蛋白酶用于生成肽，用于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)。這些應(yīng)用包括蛋白質(zhì)組學(xué)和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導(dǎo)的偽影，傳統(tǒng)的蛋白酶并不總是理想的，因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶，可將蛋白質(zhì) C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比，所得肽更長(zhǎng)，并可能導(dǎo)致序列覆蓋率增加。質(zhì)譜分析中蛋白酶的特異性對(duì)于獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù)集和避免復(fù)雜的數(shù)據(jù)解釋至關(guān)重要。作為模型底物，使用胰島素氧化β鏈來(lái)比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個(gè)精氨酸和一個(gè)賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質(zhì)譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒(méi)有酶活性或其他額外活性，即使在長(zhǎng)時(shí)間孵育過(guò)夜后，酶與底物的比例也很高（1：5）。然而，ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性，但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1：20 和過(guò)夜孵育下，證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下，GingisREX未檢測(cè)到這種情況。數(shù)據(jù)證實(shí)了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性，并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化?？梢杂肎enovis的GlySERIAS固定化酶（瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)）消化度拉糖肽。四川FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種獨(dú)特的酶，可在鉸鏈區(qū)域下方的特定位點(diǎn)消化IgG，產(chǎn)生均勻的F（ab'）2和Fc/2片段。除IgG外，沒(méi)有其他底物是已知的。IgG在30分鐘內(nèi)消化，如果孵育時(shí)間延長(zhǎng)，則不存在過(guò)度消化的風(fēng)險(xiǎn)。由于FabRICATOR在生理反應(yīng)條件下消化IgG，因此保留了免疫反應(yīng)性。在37°C下獲得良好的活性，但也可以在室溫下使用較長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行消解。FabRICATOR可消化人類的所有亞類以及猴子、兔子和綿羊IgG的某些亞類。它對(duì)小鼠IgG2a和IgG3的活性有限-為了消化這些抗體物種，我們建議使用FabRICATORZ。FabRICATOR是從化膿性鏈球菌克隆而來(lái)的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為37725Da。FabRICATOR是IdeS的重組修飾形式，由GenovisAB開發(fā)，用于需要高標(biāo)準(zhǔn)和一致性的生物技術(shù)應(yīng)用。有一種檢測(cè)FabRICATOR酶的方法。了解有關(guān)山羊多克隆抗體Anti-FabRICATOR的更多信息。江蘇FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶Genovis的FabRICATOR MagIC可用于自動(dòng)分析和監(jiān)測(cè)不同的CQA。

IgA 消化酶的 IgASAP 家族特異性消化血清和分泌型人 IgA 以生成 Fab 和 Fc 片段。IgASAP Sub1 特異性消化人 IgA1，而 IgASAP Sub1+2 同時(shí)消化人 IgA1 和 IgA2m1。 Sub1+2 特異性消化鉸鏈上方的 IgA1 和 IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。為了獲得純和完整的Fab片段，使用Genovis的GingisKHAN Fab Kit進(jìn)行人IgG1的消化和抗體片段的后續(xù)純化。通過(guò)與 GingisKHAN 孵育，然后在 CaptureSelect? 人 CH1 離心柱上親和純化，在曲妥珠單抗上證明了完整的片段生成。樣品的酶和Fc部分存在于色譜柱的流通中，F(xiàn)ab很容易通過(guò)降低pH洗脫。使用該試劑盒，可以制備 0.5 mg 至 2 mg 人 IgG1 的 Fab 片段。Genovis同時(shí)提供IdeS酶的純化試劑盒。

Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS）試劑盒可消化兔 IgG，但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段，您需要另一種填料，而不是試劑盒中通常包含的 CaptureSelect? Fc。如果您對(duì)處理兔IgG感興趣，請(qǐng)聯(lián)系Genovis團(tuán)隊(duì)，我們將在FabRICATOR Fab2試劑盒中提供與兔Fc相容的樹脂色譜柱。使用FabRICATOR的抗體消化的簡(jiǎn)單性、速度和可重復(fù)性也意味著這種酶可以被用于質(zhì)量控制應(yīng)用。 QC方法需要執(zhí)行簡(jiǎn)單，易于訓(xùn)練，高度可重復(fù)，數(shù)據(jù)易于分析，這正是您使用FabRICATOR所得到的。 因?yàn)樗m用于一系列不同的IgG，這也意味著使用FabRICATOR進(jìn)行QC工作的客戶將能夠在未來(lái)的產(chǎn)品中使用它。 這顯示了這種酶在抗體消化中是多么的有效。使用GlySERIAS固定化酶和內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR消化度拉糖肽。

與IdeS不同，Romiplostim 由四個(gè)相同的血小板生成素 （TPO） 受體結(jié)合肽和一個(gè) Fc 片段組成，通過(guò)柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似，用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過(guò)夜，或用 GlySERIAS 凍干 1 小時(shí)并在 37°C 下過(guò)夜消化該蛋白質(zhì)。 鏈間二硫鍵被還原，以便于通過(guò)反相LC-MS進(jìn)行以下分析。與度拉糖肽的觀察結(jié)果類似，用固定化酶消化產(chǎn)生均質(zhì)的 Fc/2，剩下一個(gè)連接子殘基，此處為甘氨酸殘基。這有助于識(shí)別專門位于Fc區(qū)域的修改。用凍干酶消化 1 小時(shí)得到 Fc/2，剩余 4 個(gè)甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個(gè) TPO 肽連接。另一方面，這使得研究 Fc/2 和第yi個(gè)肽之間的連接區(qū)域成為可能，而不會(huì)受到第二個(gè)肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過(guò)夜消化產(chǎn)生 2 個(gè) Fc/2 變體，分別剩下 4 個(gè)和 1 個(gè)甘氨酸殘基。根據(jù)消化時(shí)間的不同，使用凍干產(chǎn)物釋放的肽以五或七種變體存在，接頭中殘留的甘氨酸殘基數(shù)量不同，而使用固定化產(chǎn)物釋放的肽以四種變體存在。FabDELLO 是從 Bdellovibrio 細(xì)菌克隆而來(lái)的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 32 kDa。江蘇FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

用于表征zhiliao用途的單克隆抗體、Fc融合蛋白、ADC和生物仿制藥。四川FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

用于IgA1和IgA2m1以上鉸鏈消化的凍干酶。與IdeS不同，Genovis提供的IgASAPSub1+2在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgA1和IgA2m1，產(chǎn)生完整且均勻的Fab和Fc片段。由于人IgA1的鉸鏈比IgA2的鉸鏈長(zhǎng)，因此IgA1和IgA2m1之間來(lái)自消化位點(diǎn)的氨基酸C末端不同。IgASAPSub1+2可消化分泌物和血清IgA。孵育時(shí)間為過(guò)夜（16-18小時(shí)），并且由于酶的特異性，沒(méi)有過(guò)度消化的風(fēng)險(xiǎn)。該酶在pH值為6.0至8.0時(shí)具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可產(chǎn)生活性。活性為37°C。IgASAPSub1+2是從丹毒梭菌克隆而來(lái)的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為131kDa。IgASAPSub1+2凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個(gè)單位的小瓶中，用于消化1mgIgA1和IgA2m1。四川FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)