冷凍電鏡技術(shù)，是用于掃描電鏡的很低溫冷凍制樣及傳輸技術(shù)(Cryo-SEM)，可實現(xiàn)直接觀察液體、半液體及對電子束敏感的樣品，如生物、高分子材料等。電鏡觀察：樣品經(jīng)過很低溫冷凍、斷裂、鍍膜制樣（噴金/噴碳）等處理后，通過冷凍傳輸系統(tǒng)放入電鏡內(nèi)的冷臺（溫度可至-185℃）即可進行觀察。其中，快速冷凍技術(shù)可使水在低溫狀態(tài)下呈玻璃態(tài)，減少冰晶的產(chǎn)生，從而不影響樣品本身結(jié)構(gòu)，冷凍傳輸系統(tǒng)保證在低溫狀態(tài)下對樣品進行電鏡觀察。冷凍電鏡技術(shù)之冷凍透射電鏡通常是在普通透射電鏡上加裝樣品冷凍設備。黃石透射電鏡技術(shù)應用

冷凍電子顯微鏡技術(shù)中單顆粒重構(gòu)技術(shù)：該技術(shù)也叫做單顆粒分析，主要適用于結(jié)構(gòu)具有全同性的生物大分子的結(jié)構(gòu)解析，蛋白質(zhì)的分子量通常要求在100KD以上，在顆粒數(shù)目足夠多的情況下，理論上其分辨率可以達到原子水平。該方法的圖像處理和三維重構(gòu)計算過程如下:從原始的電鏡照片中將顆粒圖像挑選出來，對其進行二維圖像對中、分類和平均，然后通過計算等價線的方法推算各分類圖的取向，利用傅里葉重構(gòu)法建立始三維結(jié)構(gòu)模型，通過對原始圖片或分類平均圖與結(jié)構(gòu)模型投影的匹配，優(yōu)化取向參數(shù)，進而得到更準確的三維結(jié)構(gòu)模型，如此反復對初始結(jié)構(gòu)模型進行修正，直到收斂獲得較終的結(jié)果。單顆粒重構(gòu)技術(shù)近年來發(fā)展迅速，應用普遍，不斷有文章報道利用此技術(shù)所獲得的大分子復合物的三維結(jié)構(gòu)。黃石透射電子顯微鏡技術(shù)特點冷凍電鏡技術(shù)之冷凍透射電鏡優(yōu)點：樣品臺穩(wěn)定;第四是全自動，自動換液氮，自動換樣品，自動維持清潔。

為什么要做冷凍透射電子顯微鏡技術(shù)服務？a.反應樣品溶液里結(jié)構(gòu)：如有機分子組裝成的微球、囊泡、膠束、納米管、片層、水凝膠結(jié)構(gòu)等（往往一般透射拍攝到的都是溶液揮發(fā)干了之后的結(jié)構(gòu)，但是這樣的結(jié)構(gòu)無論是形貌和尺寸和溶液里都有一定差別，現(xiàn)在好多文章的審稿意見都會需要這類結(jié)構(gòu)的透射照片在溶液里的真實形貌，說簡單了就是讓補一個冷凍透射）；b.不穩(wěn)定的納米結(jié)構(gòu)：比如經(jīng)不起強電子束照射的樣品（MOF、COF等若相互作用力結(jié)合的材料，如金屬配位、氫鍵相互作用、親疏水作用力、ππ堆疊等）在強電子束照射下結(jié)構(gòu)會坍塌，冷凍電鏡全程在-160℃下可以做到對樣品損害較?。籧.生物類分子好多都需要冷凍，因為生物分子本身都需要在水或者血液等存活，一些生物樣品構(gòu)筑的一些納米結(jié)構(gòu)，如納米微球、囊泡、膜、多孔材料等等。

冷凍電鏡技術(shù)原理之電子斷層掃描成像技術(shù)：通過在顯微鏡內(nèi)傾轉(zhuǎn)樣品從而收集樣品多角度的電子顯微圖像并對這些電子顯微圖像根據(jù)傾轉(zhuǎn)幾何關系進行重構(gòu)的方法稱為電子斷層掃描成像技術(shù)。該方法主要應用于細胞及亞細胞器，以及沒有固定結(jié)構(gòu)的生物大分子復合物(分子量范圍為800kD)，Zgao分辨率約2nm。冷凍電鏡的分類：目前我們討論的冷凍電鏡基本上指的都是冷凍透射電鏡，但是如果我們以使用冷凍技術(shù)的角度定義冷凍電鏡的話，冷凍電鏡主要可以分為冷凍透射電鏡、冷凍掃描電鏡、冷凍蝕刻電子顯微鏡。冷凍電鏡技術(shù)之冷凍透射電鏡通過對樣品的冷凍，降低電子束對樣品的損傷，從而得到更加真實的樣品形貌。

冷凍電鏡技術(shù)的獨特優(yōu)勢：1、更接近天然狀態(tài)：電子斷層成像技術(shù)則可用來研究一定厚度的亞細胞器在天然狀態(tài)下的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，不需要蛋白質(zhì)結(jié)晶。2、適用研究對象普遍：冷凍電鏡單粒子法既可以對具有對稱結(jié)構(gòu)的大分子進行研究，也適合于研究結(jié)構(gòu)不規(guī)則的大分子復合物，對于分子量的上限沒有限制，理論上>100kD的分子在成像技術(shù)能夠保證的情況下可以形成足夠的對比以進行圖像校正。冷凍電鏡技術(shù)作為一種重要的結(jié)構(gòu)生物學研究方法，它與X射線晶體學、核磁共振一起構(gòu)成了結(jié)構(gòu)生物學研究的基礎。冷凍電鏡技術(shù)，是用于掃描電鏡的很低溫冷凍制樣及傳輸技術(shù)。合肥低溫電子顯微鏡技術(shù)平臺

冷凍電子顯微鏡技術(shù)具有研究對象普遍、樣品需求量少、更接近生理狀態(tài)等獨特優(yōu)勢。黃石透射電鏡技術(shù)應用

冷凍電子顯微技術(shù)學解析生物大分子及細胞結(jié)構(gòu)的中心是透射電子顯微鏡成像,包括樣品制備、圖像采集、圖像處理及三維重構(gòu)等幾個基本步驟。三維重構(gòu)：數(shù)據(jù)處理的較終目的是為了獲得生物樣品的三維質(zhì)量密度圖，由二維圖像推知三維結(jié)構(gòu)的方法即三維重構(gòu)。其理論原理是在1968年由DeRosier和Klug提出的中心截面定理:一個函數(shù)沿某方向投影函數(shù)的傅里葉變換等于此函數(shù)的傅里葉變換通過原點且垂直于此投影方向的截面函數(shù)。由于樣品性質(zhì)的不同，圖像分析的方法也有差異。黃石透射電鏡技術(shù)應用

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