(shù)據(jù)易于分析,這正是您使用FabRICATOR所得到的。 因?yàn)樗m用于一系列不同的IgG,這也意味著使用FabRICATOR進(jìn)行QC工作的客戶將能夠在未來的產(chǎn)品中使用它。 這顯示了這種酶在抗體消化中是多么的有效。
不同于IdeS,Genovis的FabDELLO 是一種蛋白酶,可在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人 IgG1,在兩小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段,無需還原條件。該酶對具有突變鉸鏈區(qū)域的抗體(如 LALA 突變)具有活性,并啟用中級 LC-MS 來表征具有突變鉸鏈的抗體的關(guān)鍵質(zhì)量屬性。FabDELLO 在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人 IgG1 (...KSCDK / THTCPPCP...),生成完整的 Fab 和 Fc 片段。FabDELLO 是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單個(gè)消化位點(diǎn)是人 IgG1 的三維結(jié)構(gòu)的結(jié)果,使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現(xiàn)額外的消化位點(diǎn)。FabDELLO在天然條件下具有活性,需要鈣離子的存在。在37°C和pH 7-8.5下獲得良好活性。FabDELLO 是從 Bdellovibrio 細(xì)菌克隆而來的,并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽,分子量為 32 kDa。孵育時(shí)間為過夜(16-18小時(shí)),并且由于酶的特異性,沒有過度消化的風(fēng)險(xiǎn)。
大多數(shù)zhiliao性抗體都攜帶人IgG1骨架,雙特異性和多特異性形式的開發(fā)正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性,例如單價(jià)結(jié)合、二硫鍵擾亂和配對Fc糖基化。傳統(tǒng)方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化,這需要優(yōu)化以極大限度地減少過度消化并獲得足夠的產(chǎn)量。Genovis的FabDELLO與IdeS酶具有不同的特異性,它在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人IgG1,并產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。為了證明FabDELLO的特異性活性,通過非還原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的選擇。所有底物均實(shí)現(xiàn)了完全消化,包括具有其他困難的LALA和LFLE突變的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精確和有效性能驗(yàn)證了其在生物制藥開發(fā)中的用途??梢杂肎enovis的GlySERIAS固定化酶(瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián))消化度拉糖肽。海南IdeS蛋白酶蛋白組學(xué)
獲得完整Fab和Fc抗體片段,用于結(jié)晶和高階結(jié)構(gòu) (HOS) 的 NMR 研究、結(jié)合研究等。江蘇FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)
Genovis酶的適應(yīng)性和更高的通量和自動化工作流程的中級方法,這是非常重要的。 隨著分析方法和儀器的改進(jìn),在表征實(shí)驗(yàn)室中有更大的能力進(jìn)行更多類型的分析,或者在工藝開發(fā)或QC實(shí)驗(yàn)室中有更先進(jìn)的分析儀器。 當(dāng)涉及到能夠支持大量樣本分析的活動時(shí),例如克隆篩選,工藝開發(fā)和驗(yàn)證以及穩(wěn)定性研究,這是非常好的。 此外,Genovis產(chǎn)品的效率、健壯性(Robust)和易用性使它們更容易應(yīng)用于這些類型的工作,而且,也適用于受控環(huán)境中的批次放行方法。Genovis的產(chǎn)品很好地支持這種類型的工作,這也促使Genovis不斷推出新產(chǎn)品和現(xiàn)有產(chǎn)品的不同形式,以支持客戶的工作。江蘇FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)
Genovis的FabDELLO在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人IgG1,并在兩小時(shí)內(nèi)生成均質(zhì)的Fab和F...
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